CD28在多发性硬化患者CD8+淋巴细胞的表达

目的探讨CD28在多发性硬化(MS)患者CD8+淋巴细胞的表达水平.方法流式细胞仪测定16例复发期MS患者和20例对照组外周血淋巴细胞CD28+、CD8+CD28-和CD8+CD28+的百分率.结果复发期MS患者淋巴细胞CD8+CD28-百分率低于对照组,CD28+和CD8+CD28+的百分率与对照组无明显差异;甲基强的松龙治疗对CD28+、CD8+CD28-和CD8+CD28+的百分率无影响.结论参与MS的发病的CD8细胞是CD8+CD28-细胞.     

小鼠FoxP3基因腺相关病毒的制备与鉴定

目的:构建携带小鼠FoxP3基因的重组腺相关病毒,并检测其在NIH3T3细胞的表达情况。方法:将FoxP3通过内部核糖体进入位点(IRES)与报告基因增强型绿色荧光蛋白连接,构建同时含有目的基因和报告基因的重组腺相关病毒(rAAV)表达质粒,通过磷酸钙沉淀法共转染HEK293细胞,收获并通过肝素亲和层析法纯化病毒,并对病毒纯度和滴度进行鉴定。利用携带FoxP3基因的重组病毒体外感染小鼠NIH3T3细胞,体外观察感染效率和目的基因转录情况。结果:包装成功的rAAV/FoxP3经纯化后获得了高纯度的rAAV/FoxP3,实时定量PCR检测rAAV/FoxP3的病毒滴度达到5.0×1012vg/mL,体外感染NIH3T3细胞,流式细胞术测定感染效率可达92.88%,实时PCR测定细胞内存在高水平FoxP3mRNA。结论:获得携带FoxP3-IRES-EGFP的rAAV,并可有效感染NIH3T3细胞,为进一步研究FoxP3的生物学功能提供了有效工具。     

人TCA-12-2/TCB-7.1真核双表达载体的构建与表达

目的：将T细胞抗原受体基因TCA-12-2和TCB-7.1共同构建在真核表达载体pDC315，用于哺乳动物细胞293转染研究。方法： 将分离得到的淋巴细胞总RNA反转录合成cDNA,以此为模板进行PCR扩增得到TCA-12-2基因；以实验室保存含TCB-7.1基因的质粒为模板，扩增得到TCB-7.1基因。随后酶切，连入载体pIRES2-AcGFP1，通过亚克隆连入载体pDC315，得到重组质粒pDC315-TCA-12-2-TCB-7.1。重组体质粒经酶切鉴定后，并对插入的TCA-12-2和TCB-7.1基因片段进行测序，将鉴定好的阳性重组质粒用脂质体介导转染293细胞，并通过RT-PCR和流式细胞仪检测TCA-12-2和TCB-7.1基因的表达情况。结果： TCA-12-2和TCB-7.1可以同时构建在载体pDC315上，RT-PCR和流式细胞仪检测发现TCA-12-2和TCB-7.1基因可以成功在293细胞上表达。结论：成功构建了含TCA-12-2和TCB-7.1基因的双表达载体。     

重症SIRS患者的正常甲状腺病态综合征

目的：探索全身炎症反应综合征（SIRS）患者的正常甲状腺病态综合征（ESS）的发生规律。 方法： 测定50例SIRS病人的总三碘甲状腺原氨酸（TT3）、总四碘甲状腺原氨酸（TT4）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离四碘甲状腺原氨酸（FT4）、促甲状腺素（TSH），并根据是否多脏器功能障碍综合征（MODS）分组。计算急性生理和慢性健康评估Ⅱ（APACHEⅡ）评分，记录病人转归以及从发病到检测的时间（患病时间）。 结果： TT3或FT3降低的45例。TT3与APACHEⅡ评分呈对数负相关（r＝－0.330，P<0.05）,TT3/TT4与患病时间呈对数负相关（r=－0.316, P<0.05）。MODS组的TT3、TT4、FT3水平显著低于无MODS组（P<0.05）。 结论： SIRS和MODS病人发生低T3、低T4可能性大，反映炎症反应对甲状腺轴的影响，随着病情加重、患病时间延长，影响进一步深化。     

转化生长因子-β/Smad信号通路研究进展

转化生长因子β(transform ing growth factor-,βTGF-β)可通过特异性结合并激活具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性的细胞表面受体启动各种应答。Sm ads蛋白是TGF-β超家族细胞内重要的信号转导和调节分子,活化的受体可刺激受体调节的Sm ads蛋白磷酸化,与Sm ad 4形成复合物入核调控靶基因的转录。TGF-β应答是细胞种类特异性的,并且受通路中各种成分和其他信号转导通路的调节。     

^32磷简易敷贴药膜治疗小儿皮肤血管瘤2450例疗效分析

目的　评价3 2 磷简易敷贴药膜治疗小儿皮肤血管瘤的效果 .方法　 2 4 5 0例不同年龄的血管瘤小儿接受3 2 磷简易敷贴药膜治疗 ,治疗次数为 1～ 9次 ,平均 3.5次 ;每次间隔 2个月 ,按不同年龄给不同的照射量 ,以治疗时间换算 ,每次治疗剂量为 0 .92 5MBq/cm2 × ( 12～ 4 2 )h .结果　血管瘤和血管痣治愈率 71.7% ,部分治愈 2 2 .5 % ,总有效率 94 .2 % ,无效者 5 .8% .其中血管瘤效果明显优于血管痣 (p<0 .0 1) ,并且年龄越小效果越明显 (p<0 .0 1) .结论　3 2 磷简易敷贴药膜治疗小儿皮肤血管瘤是一种治疗简便、疗效确切的方法 ,尽早治疗效果更明显     

HIV-1 B''亚型R5或R5/X4嗜性毒株在GHOST细胞的感染性分析

目的分析我国HIV-1B′亚型R5或R5／X4嗜性毒株在GHOST细胞的感染性。方法采用传统的共培养方法从HIV-1感染者PBMC中分离并培养病毒，用表达CD4和趋化因子受体CCR5或CXCR4的GHOST细胞系，测定毒株的辅助受体利用情况，使用相同病毒量即2mg的HIV-1 p24分别感染表达不同受体的GHOST细胞系，通过流式细胞仪检测分析绿色荧光蛋白（GFP）的表达反映病毒感染细胞的能力。结果35例B′亚型毒株利用CCR5受体，占22例（62．85％），双嗜性即CCR5／CXCR4均阳性占13例（37．15％）。GHOST-R5／X4细胞的感染性分析结果显示，R5／X4双嗜性毒株的感染性明显高于CD4〉200／μl的R5毒株的感染性（P〈0．05）；R5／X4毒株与CD4≤200／μl的R5毒株感染性比较差异无统计学意义（P〉0．05）；CD4〉200／μl的R5毒株与CD4≤200／μl的R5毒株感染性比较差异有统计学意义（P〈0．05）；GHOST-CCR5细胞感染性分析结果显示：R5／X4双嗜性毒株的感染性明显下降，与CD4〉200／μl的R5毒株的感染性比较差异无统计学意义（P〉0．05）。利用相同剂量的双嗜性毒株分别感染R5、X4或R5／X4的GHOST细胞系，显示双嗜性毒株可同时利用CCR5和CXCR4辅助受体，但69．23％的R5／X4毒株以CCR5受体为主，30．77％的R5／X4毒株以CXCR4受体为主。结论HIV-1B′亚型R5／X4病毒不仅有更广泛的宿主细胞嗜性，而且在GHOST-R5／X4细胞中感染性明显提高。持续使用CCR5受体的毒株在疾病进展的过程中虽然辅助受体的利用是一样的，但病毒感染细胞的能力增加。     

异体角膜刺激引起的人外周血T细胞及其亚群CD25分子表达

目的：观察异体角膜体外对人外周血T细胞及其亚群CD25分子表达的影响。方法： 异体角膜与外周血淋巴细胞体外共同培养后，进行单克隆抗体标记和流式细胞分析。结果： 对照组T细胞CD25表达为25.2％；受角膜或沸波醇酯（PDB）激活后T细胞CD25表达分别为56.8％和80.9％；受角膜和沸波醇酯共同激活后T细胞CD25表达为70.2％；受异体角膜激活后，CD4和CD8 T淋巴细胞CD25表达分别为67.3％和52.3％。结论： 异体角膜组织体外能够刺激人外周T细胞CD25表达和T细胞活化，CD4 T细胞比CD8 T细胞活化更明显。     

实时荧光定量RT-PCR监测恒河猴体内人/猴免疫缺陷病毒载量在传代过程中的变化

目的为分析中国SHIV/猕猴AIDS模型的病毒载量变化趋势,建立一种实时、灵敏、特异的针对人/猴免疫缺陷病毒的定量检测方法。方法体外转录制备RNA标准品,利用TaqManEZRT-PCR试剂盒的反应体系和针对SHIVgag保守区91个碱基的TaqMan探针和引物,建立一步法实时荧光定量RT-PCR。提取126份来自SHIV-CN97001感染恒河猴血浆病毒RNA并定量检测。结果利用梯度稀释的RNA标准品对反应体系进行优化,标准曲线下限达到2×102拷贝/ml,相关性(r>0.99)及重复性(CV=4.14%)均能达到测定要求。病毒载量的检测结果表明SHIV-CN97001在猴体内传代过程中病毒载量有先升后降的趋势,病毒载量通常在接种病毒或感染猴的全血后第14天达到高峰。血浆载量可达到105~106拷贝/ml。结论成功地建立了一步法定量SHIVRNA的实时荧光定量RT-PCR,为SHIV/恒河猴AIDS模型的建立与应用提供了灵敏的病毒载量检测方法。SHIV-CN97001的体内繁殖能力在猴体内传代过程中有所增强。     

我国脑膜炎奈瑟菌孔蛋白PorA、PorB的多态性分析

目的以蛋白质组学研究为基础,分析2003—2005年我国流脑暴发流行期间C群脑膜炎奈瑟菌菌株特征,建立以致病性相关蛋白多态性为目标的新分型方法。方法利用双向电泳和MALDI-TOF质谱鉴定分析2003—2005年流脑流行期内分离的66株C群脑膜炎奈瑟菌菌株及2株参考菌株的蛋白表达,重点分析与致病性相关的蛋白多态性特征。结果根据孔蛋白PorA、PorB在双向电泳中的多态性,建立了12个特征菌型。安徽菌株的PorA和PorB蛋白电泳谱型显示出了高度的一致性,而其他地区的菌株则显示出高度的多态性。结论PorA和PorB蛋白2-DE电泳谱型可以作为一种新的菌株分型方法,可能在菌型变迁检测和流脑暴发预警中具有重要应用前景。