转位紧密黏附素受体细胞骨架偶联蛋白基因克隆、表达、抗体制备及应用

目的:克隆转位紧密黏附素受体细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,表达纯化TccP,制备其多克隆抗体并研究该抗体在EHEC O157:H7黏附宿主细胞模型中的应用.方法:从EHEC O157:H7 Sakai菌株基因组中克隆得到tccP基因,构建重组表达质粒pET28a-TccP.将此质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.经纯化分离后,免疫新西兰大白兔,制备其多克隆抗体,并用ELISA法和Western blot法对其进行鉴定.使用兔抗TccP多克隆抗体对EHEC O57:H7黏附宿主细胞模型中的TccP分子进行定位研究.结果:获得了TccP cDNA,与GenBank报道的序列一致,并成功构建了高效原核表达质粒pET28a-TccP;Western blot结果表明,经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了相对分子质量(Mr)约37000的目的蛋白.表达产物N端氨基酸序列测序结果与GenBank公布的基因序列推定的氨基酸序列完全一致.所制备的兔抗TccP多克隆抗体经Westem blot法测定可与Mr37000目的蛋白发生特异性结合反应;免疫荧光检测发现TccP聚集在EHEC O157:H7 黏附处细胞膜的下方.结论:成功构建了pET28a-TccP载体,获得了高纯度的重组TccP及其特异性多克隆抗体.     

放疗同期胃镜下植入5-FU缓释粒子治疗老年食管癌21例疗效观察

80%的食管癌患者临床确诊时,局部病灶已经广泛浸润和(或)远处转移[1],失去了根治性切除的机会.老年食管癌患者因体质和年龄问题对联合治疗耐受性差,以放射治疗为主,但放疗的局部控制率与远期生存率都较低,总体治疗效果差,5年生存率在10%～15%[2].本文拟观察放疗同期胃镜下植入5-FU缓释粒子对老年食管癌患者的疗效.     

影响脓毒血症输血患者预后的危险因素分析

目的 探讨影响脓毒血症输血患者预后的危险因素,为脓毒血症患者提供安全、科学的输血建议.方法 通过回顾性分析收集本院2018年1月～2021年6月的134名脓毒血症患者临床资料,按照输血与否分为输血组(n=45)与未输血组(n=89),比较2组患者的临床基本资料及实验室指标;按照生存结局和是否发生脓毒症休克将输血组患者再...     

中性粒细胞增强类风湿关节炎滑膜细胞产生基质金属蛋白酶及其细胞侵袭力

目的：研究中性粒细胞表面CD147分子对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）产生基质金属蛋白酶（MMP）及细胞侵袭力的作用。方法：取自关节镜或骨科手术治疗的RA、骨关节炎（OA）患者的滑膜组织，体外分离培养FLS，通过流式细胞术（FCM）检测细胞表面分子及形态学方法鉴定。采用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL-60细胞（人早幼粒白血病细胞株）诱导中性粒细胞分化，并用硝基蓝四氮唑（NBT）还原反应测定其分化程度。进而以FCM测定分化前后的HL-60细胞及FLS表面CD147的表达，并通过明胶酶谱和重组基质侵袭实验检测分化前后HL-60细胞对FLS MMP表达和细胞侵袭能力的作用以及CD147拮抗肽（AP-9）对这种MMP表达和细胞侵袭能力的抑制作用。结果：成功建立了FLS分离培养和HL-60细胞分化的实验体系。培养的FLS具有典型成纤维细胞的形态，均一的高度表达CD90（〉98％）而不表达CD14。分化后的HL-60细胞CD147表达上调，RAFLS细胞CD147表达水平低于分化前及分化后HL-60细胞（P〈0．05）。明胶酶谱试验显示：①与OAFLS相比，单培养的RAFLS表达较高水平的酶原及活化形式的MMP-2（P〈0．05）；②分化前／后的HL-60细胞分别与FLS共培养，酶原及活化形式的MMP-2和MMP-9的表达水平较这些细胞单独培养均显著升高（P〈0．05），且分化后的HL-60细胞与FLS共培养酶原及活化形式MMP-2表达水平较分化前HL-60细胞与FLS共培养明显升高（P〈0．05）；③AP-9显著抑制两共培养组中MMP-2和MMP-9的上调作用（P〈0．05）。侵袭实验显示：RAFLS侵袭能力高于OA FLS（P〈0．05）；分化前后的HL-60均可增加RAFLS的侵袭能力（P〈0．05），且分化后强于分化前（P〈0．05）；AP-9可抑制这一促进作用，降低FLS的侵袭能力（P〈0．05）。结论：中性粒细胞可能通过CD147促进RA患者滑膜FLS MMP-2、MMP-9的表达和活化，增强FLS的侵袭能力，这种促进作用可被CD147拈抗肽所抑制，将为RA关节软骨和骨损伤机制和治疗的进一步研究提供了重要的线索。     

