中药注射剂质量控制研究进展

中药注射剂作为中药现代化的重要代表,已成为中医药产业不可或缺的一部分。中药注射剂质量控制研究决定其安全性与有效性。针对中药注射剂成分复杂、药效物质基础不明确等问题,利用高效液相色谱法、气相色谱法等对其内在成分进行定量,从单一指标到多指标,结合指纹图谱、模式识别、谱效关系、质量标志物（Q-marker）的研究也取得很大的进展。从多指标定量测定、指纹图谱以及谱效关系和Q-marker等方面,对近年来中药注射剂质量控制研究成果进行综述。     

新辅助化疗前和化疗后乳腺癌组织中CD44+/CD24-/乙醛脱氧酶1细胞表型的变化及意义

目的 探究新辅助化疗(NAC)前后乳腺癌组织中CD44+/CD24-/乙醛脱氢酶1(ALDH1)+细胞表型的比例变化及其临床意义.方法 选取153例经空芯针穿刺活检明确病理诊断的乳腺浸润性导管癌患者为研究对象,临床Ⅱa～Ⅲb期,取NAC前后乳腺癌灶组织,应用免疫组织化学(IHC)单染及双染技术检测并比较化疗前后乳腺癌组织中ALDH1+、CD44+CD24-表型以及两者重叠表达的情况,并分析其与乳腺癌临床病理特征及化疗效果的关系.结果 NAC前患者乳腺癌组织中AL-DH1+/CD44+/CD24-表型的比例为7.2％,化疗后ALDH1+/CD44+/CD24-表型比例为22.9％,两者差异有统计学意义(χ2=14.737,P<0.001);化疗前CD44+/CD24-/ALDH1+表型的表达与肿瘤大小(χ2=5.889,P=0.015)、脉管癌栓(χ2=15.223,P<0.001)、HER-2(χ2=4.036,P=0.045)有显著相关性.NAC前表型为ALDH1+/CD44+/CD24-的患者NAC后有效率(81.8％)明显高于非ALDH1+/CD44+/CD24-表型的患者(45.4％)(χ2=5.748,P=0.017).结论 NAC可促进AL-DH1+/CD44+/CD24-的表型比例升高,ALDH1+/CD44+/CD24-的表型与化疗有效率相关,ALDH1+/CD44+/CD24-表型有可能可以作为预测乳腺癌患者NAC疗效的临床指标.     

黑骨藤镇痛抗炎作用活性部位筛选

目的 研究苗药黑骨藤镇痛抗炎作用的活性部位。方法 小鼠随机分为空白组、阿司匹林组及黑骨藤水、正丁醇、氯仿、醋酸乙酯、石油醚提取部位的低、高剂量组。除空白组外,各组ig给药,空白组ig生理盐水。采用扭体法观察记录给药后15 min内小鼠扭体次数。采用热板法测定小鼠的痛觉反应时间。采用耳廓肿胀法检测小鼠耳廓肿胀度。采用棉球肉芽肿法：观测小鼠肉芽湿质量和干质量。结果 黑骨藤各提取部位对醋酸诱发小鼠扭体反应有显著的镇痛作用,其中黑骨藤正丁醇提取部位高剂量组效果最好,其疼痛抑制率为80.2%。黑骨藤正丁醇提取部位对热板法致痛有显著的镇痛作用,与空白组比较,能显著提高小鼠的痛阈值（P<0.05、0.01）。黑骨藤水、醋酸乙酯、石油醚提取部位对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的急性炎症有显著的抗炎作用,能明显减少小鼠耳廓肿胀度。黑骨藤各提取部位对小鼠肉芽湿质量和干质量均有抑制作用,其中正丁醇提取部位效果最好。结论 黑骨藤具有良好的镇痛抗炎作用。其中,正丁醇部位镇痛作用最好。     

