Lymphoblast purine pathway enzymes in B-cell acute lymphoblastic leukemia

Activities of enzymes of the purine metabolic pathway, adenosine deaminase (ADA), purine nucleoside phosphorylase (PNP), and 5'- nucleotidase (5'-N), were investigated in the lymphoblasts of a patient with B-cell acute lymphoblastic leukemia. These lymphoblasts exhibited increased ADA activity and diminished activities of both PNP and 5'N' as compared to normal lymphocytes as well as non-T, non-B leukemia cells. This enzymatic pattern is identical to that which has been described in T-cell leukemic lymphoblasts and differs from that which has been observed in the malignant cells of undifferentiated B-cell lymphomas. These data suggest that there is biochemical heterogeneity within the spectrum of B-cell malignancies. Furthermore, inhibitors of ADA may be of use in those B-cell lymphoid neoplasms that exhibit increased ADA activity.     

Prediction of the growth response of short prepubertal children treated with growth hormone

The aim of this study was to identify predictors of the growth response to growth hormone (GH) during the first 2 years of GH treatment, using auxological data and the maximum GH response (GH_max) to provocation tests. The patients were 169 prepubertal short children (27F, 142M), with Gmax values ranging from 0 to 65 mU/1. Their mean age (± SD)was8.3 ± 2.4 years (range 3-13 years), mean height SDS –3.0 ± 0.7 (range –1.5 to –6.0SDS) and mean pretreatment height velocity was normal (± 0.0 SDS) (range -1.6 to + 0.9 SDS). The increase in height SDS during the first 2 years of GH treatment (0.1 U/kg/day) varied from 0.10 to 3.75 SDS, with younger children having a better growth response. Individual growth responses correlated (p < 0.001) with GH_max (r =–0.37), age (r= -0.35), 1-year pretreatment delta SDS (r = -0.25), mid-parental height SDS (r = 0.34), height SDS at start of treatment (r =–0.22) and difference between height SDS of an individual child at the onset of GH treatment and mid-parental height expressed in SDS (diff SDS) (r = –0.43). In a multiple stepwise linear regression model, diff SDS and log GH_max were found to be the strongest predictors of the magnitude of the growth response. In the short children in this study who exhibited a broad range of GH_max values, 33% of the growth response during the first 2 years of treatment could be predicted.     

脐血干细胞移植治疗脑卒中的研究现状

学术背景：目前传统的方法无法从根本上改善脑卒中后所造成的神经功能缺损，欲达到理想的恢复还赖于脑功能的重建。近年研究发现，脐血干细胞在特定诱导条件下可分化为神经细胞，修复受损的神经。 目的：总结脐血干细胞移植治疗脑卒中的研究进展。检索策略：由第一作者应用计算机检索PubMed数据库与万方数据库1995／2007年期间相关文献，检索词为“cord blood stem cells，Stroke，脐血干细胞，脑卒中”，并手工查阅相关书籍。对资料进行初审，选择脐血干细胞研究及采用脐血干细胞移植治疗脑卒中的研究，排除综述及重复文献。共检索到50篇相关文献。 文献评价：选择其中的31篇，文献的来源主要是脐血干细胞研究及采用脐血干细胞移植治疗脑卒中的动物及基础实验研究。 资料综合：脐血干细胞具有自我更新、增殖和多向分化潜能，在合适诱导下可分化为神经细胞。研究表明，脐血干细胞在体外诱导及体内移植能生成神经样细胞，能表达神经元表达神经元特异性标志物nestin、NF-M、NeuN、MAP2等。脐血干细胞治疗脑卒中在动物及实验研究基础上已取得了较大成就，但仍存在许多问题，细胞体外培养中分化增值的调控机制不十分清楚，临床研究报道甚少，诱导生成的神经细胞存活的时间,能否跟正常神经细胞一样发挥功能等，待进一步探讨。 结论：用来源丰富、免疫排斥概率小的脐血干细胞治疗多发的脑卒中，具有明显的优越性，为脑血管疾病患者神经功能的恢复带来新的希望。     

