肿瘤标志物CEA和CA19-9在消化系统恶性肿瘤中的诊断效率评价

目的以病理诊断为金标准，运用流行病学理论较全面分析与评价血清CEA和CA19-9对消化系统肿瘤的诊断效率和临床意义。方法应用电化学发光免疫分析法测定消化系统272例恶性肿瘤及167例良性疾病患者血清CEA和CA19—9水平，对其敏感性、特异性、准确性、阳性预测值、阳性似然比和优势比进行比较分析。结果单检CEA和CA19-9诊断消化系统恶性肿瘤的敏感性分别为34.2％和45.2％，联检49．3％；特异性80.8％和60．5％，联检59.3％；准确性由单检的51．9％（CEA）和51．0％（CA19-9）提高至53．1％（CEA和CA19—9）；阳性预测值74.4％和65．1％；阳性似然比1.8和1.1;优势比2.19和1.260结论消化系常见肿瘤中，CEA诊断胰腺癌的敏感性最高，胆囊胆管癌和结直肠癌次之；特异性和阳性似然比以胆囊胆管癌最高。CA19-9诊断胆囊胆管癌敏感性最高，胰腺癌次之；特异性、阳性预测值、阳性似然比均以胰腺癌最高，并且诊断胰腺癌的优势比大于10。除胃癌及食道癌外，CA19．9敏感性高于CEA，联合检测CEA和CA19-9可提高诊断敏感性和准确性，但就阳性预测值和阳性似然比而言，单检CEA和CA19．9对某些器官肿瘤的诊断意义更大。     

原发性胆汁性肝硬化的动物模型

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种女性多发的自身免疫性肝病,其具体的发病机制尚不清楚。随着对PBC的深入研究,越来越多的动物模型得以构建,包括基因突变型和异物诱导型动物模型。这些模型的构建,对研究PBC的发病机制有着十分重要的作用。此文就现阶段对PBC动物模型的研究作一综述。     

尿毒症患者群体反应性抗体的种类与频率

目的研究尿毒症患者群体反应性抗体（PRA）的种类与频率。方法分析2008-2013年本院门诊及住院的2727例尿毒症患者PRA检测结果,血清样本以ELISA方法检测HLA I类、Ⅱ类混合抗原板。将检测结果分为阴性组（PRA〈10%）和阳性组（PRA≥10%）,采用SPSS21.0软件分析不同性别、年龄组患者PRA阳性率的差异。结果2727例患者中,PRA阳性组366例,PRA阴性组2361例,阳性率13.4%。其中,男性1840例,阳性率为10.1%（186/1840）,女性887例,阳性率为20.3%（180/887）,男女阳性率差异有统计学意义（χ^2=53.42,P〈0.01）;各年龄组阳性率比较,结果显示少年组为4.8%（4/83）,青年组为10.0%（85/854）,中年组为16.1%（268/1660）,老年组为6.9%（9/130）,各年龄组的阳性率差异有统计学意义（χ^2=29.44,P〈0.01）。ELISA方法能检出HLA-A、B、CW、DR、DQ位点特异性抗体20种、27种、5种、13种和7种。各位点出现频率较高的抗体种类分别是A2、A25、A23、A24、A66;B7、B13、B57、B44、B60;CW4、CW 6、CW 10、CW 7、CW8;DR11、DR1、DR7、DR9、DR12;DQ6、DQ5、DQ7、DQ8、DQ2,频率分布与中国人群HLA抗原频率分布不尽一致。结论尿毒症患者PRA阳性率女性显著高于男性,不同年龄组阳性率也有显著差异,以少年组最低,中年组最高。针对不同等位基因的HLA抗体产生频率不同。     

自身免疫性肝炎的病因和发病机理

自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)是一组原因未明、伴血清自身抗体、高球蛋白血症和肝脏慢性炎症及纤维化组织学改变的反应性肝病。迄今，AIH的病因和发病机制尚未完全阐明．其致病过程可能涉及到遗传、病毒感染、免疫异常等多因素参与。     

人源M2三联体靶抗原检测抗体诊断原发性胆汁性肝硬化

目的 探讨用人源M2三联体靶抗原检测M2抗体在原发性胆汁性肝硬化诊断中的应用价值。方法 间接免疫荧光法检测肝病患者，自身免疫病患者和健康体检者血清中的抗线粒体抗体。以人源M2三联体靶抗原建立的ELISA法与以猪心肌纯化组分作为抗原的免疫印迹法商业试剂盒检测M2抗体。结果 20例原发性胆汁性肝硬化（PBC）均检出M2抗体，28例不明原因肝病6例M2抗体阳性。ELISA法的敏感性和特异性优于经典的间接免疫荧光法和商业试剂盒。结论 以人源M2三联体靶抗原建立的ELISA法具有很高的特异性和敏感性，为原发性胆汁性肝硬化的诊断提供了简便、快速而有效的手段。     

