棕榈酰化蛋白质组学分析揭示前列腺癌细胞中雄激素促进代谢相关蛋白棕榈酰化修饰

目的 筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白,探索前列腺癌去雄激素治疗外其他潜在的治疗靶点.方法: 以LNCaP细胞为研究对象,雄激素(Methyltrienolone,R1881,5 nmol/L)或DMSO(dimethyl sulfoxide)处理LNCaP细胞24 h,同时利用人工合成的炔基棕榈酸Alk-C16 (100 μmol/L)对细胞进行代谢标记,收集细胞,裂解,提取总蛋白,加入标记有叠氮化物的琼脂糖珠 (1 mmol/L), 室温反应1 h,利用叠氮化物与Alk-C16末端炔基发生点击化学反应形成的共价键将棕榈酰化修饰蛋白富集在琼脂糖珠上,进行蛋白质谱非标记定量分析(label-free quantitation, LFQ), 比较R1881处理和非处理细胞蛋白棕榈酰化修饰变化情况,筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白.结果: 实验共鉴定出907个潜在的棕榈酰化修饰蛋白(mascot score> 2, P<0.05), 其中有430个蛋白LFQ值至少有2次不为0.在这430个蛋白中有92个蛋白R1881处理与非处理样品LFQ比值大于 1.5(P<0.05), 说明雄激素能够显著促进该蛋白棕榈酰化修饰.利用Cytoscape软件对92个蛋白进行功能富集分类,发现已知功能蛋白可分为代谢相关,蛋白折叠相关和翻译起始相关3类,其中,代谢相关蛋白包括脂代谢(6个),糖代谢(7个)和呼吸电子传递链(8个)3部分,另外还有少量氨基酸代谢(2个)和其他代谢相关蛋白(2个).参与呼吸电子传递链的细胞色素b-c1复合体亚基2 (cytochrome b-cl complex subunit2, UQCRC2) 雄激素R1881处理和未处理样品LFQ比值最高(>3,P<0.05),说明该蛋白棕榈酰化修饰受雄激素诱导最为明显.LFQ比值最高为UQCRC2,其次为脂代谢相关的长链特异性酰基辅酶A脱氢酶(very long-chain specific acyl-CoA dehydrogenase, ACADVL)和糖代谢相关的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase, PGD), 但其LFQ比值均未超过3.结论: 代谢尤其是呼吸电子传递链相关蛋白的棕榈酰化调控机制的研究可能将为前列腺癌的诊疗和靶向药的研发提供新的指导思路.     

角蛋白18与剪切因子PSF相互作用介导PSF的膜易位并维持髓系白血病细胞的化疗敏感性

目的 鉴定多嘧啶结合蛋白相关的剪切因子(polypyrimidine tract-binding protein-associated splicing factor, PSF)在髓系白血病细胞内的伴侣蛋白,探讨PSF在敏感HL60细胞和耐药的HL60/DOX细胞中易位细胞膜的模式和机制.方法: 通过脂质体瞬时转染PSF真核表达载体过表达PSF,进一步结合流式细胞术在转染后24 h,48 h,72 h检测PSF在细胞膜上的表达水平.构建链亲和素结合肽(streptavidin binding peptide,SBP)和PSF的融合表达载体,转染载体,过表达SBP-PSF融合蛋白.通过链亲和素磁珠共沉淀法和质谱分析,鉴定PSF在细胞内的伴侣蛋白.在慢病毒载体中插入角蛋白18 (cytokeratin 18,K18)干扰序列,转染293T细胞制备病毒液.用慢病毒感染HL60和HL60/DOX细胞,获得稳定干扰K18的细胞株.结合流式细胞术检测干扰K18的HL60和HL60/DOX细胞中细胞膜上PSF的表达水平,由此证实CK18在HL60和HL60/DOX细胞中协同转运PSF易位细胞膜机制的异同.结果: 瞬时过表达PSF后的24 h,48 h,72 h连续3 d检测细胞膜PSF表达水平,HL60敏感株细胞膜上PSF表达率分别为22.4%±3.5%, 37.9%±6.0%, 58.3%±8.8%;耐药株HL60/DOX细胞膜上PSF的表达率分别为4.7%±0.5%, 3.9%±0.6%, 2.9%±0.6%;各时间点下敏感株和耐药株的差异有统计学意义,P<0.01.免疫共沉淀和质谱证实K18为PSF在细胞内的伴侣蛋白.干扰K18的表达后,再次分析细胞膜PSF表达,发现PSF在敏感株细胞膜上的表达水平由原来的48.9%±5.4% 降至6.2%±1.0%;在耐药株细胞膜上的表达水平由9.11%±1.2%降至2.21%±0.51%.结论: K18是PSF在细胞内的伴侣蛋白,在敏感细胞中,K18与PSF相互作用可帮助PSF向细胞膜转运;而在耐药株中,由于该功能障碍导致PSF在胞内发生积累从而介导耐药性.     

