人细胞周期相关激酶(CCRK)启动子的分析和特征研究

目的：分析人CCRK基因启动子、启动子的核心序列及与其表达相关的转录因子。方法：采用5’-RACE技术鉴定人CCRK基因的转录起始点；对启动子区3’端3个截短片段255bp(-367／-128)，210bp(-322／-128)和160bp(-272／-128)进行删除分析，双荧光素酶分析测出的最小活性片段作为核心启动子的上游位点。通过生物软件Matlnspector V2．2分析核心启动子区域，寻找并推测重要的转录因子，并对其核心序列进行定点突变分析，再通过电泳迁移率(EMSA)实验加以鉴定。结果：采用5‘-RACE技术，得到的PCR产物直接测序，定位-242“T”为转录起始点；通过启动子3’端小片段删除分析，255，210和160bp均无活性，由此判断3’端255个核苷酸不存在核心启动子序列，并定位一段74bp的区域为核心启动子(-441／-367)区域。通过Matlnspector软件分析，发现在这段核心启动子区域内有3个重要的结合位点：Delta EF-1，NF-κB和Spl。对这3个结合位点的核心序列进行定点突变后瞬时转染U373，经双荧光素酶分析发现Delta EF-1的活性明显升高，NF-κB没有变化，Spl的活性降低但不太明显。进一步通过电泳迁移率(EMSA)实验鉴定，Delta EF-1和NF-κKB能与U373核蛋白形成特异性的DNA-蛋白质复合体，表明Delta EF-1和NF-κB两个转录因子与人CCRK基因表达相关。结论：对人CCRK启动子的特性研究，为今后认识该基因的转录调控机制打下了基础，为揭示恶性神经胶质瘤的发生机制及防治措施的研究提供了新的思路。     

人单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）基因的PCR扩增、克隆及序列分析

本文报道用植物血凝素（ＰＨＡ）诱导健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ，包括单核细胞和淋巴细胞），提取细胞总ＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ第一链，再以其为模板进行ＰＣＲ，得到了编码成熟单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ。该ｃＤＮＡ用ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ双酶切后，回收含ＭＣＰ－１基因的长约２８０ｂｐ的ＤＮＡ片段，插入到经ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ双酶切的ｐＵＣ１９载体中，进行序列分析。结果表明，ＭＣＰ－１中第１２个氨基酸的编码序列与国外报道的不同。由ＴＧＴ变成了ＴＧＣ，但编码相同的氨基酸即半胱氨酸，其余的编码序列则完全相同，说明ＭＣＰ－１的基因型可能存在着多态性。     

体内激素与乳腺癌

乳腺为激素应答性器官,体内激素及其相应代谢产物在乳腺上皮正常与异常发育过程中发挥重要作用.现就近年相关研究进展进行综述.     

血纤溶酶原激活物及其基因工程研究进展

血栓病对人体健康及生命危害极大,溶解血栓需要激活血纤溶酶原(plasminogen)生成血纤溶酶(plasmin),将血纤维蛋白网降解成可溶性物。目前血纤溶酶原激活物(plasminogen activator,简称PA)有三类:来说是一种异种蛋白,本文主要谈尿激酶及组织型血纤溶酶原激活物。尿激酶是从人尿中提取的制品,无抗原性、变态反应,毒性作用和副作用较小,且能自大量新鲜尿液提自细菌分离的链激酶及葡激酶;人尿中分离的尿激酶和自组织或细胞分离的组织型血纤溶酶原激活物。它们均为蛋白酶,其溶血栓的作用如下:链激酶、葡激酶均为细菌蛋白,对机体     

利用GST沉淀技术检测蛋白质间的相互作用

蛋白质间相互作用的研究作为了解蛋白质生物功能的重要手段之一,在功能基因组学研究中极为重要.蛋白质间相互作用存在于机体每个细胞的生命活动过程中.     

幽门螺杆菌热休克蛋白A基因的克隆及论著高效分泌表达

目的 :从幽门螺杆菌 (Hp)分离热休克蛋白A基因 ,并实现在大肠杆菌中的融合分泌表达。方法 :提取Hp染色体DNA ,用PCR方法扩增hspA基因。经克隆、测序后 ,构建融合分泌表达载体 pMAL HspA ,转化大肠杆菌 ,IPTG诱导表达。 结果 :分离得到了高度保守的 354bp的hspA基因片段 ,并在大肠杆菌中实现了该基因的融合分泌表达。在 37℃诱导表达 3h后 ,其融合分泌表达蛋白可占细菌周质总蛋白的 66.6%。该表达带可被抗Hp的特异抗体所识别。 结论 :幽门螺杆菌hspA基因的克隆与表达为Hp疫苗的研制打下了基础。     

用抗体捕获法从噬菌体肽库中筛选志贺毒素B亚基结合分子

目的：避免生物素化对志贺毒素Ｂ亚基结构功能和生物学活性的影响，从噬菌体肽库中筛选与志贺毒素Ｂ亚基结合的短肽分子。方法：采用抗体捕获法。结果：经过四轮筛选，ＥＬＩＳＡ结果表明，与ＳｔｘＢ结合的噬菌体得到了有效富集，在８６个随机挑选的克隆中，４９个与ＳｔｘＢ结合，阳性克隆的序列也表现出一定的偏向性，在结构明确的２９个克隆中，有１２个克隆（４１％）所编码的短肽序列完全一致。结论：抗体捕获法是有效的。运用噬菌体表面显示技术筛选目的分子时，对于生物素化或其他固定化策略影响到结构功能和生物学活性的某些配体分子而言，抗体捕获法是一种较好的选择，可能具有广泛的适用性。     

妊娠高血压综合征孕妇凝血4项检测结果的临床应用

目的探讨妊娠高血压综合征孕妇凝血4项结果及临床应用价值。方法随机抽取2007年5月-2009年5月我院保健科诊断为妊娠高血压综合征孕妇118例为观察组,健康孕妇207例为对照组,2组资料均已进行凝血4项检测。结果妊娠高血压综合征孕妇的PT,APTT的时间比健康孕妇明显缩短,而FIB的结果明显升高,经统计学处理,差异有统计学意义(P<0.05);在118例妊娠高血压综合征孕妇中,轻度61例(51.6%),中度36例(30.5%),重度21例(17.9%),用统计学双变量Spearman相关分析,PT,APTT的结果与妊娠高血压综合征的病情严重程度呈正相关,FIB则呈负相关。结论妊娠高血压综合征孕妇血液处于高凝状态,检测凝血4项有助诊断妊娠高血压综合征的病情严重程度。     

乳腺癌转移、侵袭相关基因研究

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤。每年约有30 %的乳腺癌患者发生癌细胞转移现象,导致发病率及死亡率上升,成为影响其疗效的主要原因。了解乳腺癌转移、侵袭相关基因对于预防和治疗乳腺癌转移具有重要作用。对近年来发现的乳腺癌转移、侵袭相关基因作一综述。