电感耦合等离子体-质谱法测定注射用益气复脉(冻干)中的硫元素

目的 采用电感耦合等离子体-质谱（ICP-MS）法建立注射用益气复脉（冻干）中硫元素的含量测定方法。方法 以微波消解法处理样品,硝酸为消解试剂,样品经微波消解后,以锗（Ge）元素为内标元素,采用ICP-MS法测定药液中硫元素的量。结果 硫元素质量浓度在1～15 μg/mL内线性关系良好（r=0.999 0）;准确度试验（n=6）平均回收率为95.4%,RSD值为5.9%;结论 该方法简便、快速、准确,可用于测定注射用益气复脉（冻干）中硫元素的含量,为其质量控制、安全性评价提供一定参考。     

薄芝片的质量控制标准研究

目的:建立薄芝片的质量控制方法。方法:采用 TLC 方法,使用4%磷酸氢二钠的羧甲基纤维素钠溶液为粘合剂的硅胶 GF_(254)(10～40 μm)薄层板,以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(12∶6∶3∶3∶1)为展开剂,对薄芝片中核苷类成分腺苷进行定性鉴别;采用 HPLC 法,使用 Alltima C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-水(5∶95)为流动相,流速1.0mL·min~(-1),检测波长262 nm,柱温25 ℃,进样量20 μL,对薄芝片中的腺苷和尿苷同时进行含量测定。结果:腺苷的 TLC 鉴别专属性强;HPLC 测定,腺苷、尿苷的线性范围分别为0.12～0.62μg(r=0.9994,n=5)和0.18～0.88μg(r=0.9998,n=5),平均回收率(n=6)分别为99.22%(RSD=2.2%)和100.5%(RSD=2.0%)。结论:本方法简单、可靠、准确,可用于控制薄芝片的质量。     

注射用丹参多酚酸对脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用

目的 考察注射用丹参多酚酸（SAFI）对脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用。方法 线拴法构建大脑中动脉缺血再灌注（MCAO/R）大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、丁苯酞氯化钠注射液（阳性药,9 mL·kg^-1）组和SAFI低、中、高剂量（5.85、11.71、23.42 mg·kg^-1,11.71 mg·kg^-1为临床等效剂量）组,每组12只。假手术组和模型组给予0.9%氯化钠注射液,SAFI每天给药1次,丁苯酞氯化钠注射液每天给药2次,尾iv连续给药14 d。给药期间称大鼠体质量;给药前后对各组大鼠进行神经功能评分;给药后采用TTC染色法检测脑梗死体积;酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清中γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和超氧化物歧化酶（SOD）的水平;HE染色观察脑组织病理形态;尼氏染色观察海马区尼氏小体形态变化情况。结果 给药14 d后,与模型组比较,SAFI 5.85、11.71、23.42 mg · kg^-1组和丁苯酞氯化钠注射液组大鼠体质量显著增加（P ＜ 0.001）,脑组织梗死体积显著缩小（P＜0.001） ;SAFI 11.71、23.42 mg·kg^-1组和丁苯酞氯化钠注射液组神经功能评分显著降低（P＜0.05、0.01）,IFN-γ、IL-1β和TNF-α水平均显著降低（P＜0.01、0.001）,SOD水平显著升高（P＜0.01、0.001）; SAFI 23.42 mg·kg^-1组和丁苯酞氯化钠注射液组IL-6水平显著降低（P＜0.05、0.01）; SAFI可明显改善MCAO/R大鼠脑组织缺血半暗带区病理损伤,抑制尼氏小体数的减少。结论 SAFI对脑缺血再灌注大鼠脑损伤具有明显的保护作用。     

