中国成年人超重和肥胖与高血压发病关系的随访研究

目的 探讨中国成年人超重和肥胖与高血压发病的关系。方法 研究对象来自中国心血管病流行病学多中心协作研究和中国心血管健康多中心合作研究,两项研究分别于1998年和2000-2001年开展基线调查,并在2007-2008年开展统一的健康状况随访。共纳入13739名研究对象进入最终分析,按照BMI将研究对象分成四组:低体重组(<18.5 kg/m²)、正常体重组(18.5~23.9 kg/m²)、超重组(24.0~27.9 kg/m²)和肥胖组(≥28.0 kg/m²)。计算四组人群年龄标化的高血压累积发病率;并以正常体重组为参照,使用广义线性回归模型计算其他三组高血压发病风险RR值及其95%CI。结果 本研究平均随访8.1年,确诊新发高血压4271例,其中男性2012例,女性2259例。低体重组、正常体重组、超重组和肥胖组的年龄标化高血压累积发病率分别为21.6%、30.6%、42.4%和50.8%,随着BMI的升高而升高(趋势P<0.001)。以正常体重组为参照调整协变量,男性低体重组、超重组和肥胖组的RR值(95%CI)分别为0.78(0.64~0.95)、1.22(1.13~1.30)和1.28(1.16~1.42);女性分别为0.89(0.77~1.03)、1.16(1.09~1.23)和1.28(1.18~1.38)。结论 我国超重和肥胖者的高血压发病风险明显升高,应加强对超重和肥胖人群的高血压防控。     

CDK1靶向shRNA质粒载体的构建及鉴定

目的:设计并构建CDKI -shRNA质粒表达载体,转染肝癌HepG2细胞,验证shRNA对肝癌HepG2细胞CDK1基因的沉默效应,便于进一步研究CDK1的功能.方法:设计针对CDK1 mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体片段进行连接、转化.经测序等方法鉴定重组克隆.将重组载体质粒经脂质体包裹转染肝癌HePG2细胞,realtime PCR及Western blot检测RNA干扰效果.结果:重组克隆经测序证实插入的序列正确,realtime PCR及Western blot检测证实设计的3条RNA干扰序列有效沉默了肝癌HepG2细胞中的内源性CDKI.结论:所制备的CDK1-shRNA在肝癌HepG2细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应,以CDK1为靶向的shRNA能够有效下调CDK1基因的表达,对周期依赖激酶CDK1功能的研究奠定基础.     

医学研究生细胞生物学课程改革实践与探讨

细胞生物学是一门实践性很强的学科,在医学研究领域的应用非常广泛。因此,对医学研究生一年级学生的细胞生物学课程进行了改革。改革后的课程体系主要包括细胞生物学基础理论以及基本实验技能的掌握、前沿科学相关细胞生物学知识的跟踪以及相关高级技术的熟悉、通过未来课题设计培养学生系统科研思维能力等方面。通过课程改革加深了基础知识的掌握,了解了学科前沿动态,提高了学生的实验技能,培养了学生科研的自主能动性,激活了学生的科研思维和研究兴趣,提高了学生学习的积极性,有利于学生科研创新性的培养,为研究生进入课题研究奠定了坚实的基础。     

吉非替尼对A549细胞增殖及细胞周期、凋亡的作用

目的:观察吉非替尼对人非小细胞肺癌A549的生长增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响.方法:用5-40μmol/L浓度范围内的吉非替尼和A549细胞共培养24、48、72h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测吉非替尼对细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测其对细胞凋亡及细胞周期分布的影响;利用抗Capspase-3 的ELISA(酶联免疫吸附)法检测是否发生细胞凋亡.结果:在5-40μmol/L浓度范围内,吉非替尼对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,以40μmol/L作用72h时的抑制率最高.流式细胞仪检测显示10μmol/L-40μmol/L的吉非替尼作用可使细胞发生G0/G1期阻滞,但即使作用48h也未发现凋亡细胞.ELISA法显示48h内,吉非替尼组与正常细胞组的Capspase-3浓度无统计学差异,但作用72h时出现凋亡.结论:吉非替尼在5-40μmol/L浓度下作用时间小于48h时,其对A549细胞的增殖抑制可能是通过阻滞A549细胞于G0/G1期而非引起细胞凋亡实现的,但作用时间达到72h时,其可以诱导A549发生细胞凋亡.     

探讨CYP2C9及VKORC高活性对华法林抗凝的影响及对策

目的探讨细胞色素P450 2C9酶（CYP2C9）及维生素K环氧化物还原酶（VKORC）高活性患者对心瓣膜置换术后华法林抗凝的影响及对策。方法 2010年2月至2013年5月郑州大学第一附属医院心外科对CYP2C9及VKORC高活性40例患者行心瓣膜置换术,其中男18例、女22例,年龄40～51（45.18±2.93）岁。行二尖瓣置换术（MVR）18例,二尖瓣置换＋三尖瓣成形术（TVP）14例,双瓣膜置换术（DVR）8例。根据术前是否行CYP2C9和VKORC1基因多态性检测,分为两组,A组：20例,术前未行CYP2C9和VKORC1基因多态性检测;B组：20例,术前已行CYP2C9和VKORC1基因多态性检测。术后定期复查国际标准化比值（INR）,调整华法林用量,统计达到预期值时用药时间及并发症。随访时间3～12个月,出院后,每月1次电话随访,记录每次复查INR值、并发症发生及恢复情况。结果 A组2例术后发生脑梗死,2例发生腘动脉血栓,1例发生肺栓塞,1例出现瓣环血栓形成;14例分别于第15～20 d达到预期INR值,无明显血栓并发症。术后3个月行CYP2C9和VKORC1基因多态性检测,其中17例为CYP2C9＊1/＊1（＊2CC/＊3AA）阳性,VKORC1-1639 GA阳性;3例为CYP2C9＊1/＊1（＊2CC/＊3AA）阳性,VKORC1-1639 GG阳性。B组患者术后第2 d给予华法林推荐量的同时给予阿司匹林（100 mg/d）及低分子肝素（0.4 ml/d）,分别于第5～9 d达到华法林预期值,后停用阿司匹林及低分子肝素;随访6个月无明显血栓并发症,仅1例出现鼻腔出血并发症,经鼻孔填塞后好转。结论术前行CYP2C9和VKORC1基因多态性检测,对心瓣膜置换术后华法林抗凝治疗有重要的指导意义。     

