开设循证检验医学课程在实验诊断学教学中的作用探索

随着检验医学的发展,循证检验医学日渐成为国际关注的热点。为了帮助学生了解和认识循证检验医学,本文探讨了在医学检验系本科教育中开设循证检验医学课程的作用和意义,提出了课程教学目标和教学内容,并积极探索一种研究型、设计型、开放式的教学方式,以更好地促进临床检验医学的发展和检验地位的提高。     

高渗盐水复苏缺血小肠对小肠免疫屏障和系统炎性反应综合征的影响

目的 本研究拟证实利用高渗盐水进行液体复苏可保护缺血-再灌注过程中的肠道黏膜屏障功能,并减轻该过程中机体系统性炎症反应综合征（SIRS）,从而为临床大出血、严重感染、大面积烧伤后肠功能障碍患者液体复苏方案的选择提供新的策略方法和理论依据.方法 ①选用清洁级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠,体重250 g-300 g,通过肠系膜上动脉夹闭法建立大鼠小肠缺血-再灌注损伤模型.②选用清洁级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠,随机分为假手术组（Sham组）,缺血-再灌注损伤组（IR组）和高渗盐水复苏组（HS组）.IR组夹闭肠系膜上动脉1h后开放并经尾静脉输入0.9％氯化钠溶液;HS组夹闭肠系膜上动脉1h后开放并经尾静脉输入7.5％氯化钠溶液;Sham组操作方法同IR组,但不进行肠系膜上动脉夹闭.再灌注6h后取标本.③免疫组化检测小肠粘膜内淋巴细胞（intra-epithelial lymphocyte,IEL）和固有层淋巴细胞（lamina propria lymphocytes,LPL）中T细胞亚群改变;流式细胞术检测大鼠外周血T细胞亚群及NK细胞.结果 ①肠黏膜上皮细胞层中的上皮内淋巴细胞（IEL）和位于疏松结缔组织中的固有层淋巴细胞（LPL）中CD4＋T细胞数量和CD8＋细胞数量,IR组和HS组显著高于Sham组,HS组显著高于IR组.②外周血T细胞亚群及NK分析：HS组CD3＋ CD8＋T细胞显著低于IR组和Sham组（P＜0.05）,HS组NK细胞比例显著低于IR组和NS组（P＜0.05）,余未见显著性差异.结论 利用高渗盐水复苏缺血小肠,可有效保护小肠免疫屏障,抑制全身炎性反应综合征.     

原发性胆汁性肝硬化与HLA-DRB1等位基因的相关分析

目的:探讨原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者人群与人类白细胞抗原(HLA)-DRB1等位基因的相关性,评估易感基因与一些临床及实验室特征的相互关系.方法:利用序列特异性引物PCR(SSP-PCR)对65例确诊为PBC的患者和431例健康人进行HLA-DRB1等位基因以及有关基因亚型分析.结果:PBC患者DRB1*07的频率为29.2%,与正常人的13.9%相比存在显著性差异(Pc＜0.05,相对危险度OR为2.55,95%CI:1.4～4.6),所有DRB1*07阳性患者经亚型分析均为DRB1*0701;其余DRB1的等位基因频率与正常人比较无显著性差异.DRB1*0701阳性患者群体与阴性患者在一些临床、实验室指标上无显著差异.结论:中国人群PBC与HLA-DRB1*0701基因相关,与南美、北美、北欧甚至日本等其他国家PBC患者的易感基因明显不同,为进一步作针对PBC患者的免疫治疗提供线索.     

隐球菌性脑炎患者颗粒酶B、颗粒溶素、穿孔素的表达及临床意义

目的研究颗粒酶B（grmazymeB,GrB）、颗粒溶素（granulysin,GNLY）及穿孔素（pefforin,又称pore-formingpro—tein,PFP）三种免疫效应分子在隐球菌性脑膜炎（cryptococcalmeningitis）外周血单个核细胞中的表达及其临床意义。方法首先用密度梯度离心法分离得到25例隐球菌性脑膜炎患者和30例健康人外周血单个核细胞（peripheral blood monotmclearcells,PBMC）,其次用免疫印迹（western blot）的方法检测其中的GrB、GNLY、及PFP的蛋白含量,用实时荧光定量（RVQ）-PCR方法测定其中GrB、GNLY、及PFP的mRNA含量。并分析隐球菌性脑膜炎患者蛋白含量与一些免疫指标的相关性。结果与健康对照组比较,隐球菌性脑膜炎患者PBMC中GNLY、PFP蛋白含量和mRNA均明显降低,而GrB无明显变化。隐球菌性脑膜炎患者中GNLY蛋白表达水平与血清IgG、IFN-γ水平成正相关（r=0．477,P〈0．05;r=0．534,P〈0．05）,与IL-10水平成负相关（r=-0．505,P〈0．05）。结论GNLY、PFP）可能参与隐球菌性脑膜炎的疾病进程,这为探讨隐球菌性脑膜炎的病情监控和有效治疗提供了新的线索。     

氧化修饰低密度脂蛋白对人周血单核细胞和THP—1细胞功能的影响

以天然低密度脂蛋白（ｎＬＤＬ）为对照组，探讨了氧化修饰低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）对人外周血单核细胞（ＰＢＭｓ）和人前单核因病细胞株ＴＨＰ－１粘附和分泌功能的影响。结果表明：ｏｘＬＤＬ可上调单细胞粘附分子ＣＤ１１ｂ表达，促进其与内皮的粘附，并进一步诱导ＴＮＦ－α、ＩＬ－８的分泌；而ｎＬＤＬ无此作用。说明ｏｘＬＤＬ是单核细胞粘附和激活的诱导剂，经ｏｘＬＤＬ透导的ＴＨＰ－１表现出与成熟单核－巨噬细胞相似     

自身免疫性疾病研究中的几个问题

自身免疫性疾病是由于正常免疫耐受功能受损导致免疫细胞及其成分对自身组织结构和功能的破坏，并出现一定临床表现的一类疾病。尽管具有一些共性，如常呈性慢发作，多发于女性，血甭中存在特异或非特异性自身抗体、激素或免疫抑制剂治疗有量其发病机制仍是众说纷纭，临床治疗效果不甚理想。近年来由于边缘学科及本身免疫学科的迅速发展，对自身免疫性疾病的研究也越来越深入，研究热点层出不穷。本文就其中的几个研究热点如Ｔ细胞亚     

重组结核分枝杆菌多表位肽的免疫原性研究

目的探讨纯化的重组结核分枝杆菌多表位肽激发细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyte,CTL)免疫应答的能力,为新型结核疫苗的设计打下基础。方法通过细胞增殖和细胞毒性实验,研究纯化的重组表达多表位肽刺激外周血单个核细胞(PBMC)产生的增殖反应和细胞毒活性,初步鉴定重组多表位肽的免疫原性。结果以刺激系数(SI)>3为界,多表位肽(10μmol)能刺激全部10例HLA-A*0201阳性(A2+)结核菌素阳性(PPD+)健康个体的PBMC发生增殖,SI为46.2±5.6;增殖反应明显高于单肽(平均SI为10.2±2.3)以及PPD(平均SI为15.6±3.6)引起的细胞增殖反应(P<0.01)。在多表位肽诱导的CTL细胞毒活性分析中以负载抗原肽(10μmol)的T2细胞作为靶细胞,多表位肽诱导的CTL作为效应细胞,多表位肽能诱导全部的10例A2+PPD+健康个体中CTL杀伤活性,平均活性分别为(86.2±9.6%),显著高于单肽[平均为(25.4±3.6)%]和PPD[平均为(22.6±2.8)%](P<0.01)。结论重组优化多表位肽在细胞水平具有较好的免疫原性,能有效刺激PBMC产生细胞增殖反应和细胞毒活性。     

结核分枝杆菌Rv0309抗原的重组表达、纯化和鉴定

目的重组表达结核分枝杆菌Rv0309蛋白,以进一步探讨其免疫效应。方法将结核分枝杆菌抗原Rv0309的全长cDNA插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建成Rv0309重组质粒。将重组质粒转入大肠杆菌BL21并以IPTG诱导表达,进一步经GST亲合层析柱纯化,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组表达蛋白。结果获得了pGEX4T-Rv0309重组子,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达重组Rv0309蛋白,其条带大小约23000,与预期结果相符。结论成功地进行了结核分枝杆菌抗原Rv0309的基因克隆与重组表达,为进一步研制新型结核病疫苗打下了基础。     

犬骨髓基质干细胞体外诱导分化为肌源性细胞的研究

目的 :探讨成年犬骨髓基质干细胞 (MSSCs)体外诱导分化为肌源性细胞的可行性。方法 :用贴壁法体外分离MSSCs ,实验组 5 氮胞苷诱导 ,对照组加入等量的培养基 ,用相差显微镜、免疫组织化学和电镜方法观察、鉴定培养细胞。结果 :实验组培养细胞诱导后 4周 ,多数培养细胞由梭形变为杆状 ,免疫组织化学检查结蛋白、平滑肌肌动蛋白和肌钙蛋白Ⅰ染色阳性 ;对照组多数培养细胞为梭形 ,免疫组织化学检查结蛋白染色弱阳性 ,平滑肌肌动蛋白染色弱阳性 ,肌钙蛋白Ⅰ染色阴性 ;电镜下实验组培养细胞内可见肌丝样结构 ,对照组培养细胞无明显肌丝样结构。结论 :成年犬MSSCs体外可诱导分化为肌源性细胞。     

己酮可可碱对人α1(Ⅰ)前胶原基因启动子活性的影响

目的探讨己酮可可碱（pentoxifylline,PTX）对人α1(Ⅰ)前胶原（COL1A1）基因启动子活性的作用及其机制。方法构建含人COL1A1基因启动子序列-2483～+42bp片段与氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因的重组体pCOLH2.5,将其瞬时转染至人皮肤成纤维细胞,加入PTX或/和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及胰岛素,测定CAT活性。结果0.4mmol/L、2mmol/L和10mmol/L的PTX使pCOLH2.5的活性降至对照的（82±9）%、（58±8）%与（32±13）%。IGF-1与胰岛素能促进pCOLH2.5的活性。PTX能拮抗IGF-1与胰岛素的这一促进作用。结论PTX能下调人COL1A1启动子的活性,而IGF-1与胰岛素能上调该启动子的活性。PTX能拮抗IGF-1与胰岛素的这一上调作用。