ABCE1基因沉默对人膀胱癌T24细胞增殖和迁移能力的影响

目的:本实验通过沉默ABCE1基因在人膀胱癌T24细胞中的表达,探讨ABCE1基因对细胞的生长、细胞周期及迁移等方面的作用。方法:设计及合成ABCE1的siRNA序列,LipofectamineTM2000转染T24细胞。采用RT-PCR和Western blot法检测基因沉默后ABCE1 mRNA和蛋白的表达情况,采用流式细胞术检测T24细胞周期。并通过CCK-8增殖实验、划痕愈合实验和细胞侵袭实验评价沉默ABCE1基因对T24细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响。结果:沉默ABCE1基因48 h后,T24细胞ABCE1 mRNA及蛋白表达明显降低,差异有统计学意义。T24的细胞周期被阻滞于G0/G1期,且S期的细胞数减少,差异有统计学意义。与对照组和空白组相比,CCK-8增殖实验显示,实验组T24细胞的增殖受到明显抑制。划痕愈合实验显示,实验组迁移能力显著下降,差异有统计学意义。Transwell小室法示,实验组T24细胞的侵袭能力显著下降,差异有统计学意义。结论:特异性干扰ABCE1基因表达可抑制人膀胱癌T24细胞的迁移能力,并抑制肿瘤细胞增殖,因此,ABCE1的siRNA序列可能成为治疗膀胱癌的有效靶点。     

香烟提取物通过减少HDAC2表达诱导小鼠C2C12成肌细胞衰老

目的:探讨香烟提取物(CSE)能否引起小鼠C2C12成肌细胞衰老,并研究成肌细胞衰老与组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的关系。方法:培养C2C12细胞株,分化为成熟成肌细胞,观察CSE干预对成肌细胞衰老和HDAC2表达的影响,采用real-time PCR和Western blot方法分别检测HDAC2 mRNA和蛋白的表达;β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞的百分率。结果:MTT法测定最佳CSE浓度与干预时间分别为60 m L/L和24 h。CSE干预后β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数增加,同时伴有HDAC2 mRNA和蛋白表达的减少。四溴苯三唑(TBB)在促进HDAC2 mRNA和蛋白表达的同时,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数减少;用HDAC2的特异性阻滞剂丙戊酸抑制HDAC2 mRNA和蛋白的表达时,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数增加。结论:香烟提取物可通过减少小鼠C2C12成肌细胞HDAC2的表达促进细胞老化。     

一例罕见的新的TCIRG1基因杂合性突变引起的婴儿恶性石骨症

目的:研究1例婴儿恶性石骨症患者的致病基因及其突变。TCIRG1和CLCN7是婴儿恶性石骨症最常见的致病基因。前者被认为是纯合性致病基因,国外只有6例其杂合性改变也致本病的报导,而我国无杂合性突变导致本病的报道。方法:通过骨组织X线检查结合临床症状及体征确诊1例散发性婴儿恶性石骨症患者。提取患者及其父母的外周血基因组DNA,PCR扩增TCIRG1和CLCN7基因外显子及其剪切位点序列,对PCR产物直接测序。用TCRIG1基因附近的微卫星标记和SNP构建患者及其父母的单倍型。用染色体微阵列分析技术对患者及其母亲进行TCIRG1基因拷贝数目变异的检测。结果:患者TCIRG1基因第5号外显子内发现一个4个碱基的缺失突变c.449_452del AGAG(p.Gln149Glnfs16),该突变使得基因3’端编码的666个氨基酸被截断,失去了整个ATP酶V0复合结构域。患儿双亲TCIRG1和CLCN7基因的突变检测及单倍体构建证实该突变来源于患者父亲。染色体微阵列分析未发现患儿及其母亲携带有任何累及TCIRG1及CLCN7基因的拷贝数目变异。结论:本研究发现了1例TCIRG1基因新的杂合性突变所致的婴儿恶性石骨症。这是我国TCIRG1基因杂合性突变引起婴儿恶性石骨症的首例报道。这个发现可用于婴儿恶性石骨症的分子诊断。     