DNA多态性的研究进展

1　ＤＮＡ多态性研究的三大阶段1.1　第一代基因组遗传标记—限制性片段长度多态性 (ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ,ＲＦＬＰ)　ＲＦＬＰ是 70年代中后期建立起来的遗传标记系统。ＲＦＬＰ在发生上可以分为单碱基突变型和顺序重排型两种类型[1] 。所谓单碱基突变型是由于在某一限制性内切酶识别位点上 ,因发生单碱基替换而引起该限制性内切酶识别位点丢失 ,或在无切点的位点上形成新的限制性酶识别位点。顺序重排型是指因ＤＮＡ顺序发生重复、插入或缺失等改变 ,导致两个限制性内切酶位点之…     

阿片对人遗传物质的损伤效应

目的··：了解阿片对人体产生的细胞遗传学效应。方法··：运用微量人全血培养方法研究了阿片滥用者的外周血淋巴细胞染色体畸变、微核形成及细胞分裂指数。结果··：滥用阿片能够诱发人血淋巴细胞染色体畸变,提高微核形成率,并可使细胞分裂指数下降。随着滥用史的延长,其损害作用具有显著增加的趋势。结论··：阿片是人血淋巴细胞染色体的损伤因子。     

保留主动脉瓣根部手术治疗马方综合征的近期疗效CSCD

目的 评价保留主动脉瓣根部手术治疗马方综合征的近期疗效.方法 54例患者,男38例,女16例;年龄20～50岁,平均（31.26±7.80）岁.术前均根据1996年制定的Ghent标准确诊为马方综合征.术前超声心动图示主动脉瓣反流微量5例,少量12例,中量22例,大量15例.根据影像学资料及术中探查,决定是否保留主动脉瓣,其中行Bentall＋二尖瓣成形（MVP）手术2例,Bentall＋二尖瓣置换（MVR）手术4例,Bentall＋全弓＋象鼻手术2例,Bentall手术27例,David＋MVP手术6例,David手术13例.根据术式分为Bentall手术组35例和David手术组19例.随访12～48个月,比较两组手术前、后和不同方案的疗效差异.结果 手术死亡2例,Bentall手术组1例死于术后无法控制的大出血,,David手术组1例死于术后肺部感染、多脏器功能衰竭.52例恢复良好,术后心包及纵隔引流310～820 ml;住院11～29天,平均（16.43±4.38）天.Bentall手术组体外循环（141.09±15.48）min,主动脉阻断（93.82±15.06）min.David手术组体外循环（186.32±23.96）min,主动脉阻断（140.21±22.13）min.术后两种术式的射血分数、左心室径、左心室收缩期末容量、左心室舒张末期容量、短轴缩短率改善与术前相比差异有统计学意义（P〈0.05）,但组间差异无统计学意义（P〉0.05）,术后早期并发症发生比例组间差异无统计学意义,晚期并发症Bentall手术组明显高于David手术组.术后David手术组主动脉瓣反流程度较术前明显减轻（1.37±0.95对2.53±0.84,P〈0.05）.随访期间David手术组1例主动脉瓣重度关闭不全行主动脉瓣置换术;Bentall手术组1例再发腹主动脉夹层手术治疗,6例因华法林抗凝出现出血、栓塞并发症.结论 保留主动脉瓣的根部处理治疗马方综合征的近期疗效满意.     

基因表达的系统分析在基因组转录谱研究中的应用

基因表达的系统分析技术 (SAGE)是一种全面分析基因表达模式的实验方法。该方法的原理是基于分离出每一m RNA所特有的长 9bp～ 14 bp的标签并将其串联起来进行克隆和测序。该方法不仅可以给出我们一个全面的特定细胞或组织的基因表达谱 ,而且还可以通过对两组处于不同环境中的同一类型细胞的基因表达谱进行比较 ,帮助我们发现那些由于环境的变化而表达发生改变的基因。本文拟就这一高通量方法的原理、应用、不足及其改进等方面的研究情况作以综述     

先天性长QT综合征相关HERG基因A561V突变体及其真核表达载体的构建及表达

目的在收集的一个先天性长QT综合征（congenital long QT syndrome，LQTS）家系中发现HERG基因A561V突变，探讨HERG基因A561V突变体及其真核表达载体的构建方法，并观察其在真核细胞中的表达。方法采用克隆载体快速PCR法构建HERG基因A561V突变体PGEM-HERG-A561V，并应用限制性内切酶法将突变体构建到真核表达载体pcDNA3中，用Superfect转染试剂将野生型pcDNA3-HERG及pcDNA3-HERG-A561V突变体与荧光真核表达载体pRK5-GFP共转染至HEK293细胞，用细胞免疫荧光化学法检测蛋白质表达。结果构建的突变体经DNA直接测序示HERG基因cDNA1682位点碱基C变为T，构建的突变体在HEK293细胞中成功表达，其蛋白质位于细胞浆中及细胞膜上，而野生型基因的蛋白质位于细胞膜上。结论用克隆载体快速PCR法构建并表达了HERG基因A561V突变，为突变基因的进一步功能研究奠定了基础。