长期不进展人类免疫缺陷病毒-1感染者准种膜蛋白V3环氨基酸特点分析

目的 了解长期不进展HIV-1感染者HIV-1准种膜蛋白V3环氨基酸序列特征及变异特点.方法 应用终点有限稀释套式PCR方法,对5例长期不进展HIV-1感染者不同时间点单个HIV-1前病毒env基因c2-v3-c3区域进行扩增和序列测定,用序列确证分析技术分析env基因区V3环氨基酸序列特征.结果 5例患者不同随访时间点获得的准种序列中,V3环35个氨基酸中出现多样性的位点分别有1～10个不等,同一患者不同随访时间点准种优势株序列完全一致或仅有1～2个位点不同;4例患者V3环顶端四肽为GPGR,1例患者为GPGK,同一患者不同随访时间点V3环顶端四肽一致;根据V3环11和25位氨基酸及V3环的电荷推测HIV-1辅助受体均为趋化因子受体(CCR)5.结论 长期不进展HIV-1感染者V3环序列存在不同程度变异,顶端四肽稳定性高,感染的HIV-1毒株可能为非合胞体诱导型毒株.     

不规范停用阿德福韦酯后肝炎急性加重1例原因分析

阿德福韦酯在未达到治疗终点时突然停药,会出现肝炎复发.复发时肝功能损害程度多数不超过治疗前水平,但有极少数患者肝功能迅速恶化,称为急性加重,其原因不明.我们对1例治疗成功的急性加重患者的系列血清进行检测,连续随访观察复发前后患者肝功能改变,血清HBV DNA载量、免疫功能和病毒序列变异,分析这些指标动态变化之间的关系,分析加重原因.     

广东省首例输人性甲型H1N1流行性感冒临床分析

目的 了解2009年广东省首例输入性甲型H1N1流行性感冒(流感)病例的流行病学、临床、病原学特点及预后转归.方法 对该例成年男性患者流行病学及临床资料进行回顾性分析,并采用实时荧光PCR法检测甲型H1N1流感病毒核酸.结果 该患者赴加拿大、美国自助旅游3周,2009年5月14日发病,次日回国入境检疫时有发热,即转送广州市第八人民医院隔离治疗.其临床表现以咽痛、干咳、鼻塞起病,后出现发热、全身肌肉酸痛、乏力、纳差等流感症状,无肺炎等并发症.WBC总数在发病初期升高,后期降低.咽拭子检测甲型H1N1流感病毒核酸阳性,病毒分离后测序结果显示与美国分离株高度相似.患者经抗病毒及对症支持治疗后痊愈出院.结论 该患者临床表现典型,确诊为广东省首例输入性甲型H1N1流感.     

实时荧光PCR技术在丙型肝炎病毒基因型检测中的应用

目的 探讨实时荧光PCR技术在丙型肝炎病毒(HCV)基因型检测中的应用价值.方法 采用一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)结合TaqMan技术,对HCV基因型进行实时荧光PCR检测;巢式RT-PCR扩增HCV的NS5B基因区域,测序后进行HCV基因亚型分析并与实时荧光PCR分型结果进行比较.结果 实时荧光PCR共分型119例,1型71例(59.7%),非1型48例(40.3%)其中110例成功进行测序分型;测序分型的110例中,1型73例(均为1b型),占66.4%,非1型37例(其中2a型7例、3a型6例、3b型3例、4a型1例、4k型1例、5a型1例、6a型17例、6n型1例),占33.6%.与110例测序分型的结果比较,实时荧光PCR分型总的符合率为71.8%(79/110),其中1型的符合率为80.9%(55/68),非1型的符合率为57.1%(24/42).结论 实时荧光PCR进行HCV基因型检测操作简便、快速,但分型结果特异性不高.     