致白内障基因Hsf4b K65R位点突变对下游热休克蛋白表达的影响

目的:探讨致白内障基因热休克因子4b(Hsf4b)K65R位点突变对其调控下游热休克蛋白(HSP)表达的影响。方法:采用KOD-Plus-Mutagenesis-Kit试剂盒构建pWZL-blast-HA-Hsf4b/K65R赖氨酸突变质粒;通过慢病毒感染小鼠晶状体上皮细胞mLEC构建稳定表达Hsf4b/K65R突变质粒的细胞株;Western blotting检测Hsf4b在mLEC K65R点突变细胞株和野生株中的表达;Western blotting及real-time PCR检测K65R点突变后下游蛋白Hsp70、Hsp90、Hsp27和CryAB表达的变化。结果:阳性克隆PCR及基因测序证明慢病毒载体pWZL-blast-HAHsf4b/K65R构建成功。K65R点突变后不影响Hsf4b在小鼠晶状体上皮细胞mLEC中的表达,但能影响下游蛋白CryAB、Hsp27、Hsp70i和Hsp90a的表达。结论:pWZL-blast-HA-Hsf4b/K65R载体可用于慢病毒感染稳定细胞株构建。Hsf4b K65R位点突变能显著影响其对热休克蛋白的调控功能。     

Ifi204基因表达对大鼠血管外膜成纤维细胞凋亡和迁移的影响

目的探讨ifi204基因过表达与沉默对大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)凋亡和迁移的影响。方法原代培养大鼠VAF,利用携带ifi204基因的慢病毒颗粒或空载体慢病毒颗粒感染VAF,分别作为实验组(ifi204 lv组)和阴性对照组(blank lv组)。用ifi204基因小干扰RNA瞬时干预VAF使其沉默(ifi204 siRNA组)、空白小干扰RNA作为阴性对照组(control siRNA组),未经处理的VAF作为空白对照组(negative组)。流式细胞仪检测细胞凋亡,细胞划痕法和Transwell法测定细胞迁移情况,用real-time PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白表达。结果与blank lv组、control siRNA组、ifi204 siRNA组和negative组相比,ifi204 lv组的P204、P53 mRNA和蛋白表达及细胞凋亡率明显上调(P0.05),细胞迁移速度降低(P0.05)。转染ifi204 siRNA可抑制P204、P53的mRNA和蛋白表达(P0.05),提高细胞活力,抑制细胞凋亡(P0.05),加快细胞迁移速度(P0.05)。结论 ifi204基因表达对大鼠VAF细胞凋亡和迁移的影响可能与激活P53表达有关。     

脊柱颈胸结合部C5~T2三维有限元建模与验证

目的基于CT图像数据建立人体脊柱颈胸结合部C5~T2的三维有限元模型,并验证模型的正确性和有效性。方法采用Mimics、Geomagic和Hypermesh软件对人体脊柱颈胸结合部C5~T2椎体进行三维重建、模型修复和有限元前处理,对模型顶面施加±0.5、1、1.5、2 N·m扭矩,用于模拟人体前屈和后伸活动时所产生的载荷作用,使用ANSYS软件计算脊柱颈胸结合部C5~T2节段在前屈和后伸承受扭矩载荷作用时的关节活动度(range of motion,ROM),将计算结果与前人研究结果进行对比分析。结果人体脊柱颈胸结合部C5~T2三维模型中C5~6、C6~7、C7~T1和T1~2各节段椎体在1 N·m载荷作用下,前屈时ROM分别为4.30°、3.21°、1.66°和1.41°,后伸时ROM分别为3.47°、2.86°、0.96°和0.92°。前屈时最大应力出现在椎体前缘,后伸时椎体后缘出现较大应力。ROM和应力分布的趋势与前人研究结果相一致。结论建立的脊柱颈胸结合部三维模型精确逼真,符合脊柱颈胸结合部的生物力学特性,模拟结果可为临床病理研究和颈胸部手术术式的评价提供理论依据。     

颈胸段脊柱全脊椎切除术后不同重建方式的有限元分析

目的 基于CT图像对人体颈胸段脊柱C5~T2节段进行三维模型重建,采用有限元方法探究椎弓根螺钉、钛网和钢板等不同内固定器械组合对颈胸段脊柱全脊椎切除（total spondylectomy, TS）术后稳定性的影响及内固定器械的应力分布。方法 建立颈胸段脊柱C5~T2节段健康完整模型,并通过与体外实验关节活动度（range of motion, ROM）结果对比验证模型有效性。在健康完整模型基础上,建立颈椎C7节段行TS后的4种重建模型：TM+AP+DPS模型（钛网+前路钢板+后路双节段椎弓根螺钉固定）,TM+AP+SPS模型（钛网+前路钢板+后路单节段椎弓根螺钉固定）;TM+DPS模型（钛网+后路双节段椎弓根螺钉固定）;AP+DPS模型（前路钢板+后路双节段椎弓根螺钉固定）,并分析各重建模型在前屈、后伸、左右侧弯和左右扭转时的ROM及内固定器械的应力分布情况。结果 TS术后重建会大幅度降低重建节段ROM,模型的重建节段ROM均下降超过93%,后路单节段螺钉固定时,钛网出现应力集中现象。结论 4种模型重建节段固定效果相近,后路双节段螺钉固定的3种模型中内固定器械应力分布较为平均,模型整体稳定性优于后路单节段固定模型。     

