人胶质细胞源性神经营养因子和血管内皮生长因子165双基因真核表达载体的构建与鉴定

背景：人胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line - derived neurotrophic factor,GDNF)和血管内皮生长因子165 (vascular endothelial growth factor 165,VEGF₁₆₅)在细胞分化过程中有重要作用。目的：构建双基因共表达载体pIRES₂-GDNF-VEGF₁₆₅并对其进行鉴定。方法：采用PCR法从人外周血单个核细胞的基因组DNA中获取人胶质细胞源性神经营养因子基因,然后将人胶质细胞源性神经营养因子的cDNA片段插入到pIRES₂-EGFP多克隆位点构建成为pIRES₂-GDNF-EGFP。人血管内皮生长因子165 cDNA片段是通过双PCR的方法从pIRES₂-VEGF₁₆₅-EGFP质粒中获取,接着将血管内皮生长因子165 cDNA片段以替换EGFP的方式插入pIRES₂-BDNF-EGFP中,最后构建成为含有内部核糖体进入位点(IRES)的pIRES₂-GDNF-VEGF₁₆₅双基因共表达载体。通过双酶切和DNA测序方法对其鉴定,将重组的双基因共表达载体感染HEK293细胞,利用RT-PCR 与 Western-blot 方法检测双基因的表达。结果与结论：DNA测序显示,提取的人胶质细胞源性神经营养因子和血管内皮生长因子165均与基因库报道序列一致,相对分子质量分别为636 bp和576 bp。构建的pIRES₂-GDNF-VEGF₁₆₅双基因共表达载体经Bgl II/Bam HI切出GDNF条带,经Bam HI/Not I双酶切后切出 IRES-VEGF₁₆₅片段,经Bgl II/Not I双酶切后切出GDNF-IRES-VEGF₁₆₅片段。RT-PCR与Western-blot方法检测显示,此载体转染后,HEK293细胞均能表达人胶质细胞源性神经营养因子和血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白。说明实验成功构建了能表达人胶质细胞源性神经营养因子和血管内皮生长因子165的双基因真核表达载体。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

二甲双胍降低人子宫内膜癌裸鼠移植瘤孕激素耐药及其机制的初步研究

目的:研究二甲双胍对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤孕激素耐药性的逆转作用,并初步探讨其可能机制。方法:将40只裸鼠随机分为2组,分别建立人子宫内膜癌ishikawa及孕激素不敏感ishikawa/GLOI细胞裸鼠皮下移植瘤模型,每组各随机分成4个亚组,每亚组各5只小鼠:对照组(生理盐水)、二甲双胍组(二甲双胍200mg/kg灌胃给药,0.1ml/只)、孕激素(MPA)组[甲羟孕酮(MPA)100mg/kg腹腔注射,0.1ml/只]、二甲双胍+MPA组(同时给予上述剂量二甲双胍灌胃和MPA腹腔注射)。治疗期间定期测量肿瘤大小及裸鼠质量。实验结束时取出移植瘤,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,计算药物对肿瘤生长的抑制率。应用免疫组化检测肿瘤GLOI、CyclinD1、mTOR、pmTOR蛋白的表达。结果:接种ishikawa细胞株的裸鼠中,二甲双胍组、MPA组、二甲双胍+MPA组的抑瘤率分别为36.63%、55.92%和75.38%,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。接种ishikawa/GLOI细胞株的裸鼠中,二甲双胍+MPA组的抑瘤率为41.77%,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);而二甲双胍组、MPA组的抑瘤率分别为12.58%和2.79%,与对照组的差异无统计学意义(P0.05)。免疫组化结果显示,接种ishikawa/GLOI细胞的MPA组中GLOI、mTOR、pmTOR、CyclinD1的表达与对照组无明显差异(P0.05),余各实验组中GLOI、mTOR、pmTOR、CyclinD1的阳性表达率均低于对照组(P0.05)。结论:二甲双胍能逆转人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的孕激素耐药性,其逆转机制可能与下调GLOI、mTOR、pmTOR、CyclinD1表达有关。     

血清C肽与心脑血管疾病相关性的研究进展

近年来心脑血管疾病的发病率呈逐年上升的趋势,其较高的致死率、致残率给家庭和社会带来沉重负担.因此,心脑血管疾病相关危险因素的防治逐渐引起人们的关注.众所周知,动脉粥样硬化是导致心脑血管疾病发生的重要原因之一.研究发现 C肽可能通过促进动脉粥样的形成参与心脑血管疾病的发生、发展,且脑卒中急性期可引起血清C肽水平的变化.这些发现具有重要的临床意义,因为 C肽可能成为生物医学预防、评估或治疗心脑血管疾病的良好指标.C肽与胰岛素同时由胰岛β细胞呈等分子分泌,近来发现其具有一定的生物活性,且在1型和2型糖尿病中发挥着不同的作用[1].现就血清C肽在心脑血管病中的研究进展做一综述.     