雌激素膜受体-α信号通路与乳腺癌的相关性

雌激素受体α和β是一类转录因子,产生多种生理功能,雌激素受体α和β调控靶基因转录是配体依赖性的,然而,近来研究表明雌激素受体α还存在另外一条信号途径,也称作非基因组或膜启动途径,能够快速地被雌激素激活,这种雌激素受体α位于细胞膜,因此也称作膜雌激素受体α,已经报道膜雌激素受体α与多种肿瘤的发生相关,本文阐述了近年来雌激素受体α的研究成果以及与乳腺癌的相关性.     

急诊老年人心律失常533例临床分析

老年人心律失常急诊病例近年似有上升趋势,为了解其发病情况,笔者回顾性分析了我院2004-2007年全部老年人心律失常患者的资料,以求在制定此类患者的诊治及预防措施时得到有价值的参考。     

两种全自动微生物鉴定系统在布鲁菌鉴定中的应用比较

目的 比较Vitek2 Compact和Walkaway 40全自动微生物鉴定系统在布鲁菌鉴定中的应用。方法 临床分离菌株,采用Vitek2 Compact和Walkaway 40全自动微生物鉴定系统进行鉴定,并将鉴定结果和16S rRNA基因序列检测的结果进行比较。结果 临床分离菌株经Vitek2 Compact GN鉴定卡鉴定为马耳他布鲁菌,Walkaway 40 NC31鉴定卡鉴定为动物溃疡威克斯菌、莫拉菌属等。16S rRNA基因序列分析表明,该临床分离菌株的16S rRNA基因序列与布鲁菌匹配,排除动物溃疡威克斯菌、莫拉菌属等的可能,确定该菌株为马耳他布鲁菌。结论 Vitek2 Compact可以准确的鉴定出布鲁菌,经Vitek2 Compact鉴定为布鲁菌后,可采用分子生物学方法进行佐证,大大地提高了布鲁菌的检出率,降低误诊的可能性。Walkaway 40无法准确的鉴定出布鲁菌,误鉴定会导致错误的治疗并使工作人员处于实验室获得性感染的危险之中。建议使用Walkaway 40的实验室在鉴定出动物溃疡威克斯菌或莫拉菌属等细菌时应谨慎报告,并使用Vitek2 Compact或分子生物学方法进行复查。     

血管内皮细胞对牙周组织细胞增殖的影响

目的：通过血管内皮细胞与牙周组织细胞复合培养模拟牙周组织再生环境,观察血管内皮细胞对牙周组织细胞增殖的作用规律,探讨血管内皮细胞对牙周组织修复再生的影响。方法：应用原代培养的血管内皮细胞,在Transwell嵌套中实现与人牙周膜成纤维细胞、牙龈成纤维细胞间的复合培养,分别于复合培养第2、4、6、8和10天,以细胞计数手段检测血管内皮细胞共存条件下2种牙周组织细胞的增殖情况,并与单独培养的2种牙周组织细胞作为对照,采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果：在血管内皮细胞存在条件下,2种牙周组织细胞的增殖速率均显著高于单独培养条件。血管内皮细胞存在时,牙周膜成纤维细胞增殖速率逐渐超越牙龈成纤维细胞(第6天起),并在第8天细胞数量上超过牙龈成纤维细胞,差异具有显著性(P<0.01)。结论：血管内皮细胞的存在,对牙周组织细胞的增殖具有促进作用,对牙周膜成纤维细胞增殖的促进作用显著高于牙龈成纤维细胞。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱用于产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌ST11分型的研究

目的：探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（ MALDI?TOF MS）用于产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌ST11分型。方法收集2012年10月－2014年10月5所医院的80株产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌菌株。经多位点序列分析（ MLST）,28株为ST11型,52株为其他分型（ other sequence type, OST）。通过MSP dendrogram聚类分析、MALDI Biotyper建立数据库、ClinPro Tools建立模型3种方法研究ST11分型的可能性。结果 MSP dendrogram聚类分析在距离水平线1000处可将80株菌聚类分析为两类,敏感性为65．78％,特异性为92．85％。 MALDI Biotyper数据库验证结果：18株ST11有1株菌分为OST,32株OST有2株菌被分为ST11,敏感性为89．47％,特异性为96．77％。 ClinPro Tools用其余菌株验证模型全部正确,敏感性和特异性均为100％。结论 MALDI?TOF MS可通过3种方法区别ST11与OST,以ClinPro Tools软件建立模型的方法最可靠。