不同角度载荷下股骨头骨小梁的生物力学特性

目的探讨不同角度载荷对股骨头骨小梁形态学与力学性能的影响,为研究股骨头坏死、塌陷的生物力学机制提供理论依据。方法利用12月龄羊股骨头和人尸体股骨头分别制作羊股骨头骨小梁试件94个和人股骨头骨小梁试件43个。按照受力方向与骨小梁主压力方向之间的不同夹角,将骨小梁以10°间隔分为内翻10°、0°和外翻10°、20°、30°共计5组,模拟股骨颈骨折内固定术后不同戈登(Garden)对线指数下的复位情况。通过分别对羊股骨头骨小梁进行micro-CT扫描、计算与压缩破坏试验以及对人尸体股骨头骨小梁进行循环压缩试验,分析不同受力方向下股骨头骨小梁的骨体积分数(BV/TV)、骨表面积/骨体积(BS/BV)、骨小梁平均厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁间距(Tb.Sp)等形态学指标以及弹性模量、极限强度、屈服强度、初始弹性模量、循环次数等力学指标。结果加载方向与骨小梁的主压力方向之间夹角为0°时,BV/TV、Tb.Th以及弹性模量、极限强度、屈服强度、初始弹性模量、循环次数均为最大,而BS/BV与Tb.N为最小,并随着夹角增大前者呈递减而后者呈递增趋势。结论 12月龄羊股骨头骨小梁BV/TV与极限强度随受力方向与骨小梁主压力方向之间夹角变化的趋势与人股骨头骨小梁一致;加载方向与主压力骨小梁之间夹角增大时,股骨头骨小梁形态学与力学性能均下降;Garden指数偏离160°越大时,股骨头内骨小梁越易发生损伤。     

视黄醇结合蛋白4与糖尿病肾病关系的Meta分析

目的 为综合性地进一步探讨血清视黄醇结合蛋白4(retinol-binding protein 4,RBP4)水平与糖尿病肾病的相关性.方法 检索了所有RBP4与糖尿病肾病相关的已发表文献.文献来源PubMed、EMBASE、CINAHL、中国期刊全文数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)和维普中文科技期刊数据库(VIP)等,共获得文献23篇,阅读文题和摘要排除文献5篇:其中非病例对照研究3篇、综述1篇、Meta分析1篇.阅读全文评估后,排除不满足纳入条件文献9篇:其中不可靠性发表4篇、分组不详文章1篇、RBP4与非糖尿病肾病相关性文章4篇,最终共纳入9项相关性研究.每一项研究均对每个变量,汇总相关系数(RS),使用随机效应荟萃分析估计.使用视黄醇结合蛋白4、2型糖尿病与糖尿病肾病作为关键词.提取相关数据并应用RevMan 5.0软件进行Meta分析.结果 共纳入725例研究对象,Meta分析结果显示2型糖尿病合并肾病组血清RBP4水平明显高于对照组,其差异有统计学意义[WMD =20.47 95％CI(11.90 29.04)P＜0.00001].结论 视黄醇结合蛋白4水平与糖尿病肾病呈明显相关性.     

miR-25靶向RECK促进宫颈癌HeLa细胞的增殖

目的探讨微小RNA-25(miR-25)对宫颈癌He La细胞增殖活性的影响及其与逆向诱导的带Kazal基序的富含半胱氨酸蛋白(RECK)的靶向关系。方法构建pc DNATM6.2-GW-pre-miR-25、pmir GLO-野生型RECK(RECK-WT)和突变型RECK(RECK-MT)真核表达载体及miR-25抑制剂(anti-miR-25),采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测pre-miR-25和anti-miR-25在He La细胞中的转染效率,并采用MTT法分析miR-25对He La细胞增殖活性的影响,双萤光素酶报告基因、qRT-PCR和Western blot法检测miR-25与RECK靶向关系。结果测序结果显示pc DNATM6.2-GW-pre-miR-25、pmir GLO-RECK-WT和pmir GLO-RECK-MT重组载体构建成功,qRT-PCR提示pre-miR-25与anti-miR-25在He La细胞中具有良好的转染效率。MTT结果显示miR-25能够明显促进He La细胞的增殖。双萤光素酶报告基因检测显示共转染pre-miR-25与RECK-WT的He La细胞其萤光活性显著下降,同时qRT-PCR及Western blot也显示anti-miR-25在转录和转录后水平均能够显著增加He La细胞中RECK的表达。结论miR-25能够靶向RECK,促进宫颈癌He La细胞的增殖。