2009H1N1流感病毒神经氨酸酶基因克隆与表达

目的制备2009H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)重组蛋白,为建立H1N1快速检测方法和神经氨酸酶抑制剂筛选模型奠定基础。方法采用MDCK细胞方法分离2009H1N1流感病毒,提取病毒RNA,RT-PCR生成NA基因,构建原核表达载体PET-102/D-TOPO-NA,IPTG诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳、WersternBlotting鉴定重组蛋白。结果成功分离2009H1N1流感病毒,NA蛋白119、152、275、292位氨基酸分别为Glu、Arg、His和Cys。SDS-PAGE凝胶电泳蛋白分子相对分子质量约为64000,与预期一致。WesternBlotting证实该蛋白具有神经氨酸酶抗原活性。结论 IPTG诱导原核表达神经氨酸蛋白的最适浓度为0.1mmol/L。实验得到的蛋白尚需进一步纯化。     

应用荧光定量PCR技术测定多次冻融对血清HBV DNA含量的影响

目的研究多次冻融状态对血清HBV DNA含量的影响。方法采用荧光定量PcR技术检测25例慢性乙型肝炎血清标本第1(基线)、2、4、6、8次循环冻融时的HBV DNA含量。结果80％(20／25)的血清标本经2到8次冻融后HBV DNA含量较基线水平仅有轻度升高。线性回归方法分析显示HBV DNA含量在每次冻融循环后较基线水平增加1．9％。冻融4～8个循环后血清HBV DNA含量下降20％以上者低于10％。结论血清标本在反复冻融8次以内其HBV DNA水平稳定的。     

中国首例输入性基孔肯雅热临床分析

目的 了解2008年我国首例输入性基孔肯雅热病例的流行病学、临床、病原学特点及预后转归.方法 对1例成年男性患者流行病学及临床资料进行回顾性分析,并采用ELISA和胶体合法检测患者血清基孔肯雅病毒IgM(CHIKV-IgM)抗体,实时荧光PCR法检测基孔肯雅病毒核酸(CHIKV RNA).结果 该患者临床表现为发热起病,有头痛、全身肌肉及关节酸痛,全身充血性斑丘疹,WBC及PLT减少.发病第9天CHIKV-IgM阳性;第3、5,7、9天CHIKV RNA阳性;RT-PCR扩增产物为575个核苷酸碱基片段,经序列测序结果与基孔肯雅病毒核酸序列同源性高达99%.患者经对症支持等治疗痊愈出院.结论 该患者为我国首例输入性基孔肯雅热确诊病例,本病临床表现与登革热相似.     

用套式聚合酶链反应检测乙型肝炎疫苗免疫后无抗体反应者血清…

为了解乙型肝炎（乙肝）疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，作者用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了正常人君中乙肝疫苗免疫后１５例不产生抗－ＨＢｓ和２０例产生抗－ＨＢｓ者血清的ＨＢＶ ＤＮＡ，同时用Ａｂｂｏｔｔ试剂检测血清的ＨＢｅＡｇ。结果发现，不产生抗－ＨＢｓ者的１５例中有６例（４０％）第２次ＰＣＲ扩增ＨＢＶ ＤＮＡ为阳性，其中３例（５０％）为ＨＢｅＡｇ阳性，产生抗－ＨＢｓ者的２０例其血清ＨＢＶ     

恩替卡韦抗病毒治疗慢性乙型肝炎24周的疗效观察

目的：探讨使用恩替卡韦辅助治疗慢性乙型肝炎的近期疗效。方法以我院2013－04～2014－04间收治的慢性乙型肝炎患者140例为研究对象,将其随机分为观察组与对照组。对照组口服阿德福韦酯,观察组在此基础上增加服用恩替卡韦,比较两组患者临床效果。结果观察组患者在治疗后6周、治疗后12周及治疗后24周时,乙肝病毒脱氧核糖核酸（ HBV DNA）载量显著低于对照组（P＜0．05）。而转化生长因子β1（TGF－β1）水平的比较中,则未见显著差异（P＞0．05）。结论恩替卡韦可以作为一种辅助用药,有效作用于慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗。