Different applications of polymerases with and without proofreading activity in single-nucleotide polymorphism analysis

With the completion of the human genome project, single-nucleotide polymorphisms (SNPs) have become the focus of intense study in biomedical research. Polymerase-mediated primer extension has been employed in a variety of SNP assays. However, these SNP assays using polymerase without proofreading function are compromised by their low reliability. Using a newly developed short amplicon harboring restriction enzyme site, EcoR-I, we were able to compare the single-base discrimination abilities of polymerases with and without proofreading function in primer extension in a broad range of annealing temperatures. Thermodynamic analysis demonstrated a striking single-nucleotide discrimination ability of polymerases with proofreading function. Using unmodified 3'-end allele-specific primers, only template-dependent products were generated by polymerase with proofreading activity. This powerful single-base discrimination ability of exo(+) polymerases was further evaluated in primer extension using three types of 3' terminally modified allele-specific primers. As compared with the poor fidelity in primer extension of polymerases lacking 3' exonuclease activity, this study provides convincing evidence that the use of proofreading polymerases in combination with 3'-end modified allele-specific primers can be a powerful new strategy for the development of SNP assays.     

抗SARS-CoV抗原的人源Fab段噬菌体抗体库的构建

目的 :利用抗SARS冠状病毒IgG抗体阳性的SARS康复患者外周血淋巴细胞 ,构建人源Fab段抗体文库。方法 :制备外周血淋巴细胞总RNA ,逆转录成cDNA。以其为模板 ,利用针对家族特异性Ig基因的引物扩增重链Fd段和轻链基因 ,并重组到噬菌粒载体pComb3中 ,将重组噬菌粒载体电转化大肠杆菌XL 1Blue,酶切鉴定抗体库的重组率 ,并测定噬菌体抗体库的库容量。结果 :构建了源于SARS康复患者血清中抗Fab段的抗体文库 ,轻链、重链Fd段基因的重组率分别为91%和 75 % ,库容量为 7.2 3× 10 7。结论 :成功地构建了抗SARS CoV抗原的人源Fab段噬菌体抗体库     

Tackling the frailty burden with an integrative value-based approach: results from a mixed-methods study

Journal of Public Health - The purpose of this paper is to investigate the implementation of value-based care principles in the context of frailty in the perioperative process, highlighting the...     

氧化应激在溃疡性结肠炎中的作用及中医药防治研究进展

溃疡性结肠炎（UC）是一种临床常见的消化系统疾病,致病机制尚不明确,病情复杂多变,迁延难愈,治疗周期漫长,且无特效药。目前,UC的治疗多采用皮质类固醇、氨基水杨酸及生物制剂等西医手段,短时间起效快,疗效确切。但随着用药时间的延长,部分患者会出现耐药性和加剧病情发展,导致结肠癌的发生。有研究发现,氧化应激是UC重要的致病因素之一,影响着UC的发生、发展。氧化应激是机体内氧化产物与抗氧化系统不平衡的一种应激状态,丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、一氧化氮（NO）等氧化产物的过表达或者超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）抗氧化酶的不足都会导致氧化应激的发生。值得注意的是,中医药作为我国独有的医学特色,运用中医药治疗UC疾病已经取得显著的成效。研究表明,中医药一方面通过抑制代谢产物的堆积,有效抑制UC发生,另一方面,通过提高抗氧化系统,达到拮抗UC发展的治疗效果。因此,以中医药调节氧化平衡状态作为诊疗思路,可能是未来治疗UC疾病的新手段、新方向。基于上述研究,该文总结了氧化应激关键致病蛋白与UC发生、发展的作用机制,归纳了中药有效成分、单味中药、中药复方、针灸调控氧化应激上下游靶点蛋白,减轻肠黏膜病理损害,降低结肠损伤指数,以及丰富肠道菌群,增加结肠长度,改善UC临床症状,以期为扩大中医药治疗UC疾病的应用范围,提供可靠的科学理论依据。     

^32P局部照射预防猪冠状动脉再狭窄研究

目的：评价^32P灌注球囊预防再狭窄的有效性、可行性和安全性。方法：对猪冠状动脉左前降支行过度球囊扩张术后,治疗组以^32P作血管内照射,对照组作假照射。术后35d收获目标血管、检测血管形态、细胞增殖百分比等。结果：治疗组血管腔面积较对照组明显增大（P＜0．01）,新生内膜面积、血管狭窄程度和各层PCNA阳性细胞明显减小（P均＜0．01）。结论：^31P灌注球囊照射预防冠状动脉再狭窄有效、安全而且可行。     

慢性乙型肝炎患者肝组织FasL表达与血清可溶性FasL水平的关系

目的：探讨慢性乙型肝炎患者肝组织中FasL表达与血清可溶性FasL水平的关系。方法：用免疫组化方法检测60例慢性乙型肝炎患者肝穿组织FasL的表达,同时用酶联免疫吸附试验检测血清可溶性FasL。结果：重度慢性乙型肝炎患者血清中sFasL水平＞中度＞轻度,各组间差异有显著意义（P＜0．01）;慢性乙型肝炎患者肝组织FasL表达的程度和血清sFasL水平与肝组织病变的活动性一致。结论：（1）肝组织炎症程度加重,肝组织FasL抗原的表达增强,同时血清中sFasL水平升高;（2）Fas介导的肝细胞凋亡在慢性乙型肝炎的发病机制中起重要作用,抑制肝细胞Fas表达有助于减轻肝细胞损伤程度。     

家兔急性实验性面神经损伤的组织病理观察

目的　观察家兔面神经急性损伤后髓鞘和轴索的组织病理变化。方法　用丝线结扎茎乳孔以外的面神经总干 ,观察结扎后 1天、3天及 5天面神经的组织病理改变。结果　家兔面神经受损后 ,先后在髓鞘和轴索出现轻重不等、程度不同的形态学改变。结论　结扎家兔面神经后 ,其髓鞘及轴索会出现相应的病理改变 ,且随着结扎天数的增加 ,面神经损伤亦呈加重的趋势