组织工程技术仿生构建颅颌骨组织的研究

目的:探索构建组织工程化仿生骨种植体的方法流程,并制备成骨细胞-可吸收载体种植体样品,同时尝试建立组织工程化非承载骨种植体的评价方法。方法:实验于2001-05/2005-12分别在天津市口腔医院组织工程实验室和天津大学材料学院高分子材料研究所完成。①通过相分离技术制备壳聚糖/明胶三维网络多孔支架,在支架材料表面原位沉积纳米级的羟基磷灰石晶体,构筑纳米羟基磷灰石/壳聚糖/明胶仿生骨组织工程支架材料,并进行表征和性能检测。②用酶消化法和条件培养法分离、诱导培养中国小型猪成骨细胞作为组织工程种子细胞。③用静态复合共培养法体外构建2种骨组织工程种植体样品:成骨细胞-纳米羟基磷灰石/壳聚糖/明胶仿生骨种植体,成骨细胞-纳米羟基磷灰石/胶原种植体。④采用扫描电镜、透射电镜、FDA荧光、LDH、MTT等定期观测仿生骨样品中细胞形态、细胞增殖速率、碱性磷酸酶活性、矿化结节形成等指标,以比较样品的细胞增殖活性和成骨活性。结果:①成功构筑了具有良好的生物相容性和力学相容性的纳米羟基磷灰石/壳聚糖/明胶,这种材料具有适于细胞黏附与生长的(90±1)%的孔隙率,孔径为100￣300μm的微孔结构,且原位沉积的纳米羟基磷灰石晶体的粒径为50nm左右,接近与天然骨的组成。②自中国小型猪腿骨成功分离培养了成骨细胞,并在诱导培养条件下,表现出很强的增殖活力和成骨活性,适合作为实验用骨组织工程的种子细胞。③成功构建了两种成骨细胞-可吸收载体种植体样品:经检验仿生构建的小型猪成骨细胞-纳米羟基磷灰石/壳聚糖/明胶种植体具有细胞亲和性和体外成骨活性。结论:①在体外成功仿生构建了结构与活性接近天然骨的骨组织工程种植体--纳米羟基磷灰石/壳聚糖/明胶种植体。②初步建立了仿生组织工程化非承载骨种植体的评价方法,为其进一步用于体内修复颅颌骨组织损伤的深化研究提供了实验数据和科学依据。     

