缝隙连接蛋白43及其S368位点磷酸化水平与甲基苯丙胺诱导的心肌毒性的关系

目的通过构建SD大鼠的甲基苯丙胺(METH)中毒模型与心肌细胞中毒模型,检测缝隙连接蛋白43(Cx43)及其S368位点磷酸化(p-Cx43)表达水平;检测吸食METH的人心肌组织内Cx43及其S368位点p-Cx43的表达情况,分析其与METH诱导的心肌毒性的关系,探讨Cx43及S368位点p-Cx43水平在METH诱导的心肌毒性中的作用。方法建立SD大鼠METH慢性中毒动物模型和新生SD大鼠心肌原代METH中毒细胞模型;提取蛋白,采用Western blot检测Cx43、p-Cx43蛋白的表达情况;分析Cx43及其S368位点p-Cx43水平与METH诱导的心肌毒性的关系。收集贵州医科大学法医司法鉴定中心中经毒化检验确认吸食METH的人心肌组织为实验组,无吸食任何毒品者为对照组;常规石蜡切片,HE染色观察2组心肌的结构改变;免疫组织化学染色法、Western blot检测Cx43及其S368位点p-Cx43的表达水平。结果 (1)在METH慢性中毒动物模型中Cx43及S368位点p-Cx43表达较对照组明显下降(P0.05);(2)在METH中毒细胞浓度、时间梯度模型中,Cx43及其S368位点p-Cx43表达量较对照组显著下降(P0.05);(3)与对照组比较,实验组人心肌细胞呈现萎缩、坏死及局灶性出血等病理改变;(4)与对照组相比,实验组人心肌组织中Cx43及S368位点p-Cx43表达水平降低,主要表现为心肌细胞之间闰盘处的棕黄色着色减少,部分呈现侧膜化改变;(5)实验组人心肌组织Cx43及S368位点p-Cx43蛋白表达较对照组下降(P0.05)。结论 METH能通过减少心肌中Cx43及其S368位点p-Cx43的表达,从而破坏心肌的组织结构,影响心脏的正常功能。     

同源异型盒基因Dlx5在氟中毒骨代谢中作用

氟是人体必需微量元素之一,是一种已知可影响骨形成的非激素因子,适量氟对人体具有重要生理功能,但长期摄入过量氟可引起以氟斑牙和氟骨症为主的慢性全身性疾病.成骨细胞活跃和骨转换加速是氟骨症特征性病变[1-2].通过转录因子调节基因表达是控制细胞功能的重要机制之一,随着基因技术不断发展,在骨骼发育过程中关键转录因子也逐渐被发现,其中有些发挥着决定性作用.本文通过对D1x5与骨代谢及氟骨症关系研究进展做一综述,为氟骨症防治提供参考依据.     

糖尿病大鼠肾间质TGF-β1和α-SMA的表达与细胞外基质沉积的关系

目的：观察糖尿病大鼠肾小管间质中转化生长因子(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达与纤维连接蛋白(FN)和胶原Ⅲ型(ColⅢ)沉积的关系。方法：大鼠随机分为正常对照组(A组)，糖尿病1周组(B组)，特尿病2周组(C组)，糖尿病1月组(D组)和糖尿病2月组(E组)。用免疫组化方法检测肾间质TGF-β1、α-SMA、FN和ColⅢ，PAS染色观察肾组织形态学改变，生化法测定大鼠血糖、血脂、血尿肌酐以及尿蛋白。结果：糖尿病2周开始肾小管见TGF-β1表达，并随病程进展而逐渐增多。糖尿病1月肾间质中见FN和ColⅢ沉积开始增多，2月时更多，且可见肾问质中有α-SMA表达；FN和ColⅢ增多与TGF-β1、α-SMA呈正相关。结论：TCF-β1刺激α-SMA的表达，从而促进糖尿病大鼠肾小管问质FN和ColⅢ的沉积。     

慢性氟中毒对大鼠骨组织Dlx5蛋白及其mRNA表达的影响

目的观察慢性氟中毒对大鼠骨组织中转录因子Dlx5蛋白和mRNA表达水平的影响,探讨Dlx5在氟骨症发病机制中的可能作用。方法本研究用36只SD大鼠按性别随机分成3组,对照组（饮自来水,含氟〈0．5rag／L）、低氟组（饮含氟5．0mg／L的自来水）、高氟组（饮含氟50mg／L的自来水）,6个月后用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟及骨氟含量,HE染色观察骨组织病理学改变,并采用原位杂交技术、免疫组织化学方法,对大鼠骨组织进行Dlx5蛋白及mRNA水平的定量分析。结果HE染色显示染氟大鼠骨组织骨小梁增宽、骨皮质增厚等骨硬化表现;染氟大鼠骨组织Dlx5蛋白及mRNA表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义（F1低－蛋白－28．381,F高－蛋白－343．515,F1低－mRNA－27．767,F高－mKNA－353．987,P均〈o．05）。结论过量的氟可上调Dlx5蛋白及mRNA水平的表达,促进成骨细胞的增殖与分化,从而出现骨质硬化。     

