高糖和脂多糖对腹膜间皮细胞β连环蛋白表达及纤维化的影响

腹膜间皮细胞(PMC)在腹膜纤维化中起着关键作用,在炎性反应及非生理性高糖透析液的环境下,其形态、结构及功能都发生了变化.在糖尿病肾病发病过程中,肾小管上皮细胞内的β连环蛋白( β-catenin)含量及表达上调,使下游转分化及致炎、致纤维化因子高表达[1].一、材料与方法1.实验动物:SD大鼠,体质量160～200 g,普通级,由中国医科大学实验动物中心提供.2.药品和试剂:DMEM-F12干粉培养基(美国Hyclone),胎牛血清(天津灏阳),Trizol试剂(美国Invitrogen),实时RT-PCR试剂盒(大连TaKaRa),PCR引物由北京华大基因公司合成,兔抗3-catenin多克隆抗体、SABC试剂盒、DAB显色液(武汉博士德),Wnt通路中的关键酶GSK-3β.     

结核杆菌分泌性Ag85及IFN-γ在肾结核患者中的表达及意义

用免疫组织化学染色检测结核分支杆菌分泌性抗原85（Ag85）及γ-干扰素（IFN-γ）在肾结核患者（阳性对照组）及肾小球肾炎患者（阴性对照组）肾组织中的表达。结果发现,与阴性对照组比较,阳性对照组肾组织中Ag85及IFN-γ的表达明显增强;Ag85及IFN-γ二者呈直线正相关（r=0．9857,P〈0．05）。Ag85对肾结核的敏感度为100％,特异度为75％。认为Ag85在肾组织中的表达对早期诊断肾结核杆菌感染具有重要意义。     

52例狼疮性肾炎临床与病理相关关系的研究

目的:初步探讨狼疮性肾炎(LN)临床袁现和实验室检查与病理改变的相关性.方法:收集整理1996-2004年我院肾内科住院LN病人52例,所有病人在B超下行肾活检,所取肾组织分别作光镜、免疫荧光、电镜下超微结构观察.结果:52例病人中Ⅳ型LN最多,占28.8%;其次为Ⅲ型,占26.9%;Ⅰ型和Ⅵ型相对少见.亚临床肾炎以Ⅱ型多见,肾炎综合征以Ⅱ型和Ⅲ型多见,Ⅳ型和Ⅴ型最常表现为肾病综合征(与其它组相比,P＜0.05).贫血和ds-DNA在Ⅳ型中比率较高(与其它组比较,P＜0.05),Ⅱ型γ球蛋白升高较其它组明显(P＜0.05).结论:LN病理变化与临床表现具有一定对应关系,但没有完全恒定的关联性,临床工作要综合病人临床表现、免疫学指标和病理分析.     

尿Ⅳ型胶原检测对早期糖尿病肾病临床诊断意义的研究

目的 :研究尿Ⅳ型胶原在糖尿病肾病 (DN)早期肾损害时的变化及与其他相关指标之间的关系。方法 :采用一步夹心酶联免疫吸附法对 85例糖尿病患者及 2 4例正常成人尿Ⅳ型胶原水平进行检测。结果 :正常白蛋白尿组尿Ⅳ型胶原水平明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ;微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组尿Ⅳ型胶原水平明显高于正常白蛋白尿组 (P均 <0 0 1) ;尿Ⅳ型胶原水平与尿白蛋白及病程之间存在显著的正相关 ,尿Ⅳ型胶原水平与血糖、体重指数、血脂及血压之间无相关性。结论 :DN存在着胶原代谢的异常。尿Ⅳ型胶原在DN肾损害早期明显增高 ,并随病情进展持续性增高 ,尿Ⅳ型胶原可以作为DN早期诊断的指标之一     

泌尿系统疾病(一)

1肾小球病总论1 1概述肾小球病系一组有相似的临床表现,如血尿、蛋白尿、水肿、高血压等,但病因、发病机制、病理改变、病程和预后不尽相同,病变主要累及双侧肾小球的疾病。根据病因可分为原发性、继发性和遗传性三大类。本讲座主要讨论原发性肾小球疾病。1 2原发性肾小球疾病的分类1 2 1临床分类分为急性肾小球肾炎、急进性肾小球肾炎、慢性肾小球肾炎、隐匿性肾小球肾炎、无症状血尿和/或蛋白尿及肾病综合征。1 2 2病理分类依据世界卫生组织1982年制定的肾小球疾病的病理分类标准分为:①轻微病变性肾小球肾炎 ;②局灶性节段性病变,包括:局…     