应用表皮干细胞构建组织工程皮肤及移植实验

目的:探讨应用人表皮干细胞和猪脱细胞真皮构建组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的可行性。方法:实验于2004-06/2005-12在南昌大学医学院烧伤研究所完成。①取环状切除后幼儿包皮(家属知情同意)用中性蛋白酶与胰蛋白酶混合消化液消化,收集细胞,接种在已包被Ⅳ型胶原的培养皿中,快速黏附,保留快速黏附细胞继续培养,培养体系为低钙高糖DMEM培养基,待融和状态时,再次消化,离心收集细胞,再次经过Ⅳ型胶原快速黏附,保留黏附细胞,培养20d左右,用作构建表皮干细胞并进行细胞鉴定。②将第2代细胞接种于铺好Ⅳ型胶原的猪无细胞真皮上,每3天换液。10d后将其转移至不锈钢网架上,行气液界面培养5d左右,构建复合皮。③取SD大鼠20只,随机分2组。于动物背部尾侧正中作2.5cm×2.5cm的全层皮肤至肌筋膜的切除。实验组10只创面覆盖表皮干细胞构建的复合皮移植物,对照组10只覆盖无细胞真皮移植物。④移植后7,10,14,21和35d,两组动物均活检取材,进行创面大体观察、组织学观察及免疫组织化学、免疫荧光鉴定等。结果:①表皮干细胞的分离、扩增及鉴定:在扩增的细胞拟接种于无细胞真皮前,进行角蛋白19免疫组织化学鉴定、以流式细胞术进行α6、CD71鉴定。经胶原Ⅳ黏附的细胞培养后形成较大集落,拟接种的种子细胞中α6briCD71dim细胞占总细胞的(39±7)%;鼠抗人角蛋白19阳性细胞率为(53±6)%。②组织工程皮肤的建立结果:表皮干细胞种植于无细胞真皮上1d后,细胞便贴壁并开始生长增殖,8d左右透过间隙见无细胞真皮上表皮干细胞渐增殖融合成片;2周时无细胞真皮表面可见菲薄皮片状生长的细胞膜片物。复合皮组织学检查可见无细胞真皮表面覆盖多层融合的表皮层细胞,无细胞真皮内细胞成分去除完全。③创面愈合情况:术后2周,实验组移植物成活,创面上已上皮化,移植物柔软,而对照组无细胞真皮表面未上皮化,较干燥,色暗、触之较硬,两组创面均未见明显收缩。4周,实验组创面愈合,未见明显排斥反应。对照组无细胞真皮干燥脱落而创面暴露,创面收缩明显,创面边缘因自体表皮细胞爬行而缩小创面。④组织学检查及免疫组织化学染色结果:实验组2周时创面已全部上皮化,但细胞分层少;3,4周表皮层分化良好,多层结构,真皮纤维内见成纤维细胞长入,见少许炎症细胞,大鼠自体正常皮肤见毛囊及毛发结构。对照组2周创面尚未上皮化,无细胞真皮干燥变性,3,4周后创面仍未愈合,可见大量炎症细胞。实验组愈合创面抗人人类白细胞抗原-Ⅰ型抗原直接免疫荧光染色呈阳性,证明新生表皮由移植的人表皮细胞形成。而对照组阴性。实验组愈合创面广谱角蛋白免疫组织化学染色见整个表皮层细胞胞浆染呈棕黄,为阳性反应。结论:利用体外纯化扩增的表皮干细胞及制备的猪脱细胞真皮可体外联合构建具有复层结构的组织工程皮肤,该组织工程皮肤可用于修复动物全层皮肤缺损。     

当归补血汤对血细胞及相关免疫因子的作用

目的:当归补血汤对正常及免疫功能低下机体的免疫功能具有增强作用。文章就近年来当归补血汤免疫药理方面的研究作一综述。资料来源:应用计算机检索中国期刊全文数据库1979-01/2007-03期间的相关文章,检索词为“当归,黄芪”,并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与当归补血汤免疫药理研究相关。排除标准:重复研究。资料提炼:共收集到78篇相关文献,30篇文献符合纳入标准,排除的48篇文献为内容陈旧或重复。资料综合:当归补血汤是补益气血经典方剂,该方由黄芪和当归以5:1比例组成,重用黄芪大补脾肺之气,以滋生血之源,主治劳倦内伤,气弱血虚之证。该方在免疫药理作用方面,国内学者对正常及免疫功能低下机体进行了较多实验研究。既有体内实验,又有进一步的离体观察;既有对免疫器官形态的观察,又有对不同免疫细胞数量和功能的测定,并对其作用分子机制进行探讨。研究结果表明当归补血汤可以增强机体红细胞的免疫黏附及清除免疫复合物的能力,增强吞噬细胞的吞噬功能,增强NK细胞的杀伤功能,不同程度的促进T、B淋巴细胞的增殖和相应的免疫功能。当归补血汤还具有促进造血和血管生成作用。上述作用的发生机制可能与其调节基因活性和活性分子作用相关。结论:当归补血汤组方简单,配伍配比精当,能够增强正常及免疫功能低下机体的免疫功能,临床应用广泛。但药理研究大多集中在动物整体、器官、细胞等,分子水平研究还有欠缺。     