不同程度冠状动脉粥样硬化病变下心肌组织中melusin的表达研究

目的:观察不同程度冠状动脉粥样硬化病变下心肌组织的病理改变,检测心肌组织内melusin蛋白的水平,探讨melusin在冠心病的发生发展过程中所发挥的作用。方法:筛选尸检取材的冠心病案例,分3组:动脉粥样硬化斑块稳定者(B组);粥样硬化斑块不稳定但无血栓形成、斑块破裂、斑块内出血等任一种继发病变者(C组);斑块不稳定且伴有上述任一种继发病变者(D组)。以无心脏疾病死亡者为对照组(A组)。分别收集冠状动脉和心肌组织,常规HE染色观察各组心肌的结构变化,免疫组织化学染色、Western blot及real-time PCR法检测心肌组织内melusin的表达分布,利用logistic回归分析melusin的表达改变与冠心病发生发展的关系。结果:(1)与A组比较,其余3组心肌呈现肥大、萎缩、坏死及脂肪浸润等病理改变;(2) B组心肌组织中的melusin表达较A组增高,C组和D组中melusin表达较A组显著降低(P<0.05);(3) melusin在心肌细胞中的表达与冠心病发生发展呈负相关(OR=0.3;95%CI:0.2~0.4;P<0.01)。结论:人心肌组织中melusin蛋白可能是冠心病发病过程中心脏的保护因素,它在冠心病的发生发展过程中发挥了重要的作用。     

结肠腺癌组织p27kip1表达水平及与临床病理因素的关系

目的 观察结肠腺癌组织p27kip1表达水平,探索其与肿瘤分化程度等临床病理因素间的关系.方法 HE和免疫组化染色,常规观察与图像分析结合测量结肠腺癌等组织p27kip1阳性细胞体积密度、阳性细胞比率,分析其与肿瘤分化程度等因素间关系.结果 结肠腺癌组织癌细胞体积密度与对照肠粘膜上皮间无明显差别,但其p27kip1阳性表达率明显低于对照肠粘膜和结肠腺瘤组织,与邻癌粘膜组织差异无显著性.结肠腺癌p27kip1表达水平与肿瘤分化程度、浸润深度及淋巴结转移相关,与患者性别、年龄、肿瘤大小无关.结论 结肠腺癌组织p27kip1表达水平降低,且与肿瘤恶性程度、侵袭能力、淋巴结转移有关,可作为判定结肠癌恶性程度及预后的一个指标.     

冠状动脉粥样斑块内CD45表达水平与病灶结构变化的关系

目的通过检测冠状动脉粥样硬化病灶内CD45蛋白表达水平,分析其与病灶结构变化的关系,探讨CD45在人冠状动脉粥样硬化病灶发生发展中的作用。方法收集贵州医科大学法医司法鉴定中心司法鉴定中尸体检验及组织学检查确认有冠状动脉粥样硬化病例的冠状动脉组织,根据冠状动脉病变情况将其分为对照组、单纯动脉粥样硬化组(单纯As组)和动脉粥样硬化并继发病变组(As并继发病变组),常规石蜡切片HE染色观察各组冠状动脉的组织结构,免疫组织化学染色法、蛋白免疫印迹法及实时荧光定量PCR检测CD45蛋白的表达分布及水平,分析CD45表达水平与粥样硬化病灶结构变化的关系。结果与对照组比较,有动脉粥样硬化及并发继发病变的冠状动脉斑块内纤维帽厚度变薄,病灶厚度、坏死灶厚度及血管腔面积增加(P均0.05)。与对照组比较,有动脉粥样硬化及并发继发病变的血管组织CD45蛋白表达显著升高(P0.05),且As并继发病变组显著高于单纯As组(P0.05)。与对照组比较,有动脉粥样硬化及发生继发病变的冠状动脉病灶内CD45的表达显著升高(P0.05),且As并继发病变组显著高于单纯As组(P0.05),CD45阳性蛋白表达主要分布于斑块肩部和底部的白细胞(棕黄色着色)。与对照组比较,有动脉粥样硬化及并发继发病变的血管组织CD45 mRNA表达显著升高(P0.05),且As并继发病变组显著高于单纯As组(P0.05)。病灶内CD45表达水平与病灶结构变化具有相关性。结论人冠状动脉粥样斑块内CD45分子作为炎症反应的标志物,其表达水平反映病灶内的炎症反应程度,而病灶内炎症反应程度能影响病灶结构,从而导致斑块稳定性改变。     

钙调蛋白在氟中毒大鼠肝组织中的表达

目的探讨钙调蛋白在氟中毒大鼠肝组织中的表达及意义。方法在饮水中加入氟化钠进行大鼠染毒试验,3个月后采用免疫组化技术及RT-PCR技术检测大鼠肝脏中钙调蛋白(CaM)的表达水平。结果与对照组相比,染氟浓度为25mg/L、50mg/L、100mg/L组大鼠肝脏CaM mRNA及蛋白表达水平均增高,并随染氟浓度的增加,表达增强。结论氟可以导致大鼠肝脏CaM mRNA及蛋白表达水平增强。     

依那普利和丹芪复方对糖尿病大鼠肾小球MAPK和PKCα途径的影响

目的观察依那普利和中药复方对糖尿病大鼠肾小球丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),蛋白激酶Ca(PKCo),转化生长因子β1(TGFβ1)表达和纤维连接蛋白(FN)沉积的影响。方法Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)和糖尿病组(B、C、D组)。用链脲菌素复制糖尿病模型,B组为糖尿病对照组,C组为糖尿病依那普利组,按2mg／kg．d给药,D组为糖尿病中药组,按1．8g／kg．d中药浸膏给药,持续60天。用免疫组化检测MAPK、PKC．、TGFβ1和FN在肾小球的表达;用生化方法测定大鼠血糖、血脂、血肌酐和尿蛋白;光镜观察肾小球形态。结果糖尿病各组肾小球MAPK、PKc0、TGFβ1和FN的表达明显高于正常对照组,但用药组(C、D组)的表达则低于未用药组(B组)。形态观察显示,C、D组肾小球病变比B组轻。B组血糖与C、D组无明显差异,但血脂、血肌酐和尿蛋白则高于C、D组。结论依那普利和丹芪复方可抑制糖尿病大鼠肾小球MAPK和PKCα信号途径,从而改善肾小球的形态和功能。