nm23-H1基因对Tca8113的转移能力及化疗敏感性影响的实验研究

目的　通过nm2 3-H1的转化及导入Tca81 1 3细胞株 ,建立稳定、高效、低毒的转染方法 ,观察nm2 3-H1对Tca81 1 3细胞株侵袭转移能力的影响。方法　利用基因转化技术 ,制备高纯度的nm2 3-H1真核表达质粒。利用阳离子脂质体介导的转染技术 ,完成转染方法的建立。利用免疫组化技术 ,检测转染前后的nm2 3-H1的蛋白产物核苷二磷酸激酶A (NDPKA)的表达。利用transwell小室和冲刷实验 ,观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。MTT法观察nm2 3-H1对Tca81 1 3化疗敏感性影响。结果　使用重组的pCMV-Neo-Bam真核表达载体 ,将nm2 3-H1转染口腔癌细胞 ,并获得稳定表达。Tca81 1 3细胞株nm2 3-H1基因转染前后表达水平有明显差异 ,转染后Tca81 1 3细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低 ,转染前后Tca81 1 3细胞株对阿霉素 (ADM)、5-氟尿嘧啶 (5-FU)、甲氨喋呤 (MTX)的化疗敏感性无显著差异 ,转染后Tca81 1 3细胞株对顺铂 (CDDP)明显增敏。结论　nm2 3-H1对Tca81 1 3细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用 ,nm2 3-H1可能通过特异性地影响细胞内的能量交换过程来达到对CDDP化疗增敏的效果。     

术前诱导化疗对口腔鳞癌细胞凋亡和增殖的影响

细胞过度增殖是恶性肿瘤的重要特征之一,长期以来,抗癌药物的研究多集中在抑制肿瘤细胞增殖活性方面.近年发现,细胞凋亡(apoptosis, APO)与肿瘤的发生、发展、治疗及预后关系密切,APO在肿瘤化疗中的作用成为研究热点[1,2].本文比较24例口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者经VM(vincristine methotrexate)方案化疗前后APO和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的变化,以探讨VM方案的抗癌机理.     

Twist1调控上皮-间质转化促进舌鳞癌细胞顺铂耐药机制的研究

目的: 探讨Twist1调控上皮-间质转化（EMT）促进舌鳞状细胞癌细胞顺铂耐药的机制。方法: 在CAL27/CDDP中转染Twist1 siRNA,免疫印迹及免疫荧光检测E-cadherin、Vimentin的表达;免疫印迹检测Twist1、Slug的表达;Transwell及划痕实验检测细胞的侵袭、迁移能力;MTT检测细胞对顺铂的半抑制率。采用SPSS17.0 软件包对结果进行单因素方差分析。结果: 转染Twist1 siRNA可逆转CAL27/CDDP的EMT表型, E-cadherin表达增强,Vimentin、Twist1及Slug表达降低,细胞的侵袭、迁移能力明显降低,IC₅₀下降41.75%±5.10%（P<0.01）。结论: Twist1可通过调控上皮-间质转化而促进舌鳞癌细胞的顺铂耐药。     

侧颅底相关头颈肿瘤的手术治疗

目的:探讨颞下窝及翼腭窝区侧颅底受累头颈肿瘤的手术进路及疗效。方法:2005年4月～2009年6月,15例颞下窝及翼腭窝区肿物并同时伴有侧颅底受累的患者在中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科进行手术治疗。采用颅面联合入路10例、颞下窝入路3例,Weber-Ferguson加Lynch入路2例。结果:15例患者肿瘤全部切除,11例同期行颅底软硬组织缺损的修复。无手术死亡,无术后偏瘫或脑脊液漏。结论:颞下窝及翼腭窝区颅底受侵肿物的手术入路应视肿瘤部位及颅脑组织受影响的程度而定。肿瘤切除同时行缺损修复可降低手术风险及并发症的发生。     

转化生长因子β1诱导人舌鳞状细胞癌细胞上皮-间质转化及其顺铂耐药性研究

目的 利用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人舌鳞状细胞癌(TSCC)细胞CAL27、顺铂耐药细胞CAL27-res发生上皮-间质转化(EMT),建立TSCC细胞发生EMT的实验研究模型.研究EMT对TSCC细胞顺铂耐药性及细胞增殖、凋亡的影响.方法 10 ng/ml的TGF-β1处理CAL27、CAL27-res细胞8 d,观察细胞形态学变化,Western blot 和细胞免疫荧光验证EMT相关上皮标记蛋白及间质标记蛋白表达的变化,划痕试验检测细胞迁移能力的变化,MTT法检测细胞半抑制率(It50),免疫荧光检测MDR、MRP、Topo Ⅱβ的表达,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡.结果 TGF-β1 可诱导CAL27、CAL27-res向间质细胞形态转化,并且下调上皮相关标记蛋白E-cadherin的表达,上调间质相关标记蛋白Vimentin的表达,细胞的迁移能力明显增强.IE50分别提高2.31倍(CAL27)和1.72倍(CAL27-res),MDR和MRP表达升高,Topo Ⅱβ表达降低.细胞增殖指数(PI)均明显降低(CAL27:χ2=16.799,P<0.001;CAL27-res:χ2=25.375,P<0.001),细胞凋亡指数(AI)均明显升高(CAL27:χ2=165.0797,P<0.001;CAL27-res:χ2=196.5640,P<0.001).结论 TGF-β1能够成功诱导CAL27、CAL27-res发生EMT并且明显增强细胞对顺铂的耐药性,同时抑制细胞增殖,促进凋亡.     

