8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞iNOS基因拷贝及Caspase-3表达的影响

目的 :观察 8 Br cAMP和槲皮素对Eca 10 9细胞iNOS基因拷贝及Caspase 3表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分成 3组 ,Br组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 5mol/L ;Q组 :加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;C组 :不加任何药物 ,只加入新培养液培养。 3组细胞同时培养 4 8h。采用原位斑点印迹法显示iNOS基因拷贝和mRNA的表达 ,采用细胞免疫化学技术显示Caspase 3的表达。结果 :Br和Q组较C组iNOS基因拷贝和mRNA表达信号较强。Br和Q组细胞内Caspase 3免疫反应 (IR)性较强 ,Br和Q组与对照组相比 ,存在显著性差异 (P 0 .0 1) ;Br组的Caspase 3 IR强于槲皮素组 (P <0 .0 1)。结论 :8 Br cAMP和槲皮素皆可上调iNOS基因的扩增和表达 ,最终可都通过上调Caspase 3的表达 ,诱导Eca 10 9细胞凋亡。     

天蚕素多肽分子对大肠埃希菌的抑制作用

目的 体外重组表达家蝇天蚕素成熟肽分子,观察其对临床分离的多重耐药大肠埃希菌（E.coli）体外抑制作用。方法 PCR克隆天蚕素成熟肽（Mature Cecropin,MC）基因,在MC基因前加入色氨酸密码子（TGG）连接于pET32a质粒的硫氧还蛋白基因后,构建重组质粒pET32a-MC。转化E.coli/BL21（DE3）中。IPTG诱导重组融合蛋白质Thioredoxin(硫氧还蛋白,Trx)-MC表达。融合蛋白质纯化后,经胃蛋白酶37℃水解。融合蛋白质中的天蚕素氨基酸序列具有抗胃蛋白酶能力不被水解,融合蛋白质其余部分被胃蛋白酶水解成小于2kD的碎片,使用透析袋分离、纯化、浓缩,获得天蚕素成熟肽分子。水解产物经Tricine-SDS-PAGE验证,获得一条与天蚕素分子大小相近的条带。采用液态生长抑制试验检验天蚕素分子对E.coli抑制作用,观察其对标准菌株ATCC 25922及临床分离多重耐药菌株的抑制活性。结果 MC成熟肽分子体外对E.coli标准菌株的抑制活性较强,标准菌株较多重耐药菌株受抑制得更快,但两者均能被天蚕素分子抑制。结论 天蚕素多肽分子对E.coli多重耐药菌株具有抑制作用。     

干扰素治疗过程中乙型肝炎病毒P基因区rtS213T单位点突变分析

HBV P基因区是病毒复制的主要功能单位,也是抗病毒药物开发的丰要靶标.P基因区变异是多位点的,发生突变以后对所用药物产生耐受,是阻碍其临床应用、降低其作用的丰要原因.HBV P基因区rtS213T作为伴随位点可与rtM204V位点联合突变,导致拉米夫定耐药,但也常可见到rtS213T位点单独变异,但rtS213T单位点变异是否与抗病毒治疗有关尚不清楚.本研究选取了380例慢性乙型肝炎(CHB)患者,对其中11例出现了rtS213T位点变异的患者进行用药史的观察分析,拟初步了解rtS213T单位点突变的临床意义.     

8-Br-cAMP对Hela细胞wtp53，mtp53，c-myc和iNOS基因表达的影响

目的探讨8-Br-cAMP对Hela细胞癌基因和抑癌基因等表达的影响.方法将培养的Hela细胞分为3组①8-Br-cAMP组(Br组) 加至8-Br-cAMP终浓度为2×10-5mol/L;②阳性对照组(60Co组)给予60Co 照射量4 Gy,720 s;③阴性对照组(C组)仅加含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液.各组细胞均培养48 h后,将1×107 ml-1细胞悬液滴加至预先处理过的硝酸纤维素膜和载玻片上.应用原位杂交和完整细胞原位斑点印迹技术分别检测3组Hela细胞中野生型p53(wtp53)、突变型p53(mtp53)、c-myc和iNOS基因的表达.结果8-Br-cAMP组与阳性对照组相比,差异无统计学意义,P>0.05;与阴性对照组相比,上调wtp53和iNOS基因的表达,同时下调mtp53和c-myc基因的表达,P<0.01.结论结果提示8-Br-cAMP可能通过调控Hela细胞癌基因和抑癌基因的表达对Hela细胞起到生长抑制和促分化作用.     

老年胃癌患者血清转化生长因子-β1、核转录因子-κB、热休克蛋白60水平与幽门螺旋杆菌感染的相关性研究

目的探讨老年胃癌患者血清转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、核转录因子-κB(NF-κB)、热休克蛋白60(HSP60)水平与幽门螺旋杆菌(Hp)感染的相关性。方法选取2017年2月至2019年8月河南中医药大学第一附属医院收治的92例老年胃癌患者作为研究对象,比较不同临床病理特征患者血清TGF-β₁、NF-κB、HSP60水平,不同感染程度Hp感染患者与未感染患者血清TGF-β₁、NF-κB、HSP60水平,探讨血清TGF-β₁、NF-κB、HSP60水平与老年胃癌患者Hp感染的关系及三者对老年胃癌患者Hp感染的预测价值。结果老年胃癌患者血清TGF-β₁、NF-κB、HSP60水平与肿瘤直径、分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。不同Hp感染程度患者血清TGF-β₁、NF-κB、HSP60水平均高于未感染患者(P<0.05),且随Hp感染程度的增加,血清TGF-β₁、NF-κB、HSP60水平也随之升高。Logistic回归分析发现,随着血清TGF-β₁、NF-κB、HSP60水平升高,老年胃癌患者Hp感染风险逐渐升高(P均<0.05)。血清TGF-β₁、NF-κB、HSP60水平联合预测老年胃癌患者Hp感染的曲线下面积为0.870,大于各指标单一预测的0.805、0.761、0.816,联合预测的最佳敏感性、特异性分别为71.43%、86.67%。结论老年胃癌患者血清TGF-β₁、NF-κB、HSP60表达与患者临床病理特征关系密切,且各指标表达水平与患者Hp感染呈正相关,通过检测各指标表达水平有助于预测Hp感染风险。     