兔转化生长因子-β2基因的克隆及其表达的检测

目的　克隆兔转化生长因子 β2 (TGF β2 )基因 ,并获得其在兔重要脏器及角膜中的表达。方法　利用不同物种的相似序列设计相关引物 ,制备兔肝组织的RNA并逆转录 ,RT PCR技术获得TGF β2 基因蛋白编码区序列后克隆 ,RT PCR半定量及荧光定量PCR检测TGF β2 在兔重要脏器及角膜中的表达。结果　成功地克隆了兔TGF β2 的蛋白编码区序列 ,测序证实和人、大鼠及小鼠具有高度的同源性 ,含有TGF β2 的保守结构域 ,TGF β2 基因在兔心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肾上腺和角膜组织中均有不同程度表达。结论　利用同源序列克隆进化上保守的基因是简捷快速的方法。获得兔TGF β2 的基因有助于进一步研究其在机体重要脏器纤维化、肿瘤以及角膜疾病中的作用     

常染色体显性先天性白内障一家系致病基因的连锁分析

背景先天性白内障约1／3的病例是由遗传所致,已发现遗传性白内障有着极为明显的遗传异质性,了解先天性白内障的致病基因对其基因治疗极为重要。目的分析一个具有常染色体显性遗传特点的先天性白内障家系的临床表型特征,进行已知致病基因的筛查定位。方法对遗传性先天性白内障一家系共16名成员眼部进行详细的临床检查,包括6例患者,确定为本家系白内障患者的临床表型。收集其中11名家系成员的血液样本提取DNA,包括3名正常家系成员及其配偶、5例患者。利用连锁分析进行排除定位,并采用Schuelke报道的新方法,只合成普通引物及一种荧光标记的通用引物M13,进行聚合酶链反应（PCR）,对连锁区域内的候选基因进行基因序列分析。结果本家系的白内障遗传方式符合常染色体显性遗传特征。基因连锁分析表明,在D22S315得到最高LOD值为1．20,在D16S3068得到LOD值为0．6。CRYBB2基因所有编码区及外显子与内含子交界处未发现基因序列突变。结论本家系初步排除了CRYBB2基因与此家系先天性白内障的相关性。对这个家系的基因定位需要更进一步的全基因组扫描,以发现致病基因在染色体上的可疑区间。连锁分析中进行微卫星位点的PCR扩增时,利用合成荧光标记的通用引物M13,可以显著降低成本,并取得同样的实验结果。     

麦冬多糖的化学组成、分析方法和药理作用研究进展

麦冬具有生津解渴、润肺止咳的功效,其主要成分包括甾体皂苷、黄酮类、多糖类等,但是对其多糖类研究相对较少。主要综述麦冬多糖的化学组成、分析方法、药理作用等研究进展。麦冬多糖主要有MDG-1、Md-1、Md-2、OJP-1等;目前主要采用的分析方法有蒽酮-硫酸法、苯酚-硫酸法、3,5-二硝基水杨酸（DNS）比色法、近红外光谱结合偏最小二乘回归法等;麦冬多糖可有效地改善心血管系统疾病,具有耐缺氧、抗炎、抗肿瘤、抗氧化等多种药理作用。     

Cocktail法评价白香丹胶囊对大鼠体内CYP450酶活性的影响

目的：建立同时测定大鼠血浆中6种CYP450探针药物的方法,并采用Cocktail法研究白香丹胶囊对大鼠CYP450酶活性的影响。方法：选用茶碱(CYP1A2)、氯唑沙宗(CYP2E1)、甲苯磺丁脲(CYP2C6)、右美沙芬(CYP2D2)、奥美拉唑(CYP2D1)、咪达唑仑(CYP3A2)作为探针药物。大鼠随机分为对照组和给药组,给药组每天灌胃白香丹胶囊0.675 g?kg-1,对照组灌胃等量生理盐水,连续给药14天。第15天均灌胃给予6个探针药物,于不同时间点眼眶取血,采用LC-MS/MS法测定各探针药物浓度,计算药动学参数并进行组间t检验。结果：与对照组相比,给药组茶碱(P < 0.01)、氯唑沙宗(P < 0.01)、甲苯磺丁脲(P < 0.05)代谢显著加快,右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑代谢无显著性差异。结论：白香丹胶囊对大鼠CYP1A2有中强诱导作用,对CYP2E1、CYP2C6有弱诱导作用。