甲状腺癌中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体的表达

目的　研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAILR)在甲状腺癌中的表达及意义。　方法　采用免疫组织化学方法 ,检测 5例正常甲状腺、13例乳头状甲状腺癌、3例滤泡状甲状腺癌和 12例甲状腺癌旁组织中TRAIL和TRAILR的表达和分布。　结果　乳头状、滤泡状甲状腺癌组织和正常甲状腺组织中的甲状腺滤泡细胞均表达TRAIL和全部的TRAILR ,其中诱捕受体TRAILR4在正常甲状腺组织和甲状腺癌旁组织表达较弱。　结论　甲状腺癌组织中的甲状腺滤泡细胞表达TRAIL和全部的TRAILR ,提示癌变的甲状腺滤泡细胞通过自身表达TRAIL ,以自分泌或旁分泌的形式和其死亡受体TRAILR1、TRAILR2结合 ,诱导癌变的甲状腺滤泡细胞发生凋亡 ,诱捕受体TRAILR3、TRAILR4的存在也不能影响其对TRAIL诱导的细胞凋亡的敏感性     

谷胱甘肽转硫酶-血小板因子4融合蛋白表达载体的构建、鉴定与表达

目的 构建谷胱甘肽转硫酶－血小板因子4（GST－PF4）融合蛋白表达载体，并研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达。方法 通过RT－PCR方法，从HL－60细胞中克隆PF4cDNA，然后克隆至载体pUC19中，序列测定后把PF4基因重组入谷胱甘肽转硫酶融合基因表达载体pGEC-4T-3中，并用IPTG诱导其在大肠杆菌中表达。结果 获得了PF4 cDNA。序列分析表明，该序列与GenBank数据库中的序列一致。重组质粒酶切鉴定表明，PF4基因已正确插入到pGEX-4T-3中。重组融合蛋白表达载体GST－PF4经IPTG诱导表达，在SDS－PAGE后得到1条蛋白表达带，相对分子质量（Mr)约为36000。结论 成功地构融合蛋白表达载体GST－PF4，并大肠杆菌中获得有效表达，为进一步研究打下良好的基础。     

三根三棱针内固定治疗儿童股骨干骨折的生物力学实验研究

目的通过对儿童股骨干骨折的三种内固定治疗方法的生物力学研究,借以获得最佳的治疗方法。方法选取10根儿童尸体股骨标本,分别用三根三棱针、梅花针、接骨板内固定,然后进行生物力学检测。结果(一)三点弯曲检测①前侧加力,三棱针刚度居中,残余变形最小。②外侧加力,三棱针刚度最小,残余变形居中。③外侧下压(40mm),三棱针残余变形最小。(二)扭转检测①三棱针外旋、内旋刚度及残余角居中。②外旋15度,三棱针残余角最小。结论通过三点弯曲和扭转生物力学实验证明,三棱针弹性好,可复性能最佳,抗扭转作用力最强。三根三棱针内固定治疗儿童股骨干骨折明显优于梅花针和接骨板。     

猪胸主动脉的零应力状态研究及其临床意义

目的　探讨猪胸主动脉的生物力学特性变化。方法　取 1～ 9月龄猪的胸主动脉各 6例 ,从每例标本的中段处将血管切为短圆环 ;将 7月龄猪胸主动脉分为上、中、下段 ,每段再分为 5个短圆环。将各血管沿其径向剪开 ,测量张开角的大小、壁厚和周长 ,并依周长计算出等效内径。结果　猪胸主动脉张开角由 1月的 (42 .1 7± 4 .0 6)°上升到 7月的 (76.2 2± 4 .4 0 )°,在 7月龄后达到稳定。对 7月龄猪胸主动脉自上而下分析则发现张开角由 (99.73± 6.79)°降至 (42 .0 9± 7.4 0 )°。壁厚 等效内径值随月龄增加而减小 ,于 7月龄后保持于 0 .1 8左右。结论　猪胸主动脉张开角、等效内径和壁厚随月龄的增加而增大 ;随着X L的增加各项指标均逐渐减小 ,血管的内外径在 7月龄后成比例生长。为猪→人异种血管移植和血管的病理改变后修复与功能重建提供依据     

人破骨细胞生成抑制因子在真核细胞中的表达

目的 克隆人破骨细胞生成抑制因子（OPG／PCIF）编码区基因并在真核细胞中表达，为进一步研究OPG／OCIF的生理功能及探讨骨质疏松症等疾病的治疗奠定基础。方法 以人骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板，采用RT－PCR法得到人OPG／OCIF的编码区cDNA，构建真核表达载体并转染成肌细胞，应用核酸杂交及western blot法证实OPG／OCIF在真核细胞中表达。结果 获得人破骨细胞生成抑制因子（OPG／OCIF）编码区全长cDNA，经序列测定证实与文献报道的OPG／OCIF编码区基因的核苷酸序列完全一致。成功构建OPG／OCIF真核表达载体pcDNA3-OPG。重组质粒转染小鼠成肌细胞C2C12，建立稳定转染OPG／OCIF编码区cDNA的细胞系，经核酸杂交及western blot法证实OPG／OCIF在真核细胞中表达。结论 获得人破骨细胞生成抑制因子（OPG／OCIF）编码区全长cDNA并证实在真垓细胞中表达，为OPG／OCIF进一步的功能研究奠定了基础。     