慢性支气管炎大鼠内皮素和肾上腺髓质素水平的变化及牛磺酸的作用

目的:探讨内皮素(endothelin,ET)和肾上腺髓质素(adrenomedullin,AdM)在慢性支气管炎大鼠血浆、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)和肺组织中含量的变化及牛磺酸的影响。方法:实验分为慢支组、牛磺酸组和对照组,每组6只大鼠。大鼠吸入含10-6(体积分数)二氧化硫的混合空气建立慢性支气管炎模型。放免法测定ET1和AdM含量。结果:血浆、BALF和肺组织ET1含量,慢性支气管炎动物比对照动物分别增加239%、243%和367%(P<0.01),牛磺酸组比慢支组分别降低31.7%、36.7%和62.6%(P值分别小于0.05、0.01和0.01)。血浆、BALF和肺组织AdM含量,慢支组大鼠比正常对照大鼠分别增加40%、100%和138%(P<0.01),牛磺酸组大鼠比慢支组分别减少18.6%、28.5%和29.5%(P值分别小于0.05、0.01和0.01)。结论:慢性支气管炎病程中ET1和AdM可能发挥一定作用;牛磺酸可能通过阻止ET1和AdM调节紊乱的发生发挥保护作用。     

不同转移潜能人前列腺癌细胞中KAI1基因的表达

目的:探讨人前列腺癌细胞转移潜能与KAI1基因表达的关系.方法:运用Northern印迹杂交检测KAI1基因在不同转移潜能人前列腺癌细胞中的表达,以甲基化分析和聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)研究KAI1低表达的机制.结果:在转移性人前列腺癌细胞系PC3和PC3M中不论其转移潜能强弱,KAI1 mRNA表达均降低.甲基化分析未发现KAI1基因5'-启动子部位CCm5CGGG甲基化.PCR-SSCP分析显示:KAI1基因第7外显子在PC3和PC3M均显示异常带,PC3M较弱.结论:KAI1基因表达降低与人前列腺癌的转移有关,但其转移潜能的强弱可能不取决于KAI1的调控.KAI1基因的低表达与5'-启动子部位CCm5CGGG甲基化无关,可能与该基因的突变失活有关.     

6所医学院校学报论著中科研设计类型分析

（１）目的 分析５年来６所医学院校学报论著中各种科研设计类型的应用情况及其变化趋势。（２）方法 评阅了１９９２,１９９７年６所医学院校学报论著４４４篇和５２１篇,对其设计类型、设计存在问题及５年来的变化趋势进行调查。（３）结果 １９９２年和１９９７年发表的９６５篇论著中,构成比占前５位的是：病例分析（３１．４％）,非随机同期对照研究（２１．６％）,随机同期对照动物实验（１３．７％）,形态学描述（６     

