耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的多重聚合酶链反应检测方法

目的 建立多重聚合酶链反应9multiplex poly-merase chain reaction,mt-PCR)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。方法 对临床分离的63株金黄色葡萄球菌，采用mt-PCR快速检测MRSA的决定基因mec和辅助基因femA,用16SrRNA基因作内参照。结果 mt-PCR的预期扩增结果为耐药株出现3条扩增区带，敏感株只有femA基因和16SrRNA基因出现2条扩增区带。在63株金黄色葡萄球菌中，药敏法34.9%（22/63）耐药；mt-PCR增增mecA基因34.5%(23/63)阳性，femA基因和16SrRNA基因100%阳性；单引物PCR与mt-PCR两者阳性扩增符合率为100%。结论 采用多重聚合酶链反应，可在同一扩增体系内同时检出mecA基因，femA基因，对MRSA临床株的快速，及时检出，有效控制MRSA造成的感染，限制其传播等具有重要的现实意义。     

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的耐药性

目的 观察凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）对甲氧西林等的耐药性和β-内酰胺酶的产生率,指导临床用药。方法 对本院临床感染标本常规分离鉴定菌株,药敏试验应用K-B纸片扩散法,按NCCLS规定的标准进行,耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）MIC测定应用Vitex微生物自动分析系统,β-内酰胺酶检测采用碘量试管法。结果 CNS95株中MRCNS的分离率为39%,β-内酰胺酶的阳性率为63%,MRCNS的产酶率为95%,以甲氧西林敏感的葡萄球菌（MSCNS）的产酶率为43%;95%株CNS对万古霉素100%敏感,对氨苄青、青霉素、红霉素最低耐药率为85%,对头孢派酮、头孢唑林、舒普深最低敏感率为83%。结论 MRCNS和MSCNS的产酶率与对甲氧西林的耐药性呈正相关,MRCNS与产β-内酰胺酶葡萄球菌间的耐药率无显差异。目前万古霉素和舒普深是治疗MRCNS和产酶CNS的首选抗生素。     

应用多重PCR-单链构象多态性分析同时检测耐异烟肼和利福平的结核分枝杆菌

目的 探讨应用多重PCR-单链构象多态性分析(multiplexpulymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,multi-PCR-SSCP)方法快速、特异地同时快速检测结核分枝杆菌对异烟肼和利福平耐药性的效能.方法 根据结核分枝杆菌的inhA序列、katG序列、rpoB序列,分别设计出3对特异性寡聚核苷酸引物.采用multi-PCR-SSCP技术,一次性检出耐异烟肼和利福平的结核分枝杆菌.新方法的有效性通过116株临床分离株(70株耐异烟肼,66株耐利福平)的验证.结果 名 Multi-PCR-SSCP方法检测临床分离株基因突变的有效性,以细菌培养和药敏试验结果为金标准.116株临床分离株和H37Rv标准株中除了4株katG缺失突变,其余菌株3个基因katG、inhA和rpoB在单基因PCR中都扩增成功.与H37Rv标准株相比,46株katG基因突变,14株inhA基因突变,58株rpoB基因突变.38株katG和rpoB,4株inhA和rpoB,4株inhA和katG同时突变,还有2株3个基因都有突变.multi-PCR-SSCP对于耐异烟肼和利福平的结核分枝杆菌检出的敏感度分别为80%、82%,特异度分别为100%和92%.结论 multi-PCR-SSCP方法敏感、特异,能同时快速有效地检测耐多药结核分枝杆菌,有望成为临床指导用药的好方法,为深入研究耐药基凶检测奠定了良好的基础.     

反义P~(53)基因对人肺癌细胞生长与蛋白表达的影响

P53基因的突变是肿瘤发生的重要事件之一，利用能表达反斗P53基因的逆转录病毒载体导入人肺癌细胞系GLC－82细胞，抑制其突变的P53基因表达．并与导入的空载体PDOR－neo和未导人的GLC—82细胞作比较，用DNA杂交证实重组子转入细胞，通过细胞生长曲线观察细胞生长情况，利用免疫组化法和流式细胞仪测定观察P53蛋白表达．结果表明，反义P53基因对GLC－82细胞生长速度及突变的P53蛋白有抑制作用。     

尿液保存温度对尿液分析仪检测结果的影响

0　引言　尿液常规检验是临床最常见的检查项目之一 ,其结果的正确与否影响临床诊断 .尿液分析仪的检测结果受许多因素的影响 ,尤其是尿液样本本身的因素更可引起假性结果 .我们在临床工作中发现 ,温度较低时尿液尿胆元 (urobilino gen ,UBG)和胆红素 (bilirubin ,BIL)检测的结果常出现较大的变化 ,并通过模拟实验证实了这一事实 .1　材料和方法1.1　材料　尿液分析仪Miditron M型尿液分析仪及试纸带均购自德国B .M公司 .检测和校正操作严格按仪器说明书及有关规程进行[1] .实验标本 ,收集门诊患者尿糖 (glucose,GLU)、酮体 (ketone ,…     

PCR检测血液中烟曲霉菌DNA方法探讨

[目的]探讨聚合酶链反应(PCR)方法检测血液中烟曲霉菌DNA的敏感性和特异性及应用效果。[方法]将烟曲霉菌菌株转种于沙氏琼脂斜面上制备烟曲霉菌菌孢子悬液，建立免疫功能低下烟曲霉菌感染动物模型，采用PCR方法检测2、4、8、16、24和48h血液、血浆中以及不同保存条件下血液标本中的烟曲霉菌DNA。[结果]动物全血中烟曲霉菌DNA检测2h检出33％，4h检出83．3％，8h后检出率100％；而血浆中烟曲霉菌：DNA检测在24h达最高检出率即50％；在全血中烟曲霉菌DNA检测与血液培养对比检测结果，全血烟曲霉菌DNA检出率明显优于烟曲霉菌血液培养法；在4℃、-20℃保存24、72h内敏感性基本相同，室温下保存48h内检测的敏感性无明显变化，室温保存72h后检测的敏感性比24h降低40％(9／15)。[结论]在侵袭性曲霉菌感染的PCR诊断中，以全血中提取烟曲霉菌DNA检出率明显优于血浆中烟曲霉菌DNA检出率。     

泌尿生殖系淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体感染分析

泌尿生殖系淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体感染分析苏明权穆士杰祝道成马越云张荣于文彬丁振若用聚合酶链反应技术对我院门诊泌尿生殖系感染患者中的淋球菌、沙眼衣原体、生殖道支原体进行检测，以了解西安地区淋球菌、沙眼衣原体、生殖道支原体感染的状况。一、材料与方...     

人HMGB1诱导单核细胞分泌TNF-α的规律

目的 :探讨人高迁移率族蛋白 1 (HMGB1 )诱导人单核细胞TNF α的分泌规律和HMGB1在脓毒症中的作用 .方法 :HMGB1的剂量效应组分别用含有 0 .1 ,1 .0 ,1 0 ,2 0和5 0mg·L-1 HMGB1的培养基孵育与人单核巨噬细胞系THP1 ,共培养 6h ,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF α含量 ,采用流式细胞技术观察细胞的凋亡 .HMGB1的时间效应组以含有 2 0mg·L-1 HMGB1的培养基、对照组以不含HMGB1的培养基、另外以含有 2 0mg·L-1 HMGB1和10 0mg·L-1 脂肪多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)的混合组的培养基分别培养THP1细胞 0 ,2 ,4 ,6 ,8,1 0 ,1 2和 2 4h ,同上留取离心后的培养液上清 ,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF α含量 .结果 :将HMGB1加入到单核细胞培养液中能明显刺激其TNF α的分泌 .在 0 .1～ 5 0mg·L-1 范围内 ,HMGB1诱导THP1的TNF α分泌增加 ,呈显著剂量依赖性关系 ,5 0mg·L-1 HMGB1能明显诱导THP1细胞的凋亡 ;HMGB1组和HMGB1与LPS的混合组THP1的TNF α分泌在 0～ 2 4h间呈双相性规律 .结论 :人HMGB1能诱导人单核细胞的TNF α分泌与凋亡 ,初步证实HMGB1在脓毒症的发生、发展中发挥重要作用     

一例活体肝部分移植术实验室监测

患者，女，１０岁，体重２４公斤，发育正常。临床诊断为先天性肝内胆管囊性扩张症。于１９９７年６月３０日在全麻下行病肝切除术，同时植入其父左叶肝脏。术后经过：手术历时１３小时，患儿在气管插管下返回病房，术后给予特级护理，密切监测生命体征变化，并于１９９７...