用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA

目的:建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法:用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果:定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log(X)+25.99和Y=-3.409log(X)+24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论:用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。     

兔眼滤过术中应用抗瘢痕药物后的眼压变化

目的:在兔眼滤过术中应用两种抗瘢痕药物后观察其眼压变化,探讨提高青光眼手术成功率的抗瘢痕药物种类及用药方式。方法:将激素及丝裂霉素分别应用于兔眼滤过术中,测定术前、术后3d、7d和1个月眼压并进行分析。结果:①术前各组间眼压元显著差异;②术后 3 d和 7 d,甲强龙各浓度组眼压与术前相比有显著性差异(P<0.01),而组间两两比较差异不显著(P>0.05);③术后1个月实2、3、4组和对2组眼压均较术前明显下降,差异有显著性(P<0.01),各组间差异不显著(P>0.05);④术后1个月实1组和对1组眼压恢复至术前水平,差异不显著(P>0.05),其两组间差异不显著(P>0.05)。结论:眼压变化的结果表明甲强龙不仅具有早期抑制肉芽组织的作用,而且在一定浓度下对肉芽组织的成熟也有抑制作用,提示甲强龙术中湿片贴敷是一种安全、有效的抗瘢痕方法。     

主动脉手术围术期脑损伤监测指标的变化及其临床意义

目的监测主动脉手术围术期脑损伤指标的变化分析，探讨其在主动脉外科中应用的临床意义。方法30例主动脉手术病例，男23例，女7例，平均年龄43.7岁，深低温停循环下行主动脉弓部替换术22例，全胸降主动脉或胸腹主动脉替换术8例。术后出现暂时性神经系统功能紊乱（transient neurological dysfunction，TND）者8例（并发症组）；余22例无脑部并发症（非并发症组）。均于术前及术后72h内监测颅内压（intracranial pressure，ICP）并检测脑脊液（cerebral spinal fluid，CSF）乳酸及S100β的含量。结果两组ICP分别于术后24 h及12 h达峰值，并发症组于术后24～72 h显著高于非并发症组（P〈0.05）；两组CSF乳酸峰值分别出现于术后12 h及6 h，并发症组于术后12～72 h显著高于非并发症组（P〈0.05）；两组CSF中S100β均于术后12 h达到峰值，且组间72 h内各值均有显著差别（P〈0.05）。结论主动脉手术围术期ICP、CSF乳酸及S100β的异常升高与术后脑部并发症的发生有显著相关性，都是围术期敏感而可靠的脑损伤监测指标，具有较高的临床应用价值。     

持续闭式引流治疗下肢长骨骨折术后感染

感染是下肢长骨骨折钢板内固定术后常见并发症。由于内固定钢板螺钉的存在,常使感染迁延不愈,影响骨愈合。我科自1998年6月-2005年6月,采用加压接骨钢板内固定治疗下肢长骨骨折683例,其中34例术后发生感染,采用病灶清除,闭式滴注引流术,配合中药内服,感染得到控制,骨折愈合,取得满意的效果。1临床资料本组34例,男28例,女6例;年龄22~61岁,平均36岁。伤因:车祸伤16例,砸压伤7例,跌伤11例。开放性骨折23例,闭合性骨折11例;单纯股骨干骨折9例,股骨干合并同侧胫腓骨骨折2例,股骨干合并对侧胫腓骨骨折1例,单纯胫骨骨折5例,胫腓骨双骨折17例。病史2…     

转录因子E2F-4的表达与乳腺癌分级、分期及预后的关系

目的:探讨乳腺癌中转录因子E2F-4的表达与临床分期、病理组织学分级及其预后等参数的关系.方法:采用免疫组化学的方法检测乳腺癌组织中E2F-4的表达,半定量分析E2F-4的表达与肿瘤分期、分级、术后生存时间等临床病理学参数的关系:以正常乳腺组织作为对照.结果:正常乳腺小叶及导管上皮细胞之E2F-4表达呈阴性;65例乳腺癌中33例(50.8%)呈E2F-4高表达;E2F-4高表达与乳腺癌的病理学分级、类型、临床分期以及术后生存时间有关(P<0.05).结论:E2F-4作为肿瘤的相关基因,参与了乳腺癌的发生、发展.E2F-4的高表达可能是评判乳腺癌恶性程度、转移、复发及预后的较好指标.     