抗中性粒细胞胞浆抗体在肾炎综合征中的检测及临床意义

目的 探讨抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）及其靶抗原检测在肾炎综合征中的临床意义。方法 应用间接免疫荧光（IIF）检测100例肾炎综合征患者血清抗中性粒细胞胞浆抗体,对其阳性的29例用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测靶抗原髓过氧化物酶（MPO）和蛋白酶3（PR3）。结果 ⅡF检测肾炎综合征ANCA阳性率为29％,其中胞浆型10％、核周型19％。急性型肾炎、狼疮性肾炎、紫癜性肾炎阳性率分别为56％、20％和15％。ELISA检测在急进性肾炎和紫癜性肾炎大多数识别靶抗原MPO,狼疮性肾炎ANCA不识别MPO或PR3。结论 ANCA在急性性肾炎和狼疮性肾炎中阳性率高,有重要诊断意义,对狼疮性肾炎活动及疗效判断也具有参考价值。     

尿道压力分布图对α受体阻滞剂治疗良性前列腺增长效果 …

目的：研究尿道压力分布图（ＵＰＰ）对良性前列腺增长（ＢＰＨ）患者α肾上腺素能受体阻滞剂治疗效果的预测。方法：用改良苄胺唑啉ＵＰＰ试验将ＢＰＨ患者分为阳性及阴性组,比较ＵＰＰ图诸参数之差异。结果：１４３例ＢＰＨ患者行改良苄胺唑啉ＵＰＰ试验,阳性６４例,占全部病例（４５７例）的１４．０％。资料完整者阳性组（３８例）及阴性组（２８例）试验前最在尿流率（Ｑｍａｘ,ｍｌ／ｓ）及ＵＰＰ诸参数无显著性差异（ｐ〈     

尿道压力分布图对α受体阻滞剂治疗良性前列腺增生效果的预测

目的:研究尿道压力分布图(UPP)对良性前列腺增生(BPH)患者α肾上腺素能受体阻滞剂治疗效果的预测.方法:用改良苄胺唑啉UPP试验将BPH患者分为阳性及阴性组,比较UPP图诸参数之差异.结果:143例BPH患者行改良苄胺唑啉UPP试验,阳性64例,占全部病例(457例)的14.0%.资料完整者阳性组(38例)及阴性组(28例)试验前最大尿流率(Qmax,ml/s)及UPP诸参数无显著性差异(P>0.05),阳性组Qmax增加、UPP诸参数减少有显著性差异(P<0.01).阳性组试验前后相比膀胱颈压及前列腺部压力降低低于膜部,试验后此两处压力相对值增高.结论:用UPP图形不能代替苄胺唑啉UPP试验来预测BPH患者α受体阻滞剂治疗效果,BPH伴功能性梗阻者对α受体阻滞剂最敏感区是远段尿道括约肌.     

脑复素注射液中乙酰胆碱活力的探讨

[目的 ]测定自制的脑复素注射液中乙酰胆碱的活力 .[方法 ]用自制的乙酰胆碱传感器 ,参照阿尼生物化学检查法测定活性 .[结果 ]自制的脑复素注射液和奥地利产脑活素中的乙酰胆碱活力相当于 86 0mmol/L .[结论 ]自制的药中多肽含量高 ,而乙酰胆碱活性也高     

冠心病患者QT间期离散度改变的临床意义

目的　探讨冠心病患者心电图QT间期离散度的改变及临床意义。方法　对 118例冠心病患者行选择性冠状动脉造影 ,以无血管狭窄者为对照组 ,以冠脉血管狭窄程度 6 0 %～ 10 0 %者为观察组。测定QT离散度 ,再把观察组按有无心衰分为两组进行比较。结果　对照组与观察组的QT离散度分别为 38± 11ms和 5 4.1± 2 2 .3ms(P <0 .0 0 1)。有、无心衰组的QT离散度分别为 6 2 .1± 2 0 .2ms、5 0 .3± 2 7.8ms两组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　心电图QT离散度的改变与心肌缺血的程度呈正相关。