实验树鼩配合饲料的研究与应用

根据树鼩的生物学特性并参考有关实验动物饲料标准为树鼩设计和加工生产一种实验饲育饲料.结果表明该饲料能满足树鼩的健康生长、饲养繁殖和实验树鼩的营养需求.该饲料的营养成分和混合均匀度均符合地方标准,生产和饲喂方便,具有一定的应用和推广前景.     

树鼩睾丸间质细胞的分离培养及寨卡病毒感染特性的研究

目的 建立树鼩原代睾丸间质细胞分离培养方法,探究寨卡病毒(Zika virus, Zikv)对该细胞的感染特性,为Zikv感染导致的睾丸损伤及不育提供研究基础。方法 3月龄的雄性树鼩0.4 mL 3%戊巴比妥钠麻醉处死后采集睾丸,采用IV胶原酶和胰蛋白酶联合消化法获得单细胞悬液,通过percoll密度梯度离心结合差异贴壁法对细胞进行纯化,3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)对细胞荧光染色鉴定,ELISA检测细胞分泌睾酮的能力;用Zikv感染树鼩睾丸间质细胞,并用对寨卡病毒易感的非洲绿猴肾细胞(Vero)作为对比参照,测定感染不同时间点的细胞及其培养上清液中病毒载量,镜下观察细胞病变,ELISA检测睾酮含量。结果 分离培养的睾丸间质细胞经3β-HSD鉴定阳性率高达98%以上,且增殖迅速,能够连续分泌睾酮,第4代睾丸间质细胞在0～24 h和24～48 h睾酮分泌量分别为1.253 ng/mL和1.163 ng/mL;用Zikv感染树鼩睾丸间质细胞,6 h内病毒拷贝数可达2.15×10⁵ copies/mL,且感染48 h后基本丧失睾酮分泌能力,感染第3天可见明显的细胞...     

滇西亚种树鼩体外寄生虫自然感染状况及分析

目的调查滇西亚种树鼩体外寄生虫的自然感染状况,为建立树鼩质量控制标准提供依据。方法对野生的滇西亚种树鼩和自繁F1代树鼩各60只分别用尸检法和活体法检测,随即采用拔毛或用透明胶带粘取腋下、耳根、腹股沟、肛门附近等处的毛发制片,置于体视镜和显微镜下观察虫体和虫卵。结果野生滇西亚种树鼩和自繁F1代树鼩体外寄生虫自然感染率分别为:虱子25%/6%、蚤5%/0、蜱1.6%/0、水蛭1.6%/0、虱子和蚤混合感染1.6%/0。结论野生树鼩体外寄生虫的自然感染多为虱子和蚤,其次还有蝉、水蛭,总感染率明显高于自繁F1代。使用灭虱灵对于驱除树鼩体外寄生虫具有较好的疗效。     

野生成年树鼩主要脏器重量及脏器系数的测定分析

目的对野生成年树鼩的体重和主要脏器重量进行测定,计算其脏器系数。方法测定60只野生成年树鼩体重及11个主要脏器重量,并计算其脏器系数。进行脏器重量、脏器系数的性别间比较分析及Kendall和谐系数分析。结果性别间比较心、肺重量差异极显著(P<0.01),脑、肾上腺、胰腺重量之间差异显著(P<0.05);肾上腺、胰腺系数差异有极显著性(P<0.01),心、肺、肾系数之间差异均达到了显著水平(P<0.05)。Kendall和谐系数(W)分析表明,动物与其个体各主要器官整体发育协调性较好。结论野生成年树鼩心重量、肺重量、脑重量、肾上腺重量、胰腺重量、肾上腺系数、胰腺系数、心系数、肺系数、肾系数性别间存在差异。     

白内障动物模型的研究进展

本文综述了近20年来国内外有关先天性、创伤性、人工诱导性和细胞水平白内障动物模型的建立方法、特点及相关机制研究,总结了各类型白内障动物模型构建的评价指标,提出了建立晶状体永生化细胞系,研究白内障发病过程晶状体细胞中基因表达水平的变化,以及建立与人类较相似的白内障树鼩模型的研究设想。     

EV71病毒对树鼩原代肾上皮细胞感染模型的建立

目的 建立EV71对树鼩原代肾细胞的感染模型。方法 胰蛋白酶消化法获得树鼩的原代肾细胞，用EV71感染树鼩肾细胞，测定1、2、4、6和8 d培养上清病毒滴度，分别用Western blot和间接免疫荧光法检测细胞中EV71病毒VP1蛋白的表达，以确定EV71病毒对树鼩原代肾细胞的感染性。结果 对分离得到的树鼩原代肾细胞进行传代纯化和形态鉴别，建立以树鼩原代肾细胞为主的细胞培养。用EV71病毒感染树鼩原代肾细胞，感染后48 ~ 96 h病毒滴度可达到1.3×10⁶ TCID₅₀/mL，说明EV71病毒可有效感染树鼩原代肾细胞并有效增殖。Western blot检测发现，EV71病毒VP1蛋白可在感染后2 ~ 8 d的树鼩原代肾细胞中有效检出，间接免疫荧光法则在感染后2 ~ 6 d细胞的细胞质中检测到病毒VP1蛋白的分布。结论 在成功建立树鼩原代肾细胞培养的基础上，确定了EV71病毒对树鼩原代肾细胞的感染性和病毒增殖特性，初步建立了EV71树鼩原代肾细胞感染模型。     