银杏内酯和神经生长因子影响原代人胚肝细胞的增殖及分泌

目的:如何培养足够的肝细胞以及应用一些物质、因子从而使其增加分裂、减少凋亡?观察银杏内酯和神经生长因子对体外原代培养的人胚肝细胞增殖、凋亡及相关分泌功能的影响具有临床实用性意义。方法:实验于2005-07/2006-10在南通大学神经生物学研究所完成。①细胞来源:孕14～16周流产胎儿,由南通市妇幼保健院妇产科提供,产妇及其家属均知情同意,实验经医学伦理委员会批准。银杏内酯由中国药科大学提供,神经生长因子为Roche公司产品。②实验方法:用非灌流法从人胚肝中分离肝细胞,以DMEM作为培养基,接种于4块24孔培养板中,每两块培养板各接种36孔,12孔/组,细胞3×105/孔。银杏内酯组各孔加入含37.5g/L银杏内酯和体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养液2mL,神经生长因子组各孔加入含100mg/L神经生长因子和体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养液2mL,空白对照组各孔加入仅含体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养液2mL。③实验评估:人胚肝细胞原代培养至9d,倒置显微镜下计数每视野的肝细胞数,同时行MTT试验,并用流式细胞仪检测肝细胞凋亡情况。分别于培养3,6,9d时收集肝细胞培养液进行白蛋白含量检测。结果:①原代肝细胞生长情况及肝细胞计数:接种12h后各组肝细胞均已贴壁,3d后可见由3～5个细胞组成的细胞集落,至9d时银杏内酯组和神经生长因子组肝细胞已基本铺满孔底,且呈立体生长倾向,空白对照组肝细胞较少,胞间有空隙存在。至培养9d,银杏内酯组、神经生长因子组、空白对照组每视野内肝细胞计数差异有显著性意义(F=12.97,P=0.00)。②MTT试验结果:原代肝细胞培养至9d时,银杏内酯组、神经生长因子组、空白对照组吸光度值差异有显著性意义(F=71.90,P=0.00)。③肝细胞培养液白蛋白含量:培养3d时各组细胞培养液的白蛋白含量方差分析无明显差异(F=0.23,P=0.79)。培养6,9d同一时间点组间比较差异有显著性意义(F=11.69,P=0.00;F=9.35,P=0.00)。④细胞凋亡情况:银杏内酯组、神经生长因子组、空白对照组凋亡肝细胞百分率分别为11.53%,9.29%,15.27%。结论:银杏内酯和神经生长因子对原代人胚肝细胞的增殖和分泌白蛋白功能均具有促进作用,并抑制细胞凋亡。     

Antibodies to oxidized lipoproteins and their relationship to myocardial infarction

The inflammatory process and autoimmunity in the form of antibodies to oxidized LDL are important factors in the formation of the atherosclerotic plaque. We examined the time relationship of oxidized lipoprotein antibodies to the acute oxidative stress of myocardial infarction (MI). We also examined the relationship of C-reactive protein, an index of inflammation, and therefore of free radical production, to oxidized low-density lipoprotein (LDL) antibodies. We examined five groups of patients in a cross-sectional study: group 1, within 48 h of MI; group 2, two days to 1 week; group 3, 1-4 weeks; group 4, 1-3 months; and group 5, 3-6 months post MI. Nine patients with high antibody levels were re-examined 12 months after their first assessment. Malondialdehyde (MDA)-LDL and MDA-HDL antibodies were determined by an ELISA method. The highest MDA-LDL antibodies were found within 48 h of MI, but there was no significant difference in MDA- HDL antibodies between the groups. When 9/10 patients with LDL antibodies greater than the mean of 2.7 were re-examined 1 year later, there was a significant decrease in the mean antibody levels (5.2 +/- 1.7 vs. 3.2 +/- 0.6, p < 0.02). There was no correlation between antibodies to MDA-LDL and antibodies to MDA-HDL. There was a positive correlation between serum HDL cholesterol and antibodies to MDA-LDL (r = 0.4, p < 0.02) and a positive correlation between serum triglycerides and MDA-HDL antibodies (r = 0.39, p < 0.02). Acute MI appears to be associated with significantly higher C-reactive protein and antibodies to MDA-LDL, suggesting a possible acceleration of the atherosclerotic process immediately prior to MI.