原发性胆汁性肝硬化的动物模型

原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC) 是一种慢性炎症、器官特异性的自身免疫性肝病,以高滴度抗线粒体抗体(antimitochondrial antibodies,AMA)和肝内小胆管特异损伤为特征。位于线粒体内膜上参与能量代谢的丙酮酸脱氢酶复合体(pyruvate dehydrogenase complex,PDC)、侧链二氧酸脱氢酶复合体和2-氧戊二酸脱氢酶复合体是该病自     

实时荧光定量PCR测定人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因表达

目的 建立检测人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因表达含量的实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR法,探讨其在健康对照者、乙型病毒性肝炎肝硬化患者及原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达状况.方法 设计TRAIL基因的特异性引物和TaqMan-MGB探针,以β-actin基因为内参,RT-PCR扩增目的 片段.胶同收纯化目的 片段,构建克隆载体作为定最模板,在ABI Prism7000型荧光定量分析仪上进行扩增,建立标准曲线;同时检测30名健康对照者、30例PBC患者及25例乙型病毒性肝炎肝硬化患者外周血PBMC中TRAIL基因的荧光强度和循环阈值,计算样本中TRAIL基因的起始拷贝数.结果 FQ-RT-PCR检测TRAIL mRNA的线性范围为103-106拷贝/ug RNA(r=-0.997);高浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为5.6%和6.3%.低浓度样本批内及批间CV分别为12.5%和14.6%.PBC患者TRAIL mRNA表达量为[(3.3±2.5)×105拷贝ug RNA],高于健康对照组[(0.5±0.2)×105拷贝/ug RNA],两组差异有统计学意义(t=5.994,P<0.01);乙型病毒性肝炎肝硬化患者TRAIL mRNA的表达[(2.1±0.9)×105拷贝/ug RNA]亦高于健康对照组,且差异有统计学意义(t=8.536,P<0.01),而两疾病组间差异无统计学意义(t=1.988,P>0.05).结论 成功建立检测TRAIL mRNA的FQ-RT-PCR法,并初步发现TRAIL mRNA在PBC及乙型病毒性肝炎肝硬化患者外周血PBMC中表达升高,这将对肝硬化肝损伤机制研究提供新的思路.     

定量RT-PCR检测PBC患者外周血中颗粒溶素的基因表达水平

目的建立检测人颗粒溶素(granulysin,GNLY)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并测定PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)中GNLY的基因表达水平,探讨GNLY基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC,primarybiliary cirrhosis)发生发展的关系。方法基于TaqMan荧光探针技术,构建质粒pET28a-GNLY,作为定量模板,建立实时荧光定量RT-PCR方法。用此方法测定了60例PBC、60例乙型肝炎肝硬化及60例健康对照者外周血中GNLY mRNA的含量。结果PBC患者GNLY mRNA的表达范围为5.35×107-4.61×109拷贝/μg RNA;健康对照者为9.28×105-7.32×107拷贝/μg RNA。PBC组GNLY mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组(P<0.01)和疾病对照乙型肝炎肝硬化组(P<0.001)。结论成功建立了人GNLY基因表达含量的荧光定量检测方法,PBC患者GNLY mRNA的含量显著高于健康对照组,GNLY表达与PBC的发生发展存在一定的关联性。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血APRIL/BLyS系统及其受体的表达

目的探讨APRIL(TNFSF13)/BLyS系统及其受体BCMA、TACI(TNFRSF13B)、BAFFR mRNA在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血中的表达水平和临床意义。方法设计特异性引物和荧光探针,实时检测PCR产物的荧光强度,检测42例正常健康者和56例PBC患者外周血中APRIL/BLyS系统及其受体mRNA表达水平,采用全自动酶标仪测定PBC患者血清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和TNF-α的水平。结果与健康者相比,PBC患者外周血中APRIL(TN-FSF13)、BLyS及其受体BCMA的mRNA表达均升高(P<0.01),APRIL、BLySmRNA表达与BCMAmRNA表达有显著相关性(分别为r=0.607和r=0.559,P均<0.01);APRILmRNA的表达与血清IL-2水平正相关(r=0.462,P<0.05),BLySmRNA的表达与血清IL-2、TNF-α水平正相关(r=0.740,P<0.01;r=0.381,P<0.05)。结论 APRIL/BLyS系统及其受体可能参与PBC的疾病进程,为监控PBC的病情和有效治疗提供了新的途径。     

自身抗原Ro 52 kd多肽分子cDNA表达克隆的构建及其融合蛋白在大肠杆菌中的表达

采用ＰＣＲ法克隆自身抗原Ｒｏ５２ｋｄ多肽分子的ｃＤＮＡ，定向插入表达载体ＰＧＥＸ－４Ｔ－１，并导入大肠杆菌中表达重组融合蛋白，经免疫印迹法表明，重组融合蛋白具有Ｒｏ５２ｋｄ的抗原性。这为今后对Ｒｏ５２ｋｄ抗原表位的精确定位，分析特定抗原表位与疾病的相关性及制备重组抗原用于临床检测奠定了基础。