RNAi抑制胰腺癌细胞survivin表达的实验研究

目的用RNA i方法抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达。方法用免疫细胞化学技术和RT-PCR检测胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达,构建针对survivin基因的siRNA表达载体并进行酶切和测序鉴定,用脂质体转染胰腺癌细胞PANC-1,RT-PCR初步分析siRNA表达载体对survivin表达的抑制作用。结果survivin在胰腺癌细胞PANC-1中有较高表达,siRNA表达载体可以有效的抑制survivin的表达,抑制率达60%。结论用RNAi表达载体可以有效抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达。     

南充野生半夏遗传关系RAPD分析

目的比较南充野生芍药叶型、竹叶型半夏的遗传关系。方法使用22条随机引物,对上述两种叶型半夏基因组DNA进行RAPD扩增,比较它们的差异条带。利用Nei,Li方法计算两种半夏之间的遗传相似系数和遗传距离指数。结果22条引物可对南充野生芍药叶型、竹叶型半夏扩增出清晰条带。芍药叶型半夏基因组DNA扩增出157条带,竹叶型半夏基因组DNA扩增出161条带,芍药叶型半夏基因组DNA扩增的差异带3条,竹叶型半夏基因组DNA扩增的差异带7条。它们的遗传相似系数为0.9686;遗传距离指数为0.0314。结论利用RAPD技术证实了野生芍药叶型、竹叶型半夏的遗传关系存在差异,为进一步利用该技术进行半夏分类鉴定等研究奠定了基础。     

南充地区不同叶型半夏的指纹图谱分析

目的:比较南充地区野生芍药叶型和竹叶型半夏的指纹图谱并鉴定差异分子。方法:采用RAPD扩增、分析不同叶型半夏指纹图谱,并对典型特异扩增条带进行克隆和测序分析。结果:36条随机引物中有22条扩增出清晰条带。芍药叶型半夏基因组DNA扩增出157条带,竹叶型半夏基因组DNA扩增出161条带。芍药叶型半夏基因组DNA扩增的差异带3条,竹叶型半夏基因组DNA扩增的差异带7条。差异条带AOPN-14300经克隆测序证实为非编码区序列,Genbank登记号为EF417577。结论:南充野生不同叶型半夏基因组存在差异,已将部分典型差异基因组DNA片段进行克隆,为从分子水平鉴别本地区半夏奠定基础。     

耐多药结核杆菌与药物敏感菌株蛋白质比较

目的比较结核分支杆菌耐多药菌株与药物敏感菌株在蛋白表达水平的差异,为进一步研究结核杆菌耐药的分子调控机制提供依据。方法利用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分离耐多药结核分支杆菌和结核分支杆菌药物敏感菌株总蛋白质,通过计算机图像分析软件比较分析电泳图谱,切取部分差异蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析。结果发现27个蛋白质点具有明显差异,其中耐多药结核分支杆菌有6个蛋白质点明显表达上调。质谱分析发现,6个蛋白质点分别代表的蛋白质为无机焦磷酸酶、多肽脯氨酰基顺反同分异构酶A、延伸因子Tu、420个氨基酸的未知功能蛋白质、双加氧酶和转录调节蛋白(MoxR)。结论耐多药结核杆菌与药物敏感菌株在蛋白表达水平存在明显差异。     

重组p53基因在HepG2中的表达及作用

1. 材料与方法：(1)扩增、分离、纯化PXT1-p53[1]。(2)用磷酸钙-DNA共沉淀法将重组PXT1-p53导入HepG2细胞,加G418（400μg/L）筛选转染p53基因的阳性克隆。(3)用斑点杂交试验及间接免疫荧光技术检测p53在HepG2细胞中的表达[2]。(4)观察p53对HepG2细胞的作用：测定转染和未转染p53的HepG2细胞的生长曲线,比较分析其生长速度;用倒置显微镜、电镜观察转染和未转染p53的HepG2细胞形态改变特征,以确定细胞凋亡情况;用Hoechst 33258对HepG2细胞DNA染色,于荧光显微镜下观察染色结果;用琼脂糖凝胶电泳检测HepG2细胞DNA降解。2. …     

紫外线作用肿瘤细胞后基因表达谱的变化

目的分析紫外线(UV)对人原发性肝癌细胞株基因表达谱的影响。方法以限制片段差异显示聚合酶链反应(RFDD-PCR)技术分析紫外线照射人原发性肝癌细胞株前后基因表达谱的变化。结果获得表达序列标签共257条。其中差异表达序列标签116条,含开启表达序列标签38条,关闭表达序列标签23条,表达增强序列标签40条,表达降低序列标签15条。结论紫外线可引起人原发性肝癌细胞株基因表达谱发生变化,这些表达发生变化的基因在肿瘤生物学中的作用有待进一步研究。     

FTY720诱导1型1-磷酸鞘氨醇受体内化与其保守基序的关系研究

目的:研究FTY720诱导1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)内化与后者保守基序之间的关系.方法:以HA-S1P1(WT)-Myc-EGFP-N1融合表达载体为模板,应用重叠PCR的方法,将S1P1保守基序ERY突变为ENY,构建HA-S1P1(R142N)-Myc-EGFP-N1融合表达载体.测序鉴定后,经Polyfect转染入HEK293细胞.G418筛选出稳定细胞株.100 nmol/L FTY720处理3、6、12小时后,荧光显微镜下观察S1P1在HEK293细胞上的表达情况.结果:HA-S1P1(R142N)-Myc-EGFP-N1载体被成功构建,S1P1(WT)和S1P1(R142N)蛋白表达在HEK293稳定细胞株的表面,FTY720能诱导S1P1(WT)内化,但不能诱导S1P1(R142N)内化.结论:FTY720诱导S1P1内化与ERY保守基序有关.     

SLE患者淋巴细胞Fas、Bcl-2、p53与Cmyc基因表达

凋亡基因Fas、抗癌基因p53与癌基因Bcl-2、Cmyc等与细胞凋亡密切相关,与疾病的发生、发展有一定的关系,系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病,为了探讨SLE与凋亡基因、癌基因的关系,我们采用简易原位杂交法对正常人与患者淋巴细胞的4种基因成批同时进行检测,并分别设探针对照,dig-AP对照,报道如下.     

抗地高辛抗体的制备

我室按文献１的方法将Ｄｉｇ与ＢＳＡ偶联，制成完全抗原，然后用该抗原多次，多位点免疫家免５＋月，获得高特异性高效价的地高辛（Ｄｉｇ）抗体。抗Ｄｉｇ可用于Ｄｉｇ标记的所有的核酸、蛋白质及糖类的检测     

从人肝细胞文库中克隆Fas cDNA

为获取人FascDNA ,以探索Fas的功能作用 ,本文采用高滴度Dig -FascDNA探针噬菌斑影印杂交筛选技术 ,从人肝细胞cDNA文库 (HL -cDNA)中获得多个FascDNA克隆