RFDD-PCR技术用于构建证的相关基因表达谱初探

目的　运用限制性酶切片段差异显示 (RFDD -PCR)技术初步筛选支气管哮喘肾虚证的相关基因 ,以冀探讨构建中医证的相关基因表达谱的一种研究方法。方法　应用RFDD -PCR技术 ,收集支气管哮喘肾虚证患者治疗前后外周血 ,分离其总RNA ,进行DNaseI处理、合成双链cDNA、TaqI限切酶酶切、在其两端连上接头、特异配对于接头的引物来降落PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、AgNO3 染色、回收差异条带并重新PCR扩增、反向斑点杂交、测序、生物信息学分析。结果　共找到 36条差异条带 ,其中 2 5条能用斑点杂交验证 ,选取 3条测序 ,结果与基因库比较未发现同源序列。结论　 3条基因片段可能是与支气管哮喘肾虚证相关的新基因 ;RFDD -PCR技术不失为构建中医证的相关基因表达谱的一种好方法。     

高效液相-荧光检测法测定兔血浆羟基喜树碱方法的研究

目的 :为了测定羟基喜树碱在人体内的血药浓度 ,建立高效液相 -荧光检测法以测定兔血浆中羟基喜树碱的含量。方法 :色谱柱为DiscoveryC18(15cm× 4 6cm ,5 μm) ,流动相为柠檬酸缓冲液 -乙腈 - 75nmol·L-1磷酸二氢钾 (70∶2 3∶7) ,75nmol·L-1磷酸二氢钾中含 1%三乙胺。流速为 1 0mL·min-1,柱温为 4 0℃ ,荧光检测波长为λex36 3nm和λem5 30nm。结果 :该方法的线性范围为 13 76 5 6～ 195 7 4 4 6 8ng·mL-1(r =0 9993) ;提取回收率和方法回收率分别为 80 90 %～ 10 3 5 9% ,10 2 72 %～ 10 8 16 % ;日内RSD≤ 7 4 9% ,日间RSD≤ 9 4 0 %。最低检测限为 5 2ng·mL-1。结论 :主效渡相—荧光法专属性强 ,重现性好 ,操作简便 ,可用于羟基喜树碱的药代动力学研究和血药浓度监测。     

放射治疗中的摆位误差

随着放射治疗向高精度方向发展 ,研究放射治疗中的摆位误差具有重要意义。就摆位误差的定义、来源、表示方法、测量予以综述 ,并总结了以往的研究数据 ,提出临床工作中需注意的问题。     

MVP方案加或不加光量子血液疗法治疗晚期非小细胞肺癌

目的 :观察MVP方案加光量子血液疗法治疗晚期非小细胞肺癌 (NSCLC)的近期疗效和毒副作用。方法 :将 4 8例晚期NSCLC患者随机分为治疗组和对照组 ,分别接受MVP方案 (丝裂霉素、西艾克、顺铂 )及化疗当日开始光量子血液治疗法或单纯MVP方案化疗。结果 :治疗组部分缓解率 5 4 2 % ,对照组 2 5 0 % (P <0 0 5 ) ,中位缓解期分别为 5 1个月及 4 2个月。治疗组毒性明显小于对照组。结论 :MVP方案化疗同时应用光量子血液疗法治疗晚期NSCLC ,疗效有所提高 ,毒性有所减少。     

HPLC法测定复方阿替洛尔片中阿替洛尔与硝苯地平的含量

目的:采用高效液相色谱法考察并建立测定复方阿替洛尔片中阿替洛尔与硝苯地平含量的方法。方法:色谱柱为Phe-nomenex—ODS 3柱(250 mm×4.60 mm,5 μm),甲醇-水-磷酸盐缓冲溶液(取磷酸二氢钾6.8 g,加水1000 mL溶解后,用磷酸调pH至3.0)-庚烷磺酸钠适量摇匀(65:35:3:0.13 g=V:V:V:W)为流动相,流速为1.0 mL·min～1,检测波长为240 nm,进样量为10μL。结果:阿替洛尔的线性范围为10-250μg·mL-1(r=0.9999),硝苯地平的线性范围为4—100 μg·mL-1(r=1.0000),平均回收率分别为99.45％和99.51％。结论:本法精密度好,结果准确可靠,适用于该复方制剂的质量检验分析。     

IMAF方案治疗复杂转移性乳腺癌疗效观察

为了评价异环磷酰胺，美斯纳，阿霉素和５－氟脲嘧啶联治疗复发转移性乳癌的疗效。对乳腺癌根治术后接受常规ＣＭＦ辅助化疗和放疗后，在２ａ内出现复发转移的２６例患者应用ＩＭＡＦ方案化疗。结果完全缓解４例，部分缓解１２例，总有效率为６１．５％。毒副反应主要为恶性心呕吐、骨髓抑制，脱发和镜下血尿。结果表明ＩＭＡＦ方案是治疗复发转移性乳腺癌疗效较好的方案。     