人era的结构特点分析及其定点突变体的构建

目的：构建最近克隆的人era基因的定点突变体。方法：利用数据库对era的结构特点进行分析，在此基础上用改良的重叠延伸法分别构建人EraN端和C端的定点突变体。结果：获得了分别针对人EraN端TGP结合结构域（位于29－36氨基酸残基）和C端具有RNA结合活性的 KH结构域（位于297－340氨基酸残基）的定点突变体。结论:人era定点突变体的构建为进一步的功能研究奠定了基础。     

miR-193b在宫颈癌中的表达与功能及其对化疗敏感性的影响

目的:探讨微小RNA-193b(miR-193b)在不同宫颈组织中的表达以及其对顺铂作用于宫颈癌细胞敏感性的影响,并初步探讨其作用机制。方法:实时荧光定量PCR(qPCR)检测不同宫颈组织中miR-193b的表达水平。采用脂质体将miR-193b-inhibitor转染至HeLa细胞,Transwell法、CCK-8法和免疫蛋白印迹法分别检测细胞迁移数、细胞对顺铂的敏感性以及细胞中PTEN、Akt、p-Akt和P-糖蛋白(P-gp)的蛋白水平。结果:qPCR结果显示miR-193b在正常宫颈组织及宫颈糜烂组织中呈低表达,在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中的表达明显上升;转染miR-193b-inhibitor后,HeLa细胞迁移数明显减少(P0.05),顺铂对HeLa细胞活力的抑制作用进一步增强(P0.05),细胞中PTEN的蛋白表达明显上调(P0.05),Akt的蛋白表达无明显变化,p-Akt和P-gp的蛋白水平明显下调(P0.05)。结论:miR-193b在宫颈癌组织中呈高表达,沉默miR-193b可增加HeLa细胞对顺铂的敏感性,作用机制可能与PTEN-PI3K/Akt通路有关。     

高原红细胞增多症模型大鼠骨髓CD71~+细胞GATA-1和GATA-2表达的相关性

目的:探讨高原红细胞增多症(HAPC)模型大鼠骨髓CD71+细胞转录因子GATA-1和GATA-2表达的相关性。方法:雄性SD大鼠48只,随机分为对照组和HAPC模型组。在海拔4 300 m自然环境下复制HAPC模型并采用骨髓涂片、骨髓细胞分类计数和血液学参数检测进行验证。流式细胞术检测骨髓CD71~+细胞数量相对变化趋势;RT-q PCR和Western blot法检测GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达变化,低氧培养CD71~+细胞,筛选最佳干扰序列GATA-1 shRNA1后,转染96 h,RT-q PCR和Western blot法检测GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达水平。结果:骨髓细胞分类计数、涂片及血液学参数检测结果显示,HAPC大鼠模型复制成功。与对照组比较,HAPC模型组骨髓CD71~+细胞明显增多,骨髓CD71~+细胞GATA-1的mRNA和蛋白表达增高,GATA-2的mRNA和蛋白表达差异无统计学显著性。对照组GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达呈负相关,HAPC模型组GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达无显著相关性。GATA-1 shRNA1干扰96 h后,GATA-1的mRNA和蛋白表达低于对照组,但是GATA-2的mRNA和蛋白表达变化差异无统计学显著性。结论:HAPC大鼠骨髓CD71+细胞GATA-1和GATA-2表达异常,两者的负相关关系改变可能是导致HAPC发生的机制之一。     

静电纺丝聚己内酯纳米纤维支架支持小鼠诱导多能干细胞表达心肌细胞标志物

目的利用多能干细胞与仿生材料支架构建人工心肌,探讨仿生材料支架本身对多能干细胞心肌特异性分化的直接作用,为构建组织工程心肌提供理论支持。方法采用静电纺丝聚己内酯纳米纤维仿生支架,接种小鼠i PSCs(mi PSCs)细胞培养分化15 d,免疫荧光染色与Western blot法检测多能干细胞与心肌细胞特异性标志物。结果mi PSCs特异性表达多能干性标志物Oct4和Nanog,而且能够在聚己内酯纳米纤维支架上集落样增殖、分化;培养15 d后,mi PSCs在支架上分化出心肌特异性标志物c Tn T和MLC2a双重免疫荧光染色阳性的细胞;心肌细胞特异性结构蛋白c Tn T、α-MHC和MLC2的表达水平,支架组全面高于对照组。结论聚己内酯纳米纤维仿生支架支持mi PSCs生长与心肌细胞特异性分化。     

人巨细胞病毒UL143基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的 探讨人巨细胞病毒(human eytomegalovirus,HCMV)UL143序列在临床患儿低传代分离株中的多态性及其与临床疾病的关系.方法 对19株HCMV临床低传代分离株进行HCMV-UL143 PCR扩增分析及伞序列测定分析.结果 19株HCMV感染患儿临床分离株均因碱基插入造成移码突变,开放阅读框架(ORF)比Toledo株短.根据序列变异情况可将19个序列分为2组,第1组16个序列新增一个MYRISTYL位点;缺失2个PKC磷酸化位点.未发现黄疸、小头畸形、先天性巨结肠等不同疾病类型的序列之间的差异.结论 HCMV-UL143较多存在于临床低传代分离株中,序列呈现一定多态性.