内镜辅助下腮腺浅叶部分切除术与传统腮腺浅叶部分切除术的比较研究

Objective To investigate the feasibility of endoscopy-assisted partial-superficial parotidectomy. Methods 38 cases with benign tumors located in the superficial lobe of the parotid gland were randomly assigned to receive conventional (20 cases) or endoscopic (18 cases) partial-superficial paretidectomy. Two short incisions, which were 2 ～ 2.5 cm in length and located at retromandibular and postauricular area, were adopted for endoscopy-assisted surgery. The facial nerve was dissected through retrograde approach. Results The tumors were successfidly resected with endoscopy in 18 cases. The operation time was not significantly different between the conventional and endoscopy-assisted procedures (P > 0.05). The intraoperative blood loss was markedly lower in endoscopy-assisted group, compared with conventional group(P < 0.01). All the 18 cases with endoscopy-assisted surgery were satisfactory with the postoperative cosmetic results. The great auricular nerve was preserved very well in 12 patients(66.6%). Transcient facial paralysis happened in 1 ease and relieved 1 months later. Salivary fistula occurred in 1 case and recovered after dressing with pressure for 2 weeks. All the patients were followed up for 24 ～ 50 months (mean, 39 months) without relapse. Conclusions Endoscopy-assisted partial-superficial parotidectomy can successfully treat benign tumors located in the superficial lobe of parotid gland with a better postoperative cosmetic result.     

全反式维甲酸对舌癌细胞株抗增殖作用的研究

目的：研究全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）对舌癌细胞株的体外抗增殖作用。方法：经不同浓度全反式维甲酸（１０＾－７￣１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）处理舌癌细胞株后,应用流式细胞仪检测舌癌细胞细胞周期变化。结果：舌癌细胞株经１０＾－７￣１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸处理１￣６ｄ后,Ｇ１／Ｇ０期比率呈上升趋势,Ｓ期和Ｇ２＋Ｍ期比率呈下降趋势,与对照组相比,经全反式到处理３ｄ和６ｄ的细胞,其Ｇ１／Ｇ０期比率明显上升（Ｐ     

含绿色荧光蛋白报告基因的TIMP-2真核表达载体的构建及其在人成釉细胞瘤中的表达

目的构建含有绿色荧光蛋白报告基因（GFP）的TIMP-2真核表达载体PcDNA3．1（＋）／GFP-TIMP-2，并探讨其在成釉细胞瘤（AB）中的表达情况。方法应用RT-PCR技术从体外培养的人AB中获得TIMP-2目的基因片段，采用分子克隆技术构建该基因的真核表达载体PcDNA3．1（＋）／GFP-TIMP-2，并以脂质体为介导转染至体外培养的人AB细胞。流式细胞仪测定转染效率，倒置相差荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测转染前后TIMP-2mRNA的表达量的改变。结果构建的PcDNA3．1（＋）／GFP-TIMP-2经酶切和测序鉴定证明和预期结果一致。PcDNA3．1（＋）-TIMP-2转染人AM细胞后TIMP-2mRNA的表达量增加。结论成功构建TIMP-2真核表达载体PcDNA3．1（＋）／GFP-TIMP-2并转染至人AB细胞。     

舌鳞癌组织中p15蛋白表达与其生物学行为及预后的关系

[目的]检测p15蛋白在舌鳞状细胞癌(TSCC)中的表达,探讨其与临床病理及预后的关系。[方法]应用免疫组化超敏S-P法检测45例TSCC和10例正常舌组织中p15蛋白的表达,染色结果进一步用图像分析仪定量测定。[结果]TSCC中p15表达缺失率为46.7％(21/45);临床Ⅰ、Ⅱ期p15表达水平(54.25±21.14)明显高于Ⅲ、Ⅳ期(29.62±9.28),无颈淋巴结转移组(59.05±18.03)明显高于有转移组(26.83±8.58),各组间差异显著(P<0.05);Cox模型分析表明p15缺失与预后不良有关(P<0.05)。[结论]p15蛋白表达缺失是TSCC发生发展中较常见分子事件,对准确评估TSCC的生物学行为和预后有重要的临床意义。     

口内入路颌下腺切除及术中颌外动脉的处理

目的探讨口内入路颌下腺切除术在解剖上的可行性及手术安全性。方法对颌下腺与颌外动脉的关系进行文献复习，为口内入路的颌下腺切除术提供解剖学基础。行口内入路的颌下腺切除术10例，包括慢性颌下腺炎8例，颌下腺多形性腺瘤、颌下腺囊肿各1例。结果70％（7／10）患者的颌外动脉走行于颌下腺腺体表面，分出滋养支供血腺体。30％（3／10）患者的颌外动脉穿行于腺体中。10例口内入路的颌下腺切除术效果良好，手术时间平均为50min，出血量平均为60ml。10例患者未出现术中、术后大出血等并发症。结论颌下腺切除术中只要严格掌握适应证，妥善处理颌外动脉，对于颌下腺的炎症、囊肿和部分良性肿瘤而言，口内入路的颌下腺切除术安全可靠。