二株不同基因型树鼩呼肠孤病毒的分离和鉴定

目的 从腹泻树鼩的粪便样本中分离和鉴定病毒。方法 树鼩腹泻粪便样本分别接种Vero、LLC-MK2和KMB17细胞,经连续传代,观察记录细胞病变,并对培养上清进行透射电镜检查、病毒RNA-PAGE电泳分析、轮状病毒鉴别筛查、S1全长基因片段扩增和生物信息学分析。结果 树鼩腹泻粪便样品在KMB17、Vero 和LLC-MK2细胞上经连续3代次传代后,均能产生细胞病变。经电镜检查、病毒RNA-PAGE电泳分析和轮状病毒鉴别筛查,推测其为呼肠孤病毒。病毒基因组全长S1基因扩增、序列测定和分析结果表明,KMB17培养上清中获得的病毒与I型原型株T1L同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性分别为85%和90%,因此该病毒定义为呼肠孤病毒I型。而LLC-MK2和Vero细胞上清中的病毒S1基因与III型原型株T3D核苷酸和氨基酸同源性分别为85%和92%,因此为呼肠孤病毒III型。结论 对今后树鼩和其他宿主呼肠孤病毒的分离鉴定有一定的指导意义。     

封闭群树鼩的微卫星遗传特性分析

目的比较分析远交繁殖的I~IV代次的滇西亚种树鼩群体的遗传差异和分化程度,为培育封闭群树鼩种群提供遗传学依据。方法提取I~IV四个代次共49只滇西亚种树鼩的全血基因组DNA,选取树鼩的18个微卫星位点,结合荧光标记(FAM)PCR扩增技术,通过毛细管电泳技术检测扩增产物,并利用POPGENE、FSTAT等软件比较各代次树鼩的遗传相关指标。结果四个代次的树鼩群体共检测到等位基因(Na)89个,平均有效等位基因数(Ne)为3.779,平均观察杂合度(Ho)为0.523,平均期望杂合度(He)为0.613,平均多态信息含量(PIC)为0.558,平均Shannon信息指数(I)为1.277,平均等位基因丰富度(AR)为2.938,遗传分化系数(Fst)平均值为0.046;其遗传距离及无偏遗传距离分别为0.049~0.159和0.022~0.109。结论培育的树鼩群体的遗传多样性较丰富,且不存在较大的遗传差异和分化程度。     

树鼩驯养繁殖实验动物标准及丙型肝炎动物模型技术平台建设的探讨

目前用于生物医学研究的树鼩大多数来源于野生捕获,由于个体间的差异较大,其实验结果的均匀性和可重复性较差,亟待解决树鼩人工饲养设施条件、繁殖关键技术、动物质量标准等一系列基础科学问题.许多文献报道了树鼩与其他实验动物比较,在肝病研究中具有巨大的开发应用潜力,在丙型肝炎动物模型研究中,亟待解决丙型肝炎病毒(HCV)细胞培养体系、HCV病毒感染剂量与感染途径、HCV病毒对树鼩体外、体内感染后病毒核酸检测、抗体检测和病理检测等技术方法的建立及动物模型评价标准问题.本文就上述问题系统性地进行初步报道,旨在为树鼩早日实现实验动物化和丙型肝炎疾病研究中应用提供科学依据.     

Nested-PCR检测恒河猴泡沫病毒

目的 用nested-PCR检测恒河猴泡沫病毒SFV的前病毒形式.方法 从SFV-1的pol区域选择两对引物分别对原代猴肾细胞 (rhesus monkey kidney,RMK) 及猴外周血淋巴细胞 (peripheral blood lymphocytes,PBLs) 进行体外扩增,扩增产物经1.0%的琼脂糖凝胶电泳,证实其特异性.阳性对照使用具有典型泡沫样病变的RMK 377细胞株的前病毒DNA, 阳性对照的PCR扩增产物经测序证实,阴性对照为恒河猴的SRV-1 cDNA.结果 nested-PCR能快速灵敏的直接从猴外周血淋巴细胞检出SFV的前病毒形式,与RMK细胞培养结果基本相一致.结论 本实验所建立的检测SFV的nested-PCR法能快速准确的检测猴群中的SFV的带毒情况,对于提高实验猴的质量具有重要意义.