OLYMPUS AU 640全自动生化分析仪常见故障分析及排除

我科室自2000年9月份购进OLYMPUSAU640全自动生化分析仪,使用至今已将近4年。在使用过程中,遇到了一些报警提示和仪器故障,都作了详细记录,现将其中较常见的报警提示、仪器故障的产生原因和排除方法加以总结,以期对大家有所帮助。1试剂探针常见故障原因及排除1.1试剂1探针①报警提示3183R1REAGENTPROBEUP／DOWNERROR[15](13,200,36),试剂1探     

槲皮素和8-Br-cAMP对Eca-109细胞抑癌基因表达的影响

目的 :探讨槲皮素和 8 Br cAMP对Eca 1 0 9细胞抑癌基因表达的影响。方法 :将培养的Eca 1 0 9细胞随机分成 3组 :①Br组 ,加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 1 0 -5mol/L ;②Q组 ,加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;③C组 ,不加任何药物 ,只加入新培养液培养。 3组细胞同时培养 4 8h后 ,分别提取mRNA。将野生型 (wt)p5 3、p1 6和p2 1WAF1cDNA分别制备成生物素标记的探针 ,以mRNA斑点印迹阵列显示Eca 1 0 9细胞wtp5 3、p1 6和p2 1WAF1基因的表达。将 3组细胞分别滴片 ,同时进行分化染色 ,记数分化和增殖细胞比率。结果 :与C组相比 ,Br组和Q组wtp5 3、p1 6和p2 1WAF1mRNA信号增强 ,P <0 .0 1 ;Br组和Q组分化细胞比率显著提高 ,P <0 .0 1。结论 :槲皮素和 8 Br cAMP皆可通过上调wtp5 3、p1 6和p2 1WAF1基因的表达 ,抑制Eca 1 0 9细胞增殖 ,诱导Eca 1 0 9细胞分化     

建设高质量高等教育体系的思考

党的十九届五中全会明确提出到2035年建成教育强国的发展目标,建设高质量教育体系是实现这一目标的重要一环。当前,我国高等教育已进入大众化阶段,开展高质量的教育教学已成为高等教育工作的迫切需要。高等教育高质量教育体系的建立需以立德树人为指导思想,构建高等学校分类体系,更新教育观念,科学合理分配财政投入,完善产教融合机制,加强高质量教师队伍建设。文章围绕新时代高等教育面临的问题、建设高质量高等教育体系的必要性、高质量高等教育体系的内涵、如何建设高质量高等教育体系等问题进行了探讨。     

生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF方法的建立及其初步应用

目的 建立生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF的方法(简称“系统ELISA血清CTGF法”),初步评估CTGF在诊断慢性肝炎(CHB)患者肝纤维化的临床价值.方法 用生物素化抗CTGF单克隆抗体和多克隆抗体建立生物素-链霉亲和素ELISA方法,测定CHB患者血清CTGF水平.264例CHB患者根据肝穿刺病理诊断...     

脑脉通联合骨髓干细胞动员对脑缺血大鼠神经细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL及caspase-3表达的影响

目的：观察脑脉通联合骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell, BMSC）动员对脑缺血大鼠神经细胞凋亡和凋亡相关蛋白Fas、FasL及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）表达的影响。 方法：202只SD大鼠分为假手术组、模型组、人重组粒细胞集落刺激因子（recombinant granulocyte colony-stimulating factor, rG-CSF）组、脑脉通组和脑脉通联合rG-CSF组（联合组）。采用改良线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制备局灶性脑缺血动物模型。rG-CSF组和联合组大鼠分别于术前3 d和术后2 d皮下注射10 μg/（kg·d） rG-CSF,脑脉通组和联合组灌胃脑脉通。术后早期（2 d和3 d）和后期（7 d和14 d）观察大鼠神经功能变化;腹主动脉取血,流式细胞仪测定外周血CD34阳性细胞数量;原位末端标记法观察神经细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测脑组织CD34、caspase-3、Fas和FasL蛋白表达情况。 结果：模型组大鼠外周血和脑组织CD34阳性细胞增加,分别于3 d和7 d时达到峰值;各治疗组尤其联合组脑组织CD34表达增强明显。各模型组大鼠神经功能评分降低,rG-CSF组7 d和14 d时的神经功能评分增加,联合组较rG-CSF组的变化显著。模型组脑组织2、3和7 d时的Fas、FasL及caspase-3蛋白表达增强;rG-CSF组2 d时FasL,各联合组Fas、FasL及caspase-3表达均减弱;联合组7 d和14 d时的Fas、FasL及caspase-3表达较rG-CSF组减弱;各实验组14 d时Fas、FasL及caspase-3表达较3 d时减弱。 结论：脑脉通和BMSC动员在改善大鼠脑缺血中、后期神经功能和抑制细胞凋亡方面存在交互效应,其作用可能与脑脉通使BMSC动员后早期的Fas和FasL表达下调,以阻抑caspase-3引起的凋亡瀑布反应,进一步抑制促凋亡基因Fas和FasL的表达有关。