先天性软骨发育不全成纤维细胞生长因子受体3基因1138位核苷酸点突变的检测

目的 验证成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor 3，FGFR3)跨膜区1138位核苷酸为先天性软骨发育不全突变热点及用变性梯度电泳方法筛查的效果。方法 对17例临床诊断为先天性软骨发育不全患者进行基因组DNA聚合酶链反应－限制性酶切片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)分析，并用变性梯度凝胶电泳（denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)进行其它突变位点的筛查。结果 17例患者中14例RFLP检测显示能被Sfc I酶切，提示存在1138位核苷酸G→A的转换，且均为杂合子。17例用Msp I酶切均阴性，提示无G→C的颠换。DGGE方法的筛查中，酶切阳性的14例标本均显示存在杂合型突变。3例PCR－RFLP检测阴性的标本未显示突变位点，提示在该扩增区域确实不存在突变位点。结论 FGFR3跨膜区1138核苷酸G→A的突变是软骨发育不全的主要发病机理，DGGE可作为筛查某一区域基因突变的敏感而可靠的检测手段，尤其是对杂合子的检测。     

缺血预处理对大鼠视网膜保护作用的研究

目的：观察缺血预处理对大鼠后续持续性缺血视网膜是否具有保护作用。 方法： 阻断双侧颈总动脉血流（2VO），造成SD大鼠视网膜不完全性缺血，其中单纯缺血组直接结扎双侧颈总动脉，预处理组在结扎血管之前，采取重复两次2 min缺血-3 min再灌注的处理，实验对照组的大鼠术中暴露而不结扎双侧颈总动脉，正常对照组未经任何处理。术后1、3、7 d，分别灌注取材。用体视学方法测量视网膜形态学改变，用末端脱氧核苷酸缺口标记和免疫组化方法观察视网膜细胞凋亡及bcl-2的表达情况，比较观察缺血预处理对视网膜后续持续性缺血的影响。 结果： 预处理缺血组大鼠视网膜各层厚度均薄于一般缺血组；缺血所致的凋亡细胞数目较少，仅见于内核层，术后1-7 d节细胞层内未见有凋亡细胞，节细胞数密度无明显变化；bcl-2的表达弱于同一时间的单纯缺血组。 结论： 缺血预处理对缺血视网膜具有保护作用。     

重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂预防治疗恒河猴感染SARS-CoV的试验研究

目的评价重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对恒河猴感染SARS-CoV的预防治疗作用。方法采用鼻腔喷雾法(剂量为60万单位/鼻孔)研究了重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对感染SARS-CoV的恒河猴预防治疗效果。结果试验组(5只)和对照组(5只)相同时间检测的咽拭子等标本中,Real-time PCR检测和病毒分离均未检出病毒。攻毒后病毒导致机体产生的中和抗体和IgG抗体的反应也较对照组弱。血液学指标检测结果表明试验组动物攻毒后各项指标较试验前比较没有显著性改变;病理结果显示试验组2只恒河猴肺组织形态基本正常,其余3只猴有肺间质性炎,表现肺间隔增厚、单核样细胞为主的炎细胞浸润,其中1只增厚的肺间隔有局灶相互融合,这3只猴肺部病变与对照组的病变表现相似,且病变累及范围较对照组小;其他各受检脏器均未见明显异常。结论重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂可以有效阻断或减弱SARS-CoV对恒河猴的感染。     

原发性高血压患者血清可溶性E选择素水平与胰岛素抵抗的关系

目的:探讨高血压病患者血清可溶性E-选择素(sE-selectin)浓度与胰岛素抵抗、尿酸及血脂的关系。方法:测定186例高血压病患者(男75例,女111例)的空腹血清sE-selectin、血糖、胰岛素、尿酸、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的浓度,稳态模式评估法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。分析血清sE-selectin浓度与其它各项参数的相关性。结果:以HOMA-IR50%位点,作为判断胰岛素抵抗的切割点,把高血压病患者分为胰岛素抵抗组(IR)与胰岛素敏感组(IS)。男性组血清sE-selectin浓度(50.1±17.8)μg/L显著高于女性组(40.6±16.6)μg/L;男性IR组(51.6±16.8)μg/L与IS组(48.5±18.8)μg/L无显著差异;女性IR组(45.1±18.0)μg/L显著高于IS组(36.0±13.7)μg/L。逐步回归分析显示,男性组HOMA-IR非血清sE-selectin浓度的独立预测因子,但女性组HOMA-IR是血清sE-selectin浓度的独立预测因子;尿酸和血脂均非血清sE-selectin浓度的独立预测因子。结论:女性原发性高血压患者血清sE-selectin浓度与胰岛素抵抗直接相关,男性则无直接相关;尿酸及血脂与血清sE-selectin浓度均无直接相关。     

SARS冠状病毒棘突蛋白的S1蛋白诱导小鼠产生中和抗体的研究

目的 研究SARS冠状病毒棘突蛋白受体结合部位S1的免疫原性，为SARS的实验诊断和新型疫苗的研究提供依据。方法 用克隆有哺乳动物细胞密码子优化的SARS-CoV S1基因的质粒pcDNA3．1／S1或P-S1Ig转染293T细胞，用细胞的上清液纯化S1蛋白。以pcDNA3．1／S1质粒对BALB／c小鼠进行2次基因免疫，以纯化的S1蛋白进行加强免疫。用ELISA法检测小鼠抗SARS-CoV的特异性IgG抗体，并在Vero E6细胞上做体外中和实验，检测中和抗体。结果 S1蛋白诱导小鼠产生抗SARS-CoV的特异性抗体；1：1499．68稀释的S1蛋白免疫的小鼠血清可保护50％的细胞对1000TCID50的病毒攻击，而阴性对照血清不能保护细胞对病毒的感染。结论 SAPS冠状病毒棘突蛋白受体结合部位S1能有效诱导机体产生具有高效保护作用的中和抗体免疫反应，可望发展成为理想的SARS棘突蛋白亚单位疫苗。     

肾小管上皮细胞转分化过程中ILK的表达变化及大黄素对其的干预效应

目的:研究信号蛋白ILK在IL-1β诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(TEMT)中的表达变化以及大黄素是否是通过抑制ILK的表达而影响IL-1β诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化.方法:以体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)为研究对象,分为空白对照组、大黄素对照组、IL-1β诱导组、IL-1β加大黄素组.在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫双标法检测a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)和E-钙黏连素(E-cadherin)的表达;免疫单染检测ILK的表达;ELISA法测定培养细胞分泌的纤维连接蛋白(FN)含量.结果:IL-1β诱导细胞转变为明显类似成纤维细胞形态,增加a-SMA的表达[(65.5±1.7)vs(140.4±3.0),P<0.05],减少E-cadherin的表达[(82.5±1.0)vs(36.0±2.8),P<0.05),促进ILK的表达[(36.1±3.1)vs(82.4±1.2),P<0.05],促进FN的合成[(54.6±3.1)mg/Lvs(124.8±3.2)mg/L,P<0.05],加入大黄素后上述变化受到明显抑制.结论:在IL-1β诱导的TEMT中ILK的表达是明显上调的,大黄素可能通过下调ILK的表达而抑制IL-1β诱导的TEMT.     

红景天镇静催眠作用的实验研究

目的探讨中药红景天(Rhodiola rosea)的镇静催眠作用。方法取雄性SD大鼠30只,设正常对照组(不灌服任何药物)、阴性对照组(灌服羧甲基纤维素钠溶液)、地西泮组(灌服地西泮溶液)、红景天低剂量组(灌服低剂量红景天)、红景天中剂量组(灌服中剂量红景天)和红景天高剂量组(灌服高剂量红景天),每组5只。灌服药物1h后,各组动物按照55mg/kg的剂量腹腔注射0.1%戊巴比妥钠溶液,记录每只大鼠从腹腔注射戊巴比妥钠到翻正反射消失的时间为睡眠潜伏期,翻正反射消失的到翻正反射开始出现的时间为睡眠时间,观察灌服不同剂量红景天对大鼠睡眠潜伏期及睡眠时间的影响。结果与正常对照组(3.24±0.22、93.96±2.25)相比,灌服中剂量及高剂量的红景天可以缩短大鼠的睡眠潜伏期(2.42±0.33,P<0.01;2.16±0.13,P<0.01),亦可延长大鼠的睡眠时间(102.54±3.15,P<0.05;107.10±7.75,P<0.05)。结论中剂量及高剂量的的红景天对大鼠具有镇静催眠作用。     

综合医院内科与中医科门诊抑郁障碍患病率比较

目的调查沈阳市不同级别综合医院内科和中医科门诊病人抑郁障碍的患病率。方法采用分层随机整群抽样方法抽取沈阳市23家综合医院进行调查,共调查7448例年龄?15岁的内科和中医科门诊病人。调查员在门诊于病人就诊前使用扩展的一般健康问卷(GHQ-12)为筛查工具,将病人分为精神疾病高、中、低危险组,然后由精神科医生使用DSM-Ⅳ定式临床检查(SCID-I/P)对高、中、低危险组100%、40%、10%的调查对象进行SCID诊断。结果沈阳市综合医院内科门诊任何抑郁障碍的总现患率为11.01%(95%CI10.05%-12.06%),中医科抑郁障碍患病率为16.22%(95%CI13.23%-19.87%),高于内科门诊抑郁障碍患病率,RR值为0.68。结论沈阳市综合医院中医科门诊抑郁障碍患病率高于内科门诊,应该更加关注中医科就诊患者的抑郁障碍问题。     

20株阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因分析

目的明确临床分离的20株阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对20种抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析氨基糖苷类修饰酶基因型。结果该20株菌呈现多重耐药，对亚胺培南和美罗培南均敏感，对阿莫西林、阿莫西林／克拉维酸、头孢噻吩和头孢西丁完全耐药，对头孢吡肟及4种氨基糖苷类抗生素阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星的耐药率分别为25．0％、60．0％、85．0％、90．0％和90．0％，其余9种的耐药率在80．0％～95．0％之间。19株(95．0％)检出氨基糖苷类修饰酶基因；aac(6′)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ和aph(3′)-Ⅵ基因的阳性率分别为80．0％、50．0％、40．0％、5．0％和5．0％；而aog2(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ和aac(6′)-Ⅱ基因均阴性。结论临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重，氨基糖苷类修饰酶基因携带率很高。     

时间分辨荧光免疫分析方法学评价

目的：通过内质控的定量分析，对时间分辨荧光分析的方法学进行客观评价。方法：以促甲状腺激素检测为例，对系统探测灵敏度 ，低、中、高持控血清的批内和批间精密度，批间稳定性参数Slope、ED20、ED50、ED80等4项指标，系统探测的准确度（回收试验），系统探测的有效性（平行试验），受试者工作特性曲线（receiver operator characteristic,ROC）等进行定量测定和描述。结果；TSH的最小测定值为0．002μU/mL.低、中、高3种质控样品批内和批间变异系数均小于5％，批间稳定性参数各变异系数均小于5％，与统计学要求相一致，且符合标准曲线质控参数的重现性。回收试验满足临床要求，符合检验统计结果。理论值与实测值间作回归分析，相关系数r=0．999。ROC显示，甲亢诊断的最佳阈值为0．3μU/mL，甲低诊断的最佳阈值为5．0μU/mL。甲亢敏感度为89．3％，特异度为93．3％，准确度为90．1％，阳性似然比为13．4，甲低敏感度为83．8％，特异率为90．9％，准确度为86．4％，阳性似然比为9．2。结论：时间分辨荧光免疫分析方法是一种效果好、准确度高、灵敏度高、特异性强、测试精度良好的自动化免疫分析方法。