绝经后抑郁症治疗的研究进展

研究表明女性进入绝经期阶段后,抑郁症的发病风险呈上升趋势[1].国外相关研究显示绝经后抑郁症发病率在5.7%~59.8%[2-3].生殖衰老分期(STRAW+10)[4]将绝经后分为绝经早期和绝经晚期,绝经早期是指末次月经至之后6年期间,该阶段和围绝经期存在1年重叠;绝经晚期是指在此之后阶段.     

游走罐结合悬灸治疗腰背肌筋膜炎49例

目的:探寻治疗腰背肌筋膜炎的有效方法。方法:将98例患者随机分为治疗组(49例)和对照组(49例),治疗组采用游走罐、悬灸治疗,穴取大杼、风门、曲垣、秉风、肾俞、关元、阿是穴、条索状结节;对照组采用单纯针刺治疗。结果:治疗组治愈率63.3%,总有效率100%;对照组治愈率27.1%,总有效率85.4%,两组治愈率、总有效率比较差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:游走罐结合悬灸是治疗腰背肌筋膜炎的有效方法。     

魏品康治疗腹腔微波术后热灼伤所致麻痹性肠梗阻1例

随着腹部手术的广泛开展,术后急性肠梗阻发病率呈增高趋势。其病理表现为各种刺激造成纤维蛋白原渗出,炎性物质分泌,使肠蠕动功能失调,导致肠梗阻发生。因其发病急,来势凶,处理上甚为棘手。我们收治1例腹腔微波术后热灼伤所致麻痹性肠梗阻患者,采用西医常规疗法结合中药治疗,取得满意效果,现报道如下。     

下颈椎前路椎弓根螺钉数字化3D导板的偏差分析

下颈椎前路椎弓根螺钉内固定(anterior cervical transpedicular screw,ATPS)技术,可实现前路的直接减压和椎弓根螺钉坚强固定的优点。但也存在操作风险高,置钉难度大等缺点。因此,为了提高ATPS置钉的安全性,本研究拟利用个体化3D导板辅助下植入ATPS螺钉,并分析置钉前后的偏差,为后...     

脑缺血再灌注后脑梗塞周围区生长相关蛋白—GAP43表达的变化及外源性神经生

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后生长相关蛋白－４３（ＧＡＰ－４３）表达的变化规律及外源性神经生长因子（ＮＧＦ）的影响。方法：成年健康雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠７２只,随机分为假手术组、自然恢复组、人工脑脊液组和ＮＧＦ治疗组。采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注（ＭＣＡＯ）动物模型,应用免疫组织化学方法观察脑缺血再灌注后ＧＡＰ－４３的表达。结果：⑴脑缺血再灌注６ｈ后,缺血周围区ＧＡＰ－４３表达逐渐增高,第７天达高峰,以后逐渐降低,第２１天仍有表达。⑵应用外源性ＮＧＦ后,ＧＡＰ－４３表达较对照组有所增高,但无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结论：提示中枢神经系统损伤后,神经元具有再生和修复的可塑性,外源性ＮＧＦ对ＧＡＰ－４３的调节有特进一步研究。     

罗哌卡因与布比卡因用于蛛网膜下腔阻滞的比较

本文拟通过等效剂量的罗哌卡因(Ｒｏｐ)与布比卡因 (Ｂｕｐ)用于蛛网膜下腔阻滞的效应对比 ,探讨Ｒｏｐ用于蛛网膜下腔阻滞的有效性和安全性。资料和方法70例ＡＳＡⅠ～Ⅱ级行下腹部以下择期手术病人 ,男 41例 ,女 2 9例 ,年龄 18～ 5 0岁 ,体重 47～ 70ｋｇ ,随机分为Ｒｏｐ组与Ｂｕｐ组。入手术室前 30ｍｉｎ肌肉注射苯巴比妥钠 0 1ｇ,阿托品 0 5ｍｇ。输入乳酸林格液体 30 0ｍｌ,持续监测心电图 (ＥＣＧ)、脉搏氧饱和度 (ＳｐＯ2 )、血压 (ＢＰ)、心率(ＨＲ)和呼吸 (ＲＲ)。采用 2 5Ｇ脊麻穿刺针 ,于Ｌ3～ 4 进行蛛网膜下腔穿刺 ,脑脊…     

549例医用X射线工作人员健康分析

目的 了解和掌握医用X射线工作人员的健康状况。方法 对549名医用X射线工作人员进行临床和实验室检查。结果 ①男性与女性放射组的WBC、RBC、PLT和Hb与对照组比较差异无显著性。②放射组微核率高于对照组(P <0.001),并且有性别差异,男性组高于女性组(P <0.01);放射组微核阳检率高于对照组(P <0.05),并且随着放射工龄的增加而上升(趋势性χ²=20.41,P <0.001)。③眼晶状体混浊检出率高于对照组(P <0.001),以点状混浊为主。结论 医用X射线工种对放射人员的健康存在一定的影响。