吉西他滨治疗高龄晚期非小细胞肺癌

目的:观察吉西他滨治疗高龄晚期非小细胞肺癌的疗效,并与同期单纯支持治疗的患者比较,以探讨高龄晚期非小细胞肺癌的治疗方案。方法:吉西他滨组21例,采用吉西他滨单药化疗,剂量为1250mg/m2,静脉滴注,第1、8天用药,每21天为1周期,共4周期。对照组23例不用任何化疗,单纯支持对症治疗。结果:吉西他滨组总有效率为28.6%,其中PR6例,SD12例,PD3例。对照组无CR和PR者。吉西他滨组中位缓解期6.3个月。吉西他滨组和对照组中位肿瘤进展时间分别为5.8和2.6个月,中位生存时间分别为12.8和4.6个月(P<0.01);1年生存率分别为46.6%和9.2%(P<0.01)。吉西他滨组KPS、体重增加和临床症状改善情况均显著高于对照组(P<0.01)。毒副反应方面吉西他滨组12例(57.1%)出现Ⅰ、Ⅱ级血小板减少,7例(33.3%)出现Ⅰ、Ⅱ级白细胞下降,未见Ⅲ、Ⅳ级毒性反应。少数患者血红蛋白下降Ⅰ度,恶心呕吐Ⅰ/Ⅱ度。结论:吉西他滨单药治疗高龄晚期非小细胞肺癌是安全有效的。     

细胞器相关凋亡途径研究进展

细胞凋亡是一个由基因调节的重要的主动过程.细胞内各组分在这一过程中相互协调,组成了精细的调控系统.细胞核和线粒体是近年发现与凋亡密切相关的细胞器.进一步的研究发现,在一定条件下,内质网、溶酶体,高尔基体和内涵体等也与凋亡活动有关.     

rhTRAIL对耐顺铂人肺腺癌细胞凋亡的影响

背景与目的TRAIL和TNF、Fas一样均属TNF蛋白超家族成员。研究表明,TNFα可用于克服某些肿瘤细胞的化疗耐药性,而一些化疗药物可上调死亡受体DR的表达,从而促进TRAIL诱导的细胞凋亡。本研究旨在探讨重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白rhTRAIL对耐顺铂人肺腺癌细胞凋亡的影响。方法常规体外培养耐顺铂人肺腺癌细胞株A549/DDP,应用MTT比色法、DPA法、流式细胞术和激酶法,检测rhTRAIL对耐顺铂人肺腺癌细胞株A549/DDP细胞增殖的抑制活性及其诱导细胞凋亡的效应。结果单用rhTRAIL时,低剂量rhTRAIL(6.25、12.5、25.0μg/L)对A549/DDP细胞的生长抑制率和各项凋亡指数(细胞凋亡率、DNA片段化比率和Caspase3活性)均无明显影响,P>0.05,但当rhTRAIL浓度在50μg/L时,细胞生长抑制率、细胞凋亡指数、DNA片段化比率和Caspase3活性均明显增高,各达68.6%、(27.13±0.66)%、(37.4±2.0)%和0.117±0.011(P<0.05)。当3mg/LDDP和rhTRAIL联用时,12.5μg/L的rhTRAIL即可使A549/DDP细胞生长抑制率、细胞凋亡指数、DNA片段化比率和Caspase3活性明显增高,各达30.4%、(19.39±0.54)%、(17.3±4.1)%和0.138±0.009(P<0.05)。结论单用较高剂量的rhTRAIL可以诱导耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP细胞凋亡。低剂量顺铂可以增强rhTRAIL诱导A549/DDP细胞凋亡的效应。rhTRAIL可望成为耐药性肺癌治疗的一种重要的生物制剂。     

人血管内皮细胞生长因子基因克隆、表达与纯化

目的研究人血管内皮细胞生长因子121(hVEGF121)基因在pET-24a(+)中的表达,获得高效表达、具有生物学活性的rhVEGF121。方法提取人原髓白血病细胞(HL60)总RNA,RT-PCR扩增hVEGF121基因,经DNA序列分析后,克隆于高效原核表达载体pET-24a(+),并转化到大肠杆菌B121(DE3)中,经IPTG诱导表达,超滤复性,DEAESephamseFastFlow阴离子交换和SephacryS-100分子筛色谱纯化后,以HUVEC测定其生物学活性。结果SDS-PAGE结果显示,目的蛋白质以包涵体形式存在,表达量达菌体总蛋白质的20%,纯化后rhVEGF121纯度达95%以上,生物学活性检测证实,具有刺激HUVEC增殖的功能。结论在原核系统中实现了hVEGF121的高效表达。