乌司他丁对脂多糖诱导大鼠腹膜间皮细胞IL-15、IL-6表达的影响

目的：观察乌司他丁（UTI）对脂多糖（LPS）作用下大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）白细胞介素-15（IL-15）、白细胞介素-6（IL-6）表达的影响。方法：行RPMC的原代和传代培养,经鉴定后第3代用于实验。随机分组（1）正常对照组;（2）不同浓度脂多糖组（1、10、100mg/L）;（3）不同时间组：10mg/LLPS作用于RPMC3、6、12、24h;（4）10mg/LLPS＋乌司他丁组（160、320、640U/ml）作用12h;实时定量PCR法测IL-15mRNA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中IL-15、IL-6的表达。结果：脂多糖可刺激RPMC的IL-15mRNA及蛋白的表达增高且在12h内呈时间剂量依赖性（P〈0.05）;脂多糖诱导RPMCIL-6的蛋白表达增高,在12h内呈时间剂量依赖性（P〈0.05）;乌司他丁能显著降低脂多糖所致的腹膜间皮细胞IL-15、IL-6的表达（P〈0.05）。结论：脂多糖可上调PMCIL-15、IL-6的表达,乌司他丁可抑制脂多糖所致的IL-15、IL-6过度表达,以预防或延缓腹膜炎的发生与发展。     

血必净对高糖环境下大鼠腹膜间皮细胞分泌晚期炎性因子HMGB-1和TGF-β_1的影响

目的 研究血必净注射液对高糖环境下大鼠腹膜间皮细胞(PMC)分泌高迁移率族蛋白1(HMGB-1)和转化生长因子β_1(TGF-β_1)的影响,探讨其对腹膜透析相关性腹膜纤维化的防治意义.方法 胰蛋白酶消化法行PMC的原代培养和传代,经鉴定第3代细胞用于实验.随机分实验组和对照组,实验组加2.5%的葡萄糖及不同浓度的血必净,培养不同时点分别收集上清液,用ELISA法检测其中HMGB-1和TGF-β_1的含量,并进行统计学分析.结果 加2.5%葡萄糖的各实验组HMGB-1及TGF-β_1的含量均显著高于对照组(P<0.05);加血必净的各实验组HMGB-1及TGF-β_1的含量均显著低于单纯高糖组(P<0.05),且随着血必净浓度升高,HMGB-1及TGF-β_1的含量下降,20 mg/ml血必净组两者含量最低.结论 高浓度葡萄糖可促进PMC表达HMGB-1和TGF-β_1,而血必净可以拮抗高糖对PMC中HMGB-1和TGF-β_1表达的上调作用,提示血必净对预防、延缓腹膜纤维化有一定意义.     

慢性肾脏病矿物质和骨代谢紊乱血清生化学指标变化的临床分析

目的综合分析骨代谢的状态,指导临床上慢性肾脏病矿物质及骨代谢紊乱(CKD-MBD)的诊断、分型及治疗。方法对2008年11月至2009年2月在中国医科大学附属第一医院肾内科住院的56例CKD4期、5期及长期血液透析(5年以上)三组不同分期的慢性肾功不全患者清晨空腹抽血化验血清钙、磷、iPTH、bAP、TRACP,并行骨密度检查。结果三组不同分期慢性肾功不全患者CKD-MBD的发生率分别为36.4%、73.0%、87.5%(χ2=6.861,P0.05),其中高转运性骨病占65.79%,低转运性骨病占34.21%。高转运性骨病患者血清bAP和TRACP活性明显升高,而低转运性骨病患者血清bAP和TRACP活性降低。结论CKD-MBD是慢性肾功不全患者常见的并发症,以高转运性骨病为主,但低转运性骨病不容忽视。bAP和TRACP是反映成骨细胞和破骨细胞活性的敏感指标,临床上可作为鉴别高、低转运性骨病的可靠依据,结合血清钙、磷、iPTH、骨密度的改变,可以综合分析骨代谢状态,指导CKD-MBD的诊断、分型、药物的选择和综合治疗。     

骨髓干细胞移植治疗慢性马兜铃酸肾病大鼠的实验研究

目的:观察骨髓源性干细胞能否向慢性马兜铃酸肾病大鼠肾脏细胞分化及移植后相关生化指标的动态变化。方法:制备雌性Wistar大鼠CAAN动物模型,亚致死剂量X线照射后经尾静脉移植同系雄性大鼠骨髓干细胞,于移植后第60d处死大鼠,留取血、尿及肾组织标本。生化检测观察移植后相关生化指标的改善情况,Y染色体荧光原位杂交(Y-FISH)观察雌性受体大鼠肾脏中雄性骨髓源性干细胞的分化情况。结果:骨髓移植60d后在肾小球及肾间质中均发现Y染色体阳性的供体源性细胞,相关生化指标得到改善。结论:骨髓源性干细胞具有向慢性马兜铃酸肾病大鼠肾小球及间质细胞分化的潜能。