小干扰RNA抑制胃癌细胞肝素酶表达及侵袭的实验研究

目的 利用RNA干扰（RNAi）技术封闭胃癌细胞系SGC7901肝素酶表达,观察其对肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法 体外转录合成小干扰RNA（siRNA）,经脂质体转染胃癌细胞系;结合逆转录（RT）-PCR,Western印迹检测类肝素酶mRNA及蛋白质表达;通过体外侵袭实验评价肝素酶RNAi后胃癌细胞系的侵袭能力变化。结果 肝素酶siRNA分子可以特异性地抑制SGC7901细胞肝素酶mRNA,抑制率达（70±6）％;肝素酶RNAi后SGC7901细胞的侵袭抑制率达（61±36）％。结论 靶向肝素酶基因的siRNA分子能特异性抑制其蛋白表达水平,降低肿瘤细胞的侵袭能力。肝素酶是促进胃癌细胞侵袭转移的关键分子,并可为抑制胃癌侵袭转移提供新策略。     

Isolation of human antibodies against hepatitis E virus from phage display library by immobilized metal affinity chromatography

Objective To isolate human antibodies against hepatitis E virus from phage display library by a new method of panning phage antibody library based on immobilized metal affinity chromatography （1MAC）. Methods Phage antibody library was allowed to mix with hex-His tagged expressed HEV specific antigen, NE2, in solution for adequate binding before affinity resin for hex-His was added. The non-specific phage antibodies were removed by extensive washing and the specific bound phage antibodies could then be eluted to infect TG1 or repeat the binding process for subsequent rounds of purification. The specificity of the selected human antibodies were tested by antigen competitive ELISA, human sera blocking ELISA, scFv expression, and sequence analysis. Results His-NE2 specific recombinant phages were successfully enriched after panning procedure. Two individual phage clones, 126 and 138, showed 50% inhibition in NE2 antigen competition ELISA and obvious blocking effect by HEV positive serum in blocking ELISA. Soluble scFv of 126, 138 bound to NE2 specifically. Conclusion Two specific human phage antibodies against hepatitis E virus （HEV） from phage display library were isolated by immobilized metal affinity chromatography. The immobilized metal affinity chromatography applied to phage antibody selection was a helpful supplement to the selection in solution.     

RKIP、P27表达与鼻咽癌发生、发展的关系*

目的 探讨Raf激酶抑制蛋白（RKIP）、P27蛋白在鼻咽癌组织中的表达及与鼻咽癌发生、发展的关系。方法 选取2012年3月—2016年1月南华大学附属第一医院病理科收集的鼻咽癌黏膜组织76例（病例组）和正常鼻咽组织30例（对照组）,采用免疫组织化学检测两组标本中的RKIP、P27蛋白表达水平,并分析RKIP、P27蛋白与鼻咽癌发生、发展的关系。结果 两组RKIP蛋白和P27蛋白阳性表达率比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,病例组的RKIP蛋白阳性表达率55.26%低于对照组的86.67%,病例组的P27蛋白阳性表达率77.63%高于对照组的46.67%;发生远处转移的鼻咽癌患者、Ⅲ期和Ⅳ期鼻咽癌患者、发生淋巴结转移的鼻咽癌患者病灶组织中的RKIP蛋白阳性表达率低于未发生远处转移的鼻咽癌患者、Ⅰ期和Ⅱ期鼻咽癌患者、未发生淋巴结转移的鼻咽癌患者,差异有统计学意义（P?<0.05）;发生远处转移的鼻咽癌患者、Ⅲ期和Ⅳ期鼻咽癌患者、发生淋巴结转移的鼻咽癌患者病灶组织中的P27蛋白阳性表达率高于未发生远处转移的鼻咽癌患者、Ⅰ期和Ⅱ期鼻咽癌患者、未发生淋巴结转移的鼻咽癌患者,差异有统计学意义（P?<0.05）。结论 鼻咽癌组织中RKIP蛋白低表达、P27蛋白高表达,并且与鼻咽癌肿瘤的发生、发展密切相关。     

钼酸钠对MNU和MNNG诱导V79细胞姐妹染色单体互换频率的作用

实验结果证实、预加10~(-7)～10~(-4)mol/L浓度钼酸钠能明显减少MNU诱导的V79细胞姐妹染色单体互换(SCE)频率。中等剂量(10~(-5)～10~(-6)mol/L)效果最明显,分别由18.32/细胞降至12.64和12.94/细胞(P<0.001);钼酸钠无论同时或预先作用于细胞,对于MNNG引起的V79细胞遗传物质损伤无明显保护作用。     

产后下肢深静脉血栓形成的综合外科治疗

目的：分析产后下肢深静脉血栓形成(DVT)的原因，探讨其综合外科治疗方案。方法：对发病36h内转入我科的11例DVT患者即行下腔静脉临时滤器植入术，术后以大剂量尿激酶溶栓，并予低分子肝素抗凝治疗。结果：所有病例均治愈出院，无1例出现肺栓塞。3例深静脉复通，瓣膜功能恢复；5例深静脉不全复通，瓣膜功能未能恢复；3例深静脉未能复通，症状缓解，肢体功能恢复。结论：高危产妇是DVT的高危因素。早期发现DVT的病例予下腔静脉临时滤器植入，术后以大剂量尿激酶溶栓，并予低分子肝素抗凝治疗，能提高DVT的深静脉早期复通率和预防发生肺栓塞。     

孤立性蝶窦真菌病临床诊治分析

目的 回顾性分析孤立性蝶窦真菌病的临床特点,评估鼻内镜手术治疗该病的临床疗效.方法 选取2005年2月至2017年2月于成都医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科就诊,并经病理确诊,临床资料完整的60例孤立性蝶窦真菌病患者为研究对象,总结其临床表现及影像学特点.所有患者均接受鼻内镜下蝶窦开放、病灶清除术,术后随访3个月~3年,根据症状缓解程度、快慢,有无复发等指标评估手术疗效.主观病情评估采用视觉模拟评分(VAS)评估,客观病情采用Lund-Kennedy 评分法对患侧鼻腔评分,比较术前及术后3、6、12个月评分的差异.结果 患者主要临床表现为头痛、涕中带血、鼻涕异味及视力改变,其中头痛43例(71.67%);涕血或回吸性血涕10例(16.67%);鼻涕异味5例(8.33%);视物模糊2例(3.33%).术前鼻部冠状位及横断面CT主要表现为蝶窦内不均匀的软组织密度影.术前鼻内镜检查发现合并有鼻中隔偏曲36例(60.00%),嗅裂区息肉15例(25.00%).56例患者术后7 d症状缓解明显,半年后治愈率为96.7%(58/60).术后3、6、12个月VAS评分与术前比较,差异有统计学意义(P<0.05).术后3、6、12个月鼻内镜Lund-Kennedy评分与术前相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 孤立性蝶窦真菌病发病隐匿,头痛是非特异性临床表现,鼻腔解剖结构异常致蝶窦口狭窄或阻塞可能为该病主要诱因.鼻窦CT检查有助于临床诊断,可提供重要的诊断依据.手术标本的病理检查为确诊的金标准,经鼻-鼻内镜下蝶窦开放、病灶清除术是治疗孤立性蝶窦真菌病的首选方法.     

HepaCAM secreted by renal cell carcinoma 786-0 cells through exosomes pathway inhibits cell proliferation

目的 探讨肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)在肾癌786-0细胞中通过exosomes途径分泌到细胞外及是否可以抑制肿瘤细胞增殖.方法 将携带hepaCAM基因的重组腺病毒质粒瞬时转染786-0细胞,Western blot鉴定hepaCAM基因在786-0中的表达;莫能星(monensin)和二甲基阿米洛利(DMA)处理转染后肿瘤细胞,检测肿瘤细胞上清液及exosomes中hepaCAM蛋白的量的变化.MTT法检测hepaCAM蛋白是否可以抑制肿瘤细胞增殖.结果 成功构建并转染hepaCAM重组腺病毒质粒,在肿瘤细胞上清液中检测到hepaCAM蛋白的分泌,经药物处理后,莫能星明显增加了转染后肿瘤细胞的hepaCAM蛋白的分泌量,而二甲基阿米洛利处理转染后肿瘤细胞,能显著抑制细胞上清液中hepaCAM的分泌量.Western blot进一步证明hepaCAM蛋白存在于exosomes上.成功转染hepaCAM基因的肾癌细胞分泌的exosomes明显抑制了肿瘤细胞增殖.结论 hepaCAM蛋白可能通过exosomes途径分泌到肿瘤细胞外并抑制肿瘤细胞增殖.     

Histatin1 improves proliferation and migration in human human skin fibroblasts

目的 了解富组蛋白1(histatin1,Hst1)对人成纤维细胞增殖和迁移功能的影响.方法 将人成纤维细胞按常规方法传代培养,分为空白对照组(DMEM+1％小牛血清)、A组(100 μg/ml Hst1)、B组(30 μg/ml Hst1)、C组(3μg/mlHst1),细胞计数法观察不同浓度Hst1(3～ 100μg/ml)在不同时相点(24、48、72 h)对人成纤维细胞增殖功能的影响;将已融合的人成纤维细胞分为丝裂霉素C处理组及丝裂霉索C未处理组,各组中再次分为空白对照组(DMEM +1％小牛血清)、Ⅰ组(30 μg/ml Hst1)、Ⅱ组(10 ng/ml rhEGF)、Ⅲ组(30 μg/ml Hst1+ 10 ng/ml rhEGF)、Ⅳ组(15 μg/ml Hst1 +5 ng/ml rhEGF)、Ⅴ组(15 μg/ml Hst1+ 10 ng/ml rhEGF),通过体外细胞划痕实验考察Hst1对人成纤维细胞迁移功能的影响.结果 ①不同浓度的Hst1能够促进人成纤维细胞增殖,与浓度及时间无明显依赖关系,24h时间点A、B组细胞数显著高于其余各组(P ＜0.01);②30μg/ml Hst1能促进细胞划痕创面愈合,8h划痕愈合率约37.7％,与rhEGF联合应用时促划痕愈合率高于单独用药;利用丝裂霉素C排除细胞增殖作用后,30 μg/ml Hst1较空白对照组无促进细胞迁移功能(P＞0.05),划痕愈合率较丝裂霉素C未处理对应组下降,但无统计学意义,且与rhEGF联合应用时促划痕愈合率与单独用药无统计学差异(P＞0.05).结论 Hst1能够促进人成纤维细胞增殖,但促迁移功能不明显.Hst1联合rhEGF使用时对人成纤维细胞划痕创伤愈合具有协同促进作用.     

急性低氧环境下热休克蛋白72在大鼠肾脏中的表达及意义

目的 探讨急性低氧环境下大鼠肾脏热休克蛋白72（heat shock protein,HSP72）的表达.方法 将30只雄性SD大鼠随机分为急性低氧组：12 h、24 h、48 h、72 h、1 w组,同时设立对照组（西宁地区）.将五组大鼠放入低压氧舱建立急性低氧模型,分别在不同时间段取大鼠肾脏组织用蛋白免疫印迹（Western Blotting）法检测HSP72表达水平;收集大鼠尿液,用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测尿微量白蛋白及尿肌酐浓度.结果 大鼠急性缺氧后,其肾组织中HSP72蛋白的表达随着缺氧时间的延长逐渐升高,72 h达最高水平（2.68±0.08）,到1 w时其表达水平有所下降（1.59±0.17）,各组与对照组（0.19±0.12）比较差异均有统计学意义（P＜0.01）;大鼠尿微量白蛋白与尿肌酐比值从48 h开始升高,48 h组（235.40±20.60）与对照组（169.63±17.45）比较差异有统计学意义（P＜0.05）,72 h（378.12±61.31）、1 w组（504.55±48.77）与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 急性低氧可以引起大鼠尿微量白蛋白排泄量增加,并随着缺氧时间的延长而增加,同时伴有肾脏HSP72表达的增加,但二者表达呈现不一致性.提示缺氧是引起肾脏损伤的重要原因,虽然HSP72升高是机体保护性应激反应,但在急性缺氧时,并不能充分缓解缺氧引起的脏器损伤,其保护作用可能具有一定的滞后性.     

Subareolar and peritumoral injection identify similar sentinel nodes for breast cancer

Background Sentinel lymph node (SLN) mapping with radioisotope and blue dye is rapidly becoming the standard of care for breast cancer. The optimal location for injection of radioisotope and blue dye is still being investigated. The goal of this study was to determine whether blue dye injection into the subareolar (SA) location localized the same sentinel nodes as the peritumoral (PT) location for patients with breast cancer. Methods Three hundred thirty-two patients with biopsy-proven operable breast cancer or ductal carcinoma in situ at two institutions underwent SLN mapping. Eighty-three patients had PT injection of blue dye (group 1), and 249 patients had SA injection of blue dye (group 2). All patients underwent PT injection of^99mTc-labeled sulfur colloid. Results The two groups were similar in age, previous biopsy type, and tumor size, location, and histology. The mean number of SLNs identified was 2.4 (range, 0–9) in group 1 and 2.5 (range, 0–11) in group 2. The SLN identification rate was 95% for group 1 and 97% for group 2. The isotope success rate was 94% for both groups. The blue dye success rate was 84% for group 1 and 90% for group 2. The isotope/blue dye concordance rate was 87% for group 1 and 90% for group 2. At a median follow-up of 28 months (range, 14 to 40), there were no axillary recurrences in any of the 332 patients. Conclusions These data suggest that delivery of mapping reagents in the SA and PT locations identifies similar lymph nodes. Because of simplicity and the similarity in node identification between SA and PT injection, further investigation of the SA site for delivery of SLN mapping reagents for breast cancer is warranted. Presented at the 54th Annual Cancer Symposium, Society of Surgical Oncology. Washington, DC, March 15–18, 2001.