空心钉经皮微创内固定技术治疗骨盆环损伤的疗效评价

目的：评价经皮微创空心钉固定骨盆环损伤的安全性及可靠性。方法：对48例不稳定骨盆环损伤患者，分别行闭合复位、经皮微创空心钉内固定术。按Tile分型：B1型4例，B2．1型8例，B2．2型10例，B3型4例，C1型11例，C2型7例，C3型4例。39例前后环损伤均固定，4例仅固定前环损伤，5例仅固定后环损伤。以术前骨盆的三位x线片（前后位、入口位及出口位）及CT片判断骨盆的稳定性及移位情况，术后以x线片及CT片评估复位情况及螺钉位置准确性。结果：手术时间15～95min，平均55min。术中出血量15～150ml，平均60ml，术中及术后无输血。48例患者共植入空心钉157枚，每人2～8枚，平均3．3枚。术后行骨盆CT检查42例（共植入135枚空心钉），发现123枚空心钉位置准确，占91．11％；7枚空心钉因偏向或超长而侵入盆腔或髋臼（但均〈0．5em）；5枚位置偏差干扰骶管或骶孔，但均未引起任何症状。随访8～49个月，平均13个月，45例患者骨盆环移位复位满意，所有骨折均Ⅰ期愈合。40例恢复原工作，4例末次随访时尚处康复期，其余4例因坐骨神经损伤或下肢截肢而不再工作。参照Lindahl改良的骨盆损伤后功能评定标准，优35例，良10例，可3例，平均得分78.7分。结论：在对骨盆环及其毗邻血管神经的解剖结构熟练掌握的基础上，结合良好的透视引导，闭合复位经皮微创空心钉内固定治疗不稳定骨盆环损伤安全可行，疗效满意。     

磁共振扩散加权成像对超急性期、急性期脑缺血的应用价值

磁共振扩散加权成像(DWI)可以快速、无创地反映脑缺血区分子水平发生的微观变化,为临床提供信息,本文对其在超急性期、急性期脑缺血的应用价值和限度进行综述。     

AmpC β-内酰胺酶及其分子生物学检测

近年来,随着头孢菌素类抗生素的广泛应用,产AmpC β-内酰胺酶（简称AmpC酶）的革兰阴性（G^-）杆菌越来越多见,尤其是出现了质粒介导的AmpC酶,导致耐药菌株广泛传播和对该类细菌感染的治疗困难,已引起临床的高度重视.     

鼻咽癌组织中EBER-1表达及其临床病理学意义

目的：探讨爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)与鼻咽癌发生、发展的关系及其临床病理学意义。方法：应用免疫组化技术检测46例鼻咽癌、28例鼻咽癌癌旁组织、36例慢性鼻咽炎石蜡切片组织中爱泼斯坦-巴尔病毒受体(EBER-1)的表达。结果：鼻咽癌组织中EBER-1表达率为74．O％，且在转移灶中不丢失，癌旁组织、慢性鼻咽炎组织中EBER-1表达率分别为32．1％、16．7％。结论：检测EBER-1的表达对鼻咽癌诊断与鉴别诊断具有重要价值。慢性鼻咽炎组织、癌旁组织中：EBER-1阳性者提示为高危癌前病变，应密切随访监测，可能有利于早期发现鼻咽癌。     

大鼠高胆红素血症与海马神经细胞凋亡关系的实验研究

目的探讨高胆红素血症新生大鼠海马区Fas蛋白、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的表达、神经细胞凋亡率及其相关性，以进一步阐明胆红素的神经毒性机制。方法通过制作高胆红素血症动物模型，采用免疫组化法、TUNEL法及流式细胞术检测大鼠海马区Fas蛋白、NMDA受体的表达率及神经细胞的凋亡率，并探讨其问相关性。结果高胆红素血症时，海马区神经组织，Fas蛋白、NMDA受体表达率及神经细胞凋亡率明显增高，且与脑组织胆红素浓度呈正相关。结论高胆红素血症时，胆红索可通过NMDA受体过度活化和Fas系统的参与，传递凋亡信号，介导胆红素神经毒性的发生，导致神经细胞凋亡。