肾小管肝型脂肪酸结合蛋白对小鼠IgA肾病的肾脏保护作用

Objective To investigate the renoprotection of tubular L-FABP in murine IgA nephropathy (IgAN） induced by bone marrow transplantation(BMT). Methods IgAN models were reconstituted by BMT from IgAN-prone mice into mice (Tg) transgenically tubular overexpressing human L-FABP (hL-FABP) and wild type (WT) mice. These recipients were sacrificed at 6 and 12 weeks after BMT and their kidneys were collected. The expressions of hL-FABP, fibronectin (FN) and monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1) mRNA were detected by real-time PCR. hL-FABP, FN, type Ⅳ collagen (Col Ⅳ), hemeoxygenase-1(HO-1) and 4-hydroxy-2-nonenal (4-HNE) modified proteins were detected by Western blotting. The distribution of hL-FABP and FN protein in kidney was detected by immunohistochemistry. The level of serum IgA, urinary albumin and urinary hL-FABP was detected by ELISA. Results (1) IgAN was reconstituted in both Tg and WT mice by BMT: mesangial IgA deposition and up-regulation of serum IgA. The levels were not significantly different between two groups (Tg-ddY and WT-ddY). (2) hL-FABP was expressed in proximal tubular cells of normal Tg mice. The mRNA (1.62±0.32 vs 0.46±0.09, P<0.01) and protein expression (1.74±0.76 vs 1.14±0.31, P<0.01) of hL-FABP was up-regulated in Tg-ddY kidney and urinary hL-FABP level (?滋g/g creatinine) was significantly increased (59.87±26.75 vs 31.01±14.86, P<0.05) at the 6th week after BMT. (3) WT-ddY mice showed a significantly higher urinary albumin level (mg/L) (828±656 vs 82±22, P<0.01), severer mesangial matrix expansion (P<0.01),more glomerular FN and Col Ⅳ deposition at the 12th week. (4) Up-regulation of renal hL-FABP was associated with significant suppression of renal HO-1 expression (P<0.05), accumulation of 4-HNE modified proteins (P<0.05) and MCP-1 mRNA expression (P<0.01) in Tg-ddY mice. Conclusion Tubular L-FABP may lessen the progression of glomerular damage at early stages of IgAN by reducing oxidative stress and inflammatory mediators.     

高糖对腹膜间皮细胞β-连环蛋白及骨桥蛋白表达的作用

目的 观察高糖对大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cell RPMC)中β-连环蛋白(β-Catenin)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)2者mRNA及蛋白表达的影响.方法 胰蛋白酶法行RPMC的原代培养和传代,经鉴定第3代细胞融合至80%时分组.分为:正常对照组;不同浓度葡萄糖(1.5%,2.5%,4.25%) 组作用24h;2.5% 高糖作用不同时间(8,12,24,34,48 h)组,细胞免疫组织化学法检测β-Catenin蛋白在细胞上的表达情况,RealTime-RT-PCR 技术检测β-Catenin、OPN、TGF-β1mRNA的表达.ELISA法检测OPN蛋白表达.结果高糖刺激下RPMC 的β-catenin表达增加,与0 h 组比较,在8h即出现(但不具有统计学意义),12h具有统计学意义,24h达到高峰,48h 仍存在,组间差异均有统计学意义(P＜0.05);高糖可刺激RPMC OPN 的表达显著增加,呈剂量、时间依赖性(P＜0.05);TGF-β表达增加,在8h表达于较高水平,12h降低,24h达到高峰,48h仍存在,与0 h组比较,组间差异均有统计学意义(P＜0.01);高糖刺激下,β-Catenin、TGF-β1 表达显著增加,呈剂量依赖性,组间差异具有统计学意义( P＜0.05).结论 高糖通过上调β-Catenin、OPN的表达,引起腹膜损伤导致腹膜纤维化,β-Catenin、OPN参与了腹膜间皮细胞透析相关性腹膜纤维化的病理过程.     

坎地沙坦治疗抑制2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏氧化应激反应

 目的 探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾内氧化应激的影响及其作用机制。方法 糖尿病KK/Ta小鼠随机分为：非治疗组;早期治疗组：自6周龄起经口予坎地沙坦（4 mg?kg-1?d-1）治疗;晚期治疗组：自12周龄起予坎地沙坦治疗。正常对照组采用BALB/c小鼠。应用免疫组化染色检测肾脏中DNA氧化损伤的标志物8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）,免疫组化和竞争性RT-PCR检测NADPH氧化酶p47phox亚基mRNA和蛋白的表达。同时测定尿白蛋白排泄率,血压和糖耐量等临床指标。结果 28周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白排泄率增加（P<0.01）,肾脏NADPH氧化酶p47phox的mRNA和蛋白表达上调（P<0.01）,8-OHdG的形成增加（P<0.01）。坎地沙坦治疗减少尿白蛋白排泄率（P<0.01）,抑制肾脏NADPH氧化酶p47phox mRNA和蛋白的表达（P<0.01）,减少8-OHdG的形成（P<0.01）,早期治疗组和晚期治疗组的作用无显著性差异（P＞0.05）。结论 坎地沙坦治疗通过下调糖尿病状态下肾脏NADPH氧化酶p47phox的表达,抑制氧化应激反应,延缓糖尿病肾病的进展。     

全基因组扫描2型糖尿病KKTa小鼠白蛋白尿易感基因定位

 目的 利用全基因组扫描方法进行2型糖尿病KKTa小鼠白蛋白尿易感基因定位。方法 以近交纯品系雌性BALBc小鼠与雄性KKTa小鼠交配建立第一代杂交小鼠(F1),以雄性(KKTa×BALBc)F1小鼠与雌性KKTa小鼠回交。提取208只雄性回交小鼠基因组DNA。根据扩增的101个微卫星DNA分离片段大小决定回交小鼠基因型,同时测定体质量、血糖、尿白蛋白及尿肌酐等表现型。采用基因定位专用软件(MAPMAKERQTL, Map manager)进行数量性状位点(QTL)分析。结果 KKTa小鼠的体重、空腹血糖水平、经腹腔葡萄糖耐量试验空腹与注射葡萄糖后2 h血糖之和显著高于BALBc和F1小鼠(P0.01)。20,28周龄的KKTa小鼠平均尿白蛋白水平显著高于BALBc和F1小鼠(P0.01)。20周龄与28周龄的白蛋白尿水平与第2条染色体83.0 cM D2Mit311微卫星DNA标记附近区域显著连锁,最大对数优势积分值(LOD)为3.5,我们将这一易感基因座位命名为UA-1(尿白蛋白1)。KKKK组回交小鼠20周龄和28周龄的尿白蛋白水平显著高于KKBALB组回交小鼠。结论 与2型糖尿病KKTa小鼠尿白蛋白水平紧密连锁的易感基因座位位于第2条染色体83.0 cM处D2Mit311微卫星DNA标记附近区域（UA-1）。UA-1区域附近的生长激素释放激素(GHrH)基因Ghrh、生长抑素受体4基因Smstr4、血栓调节蛋白(TM)基因Thbd等为糖尿病肾病的可能易感基因。     

Ⅳ型胶原与肾小球疾病

目前有关细胞因子及细胞外基质 (ＥＣＭ )在组织器官硬化调节机制研究方面的进展 ,已经在“损伤”和“结瘢”之间的一段“暗区”内投入了一线曙光。ＥＣＭ在肾小球硬化中的作用正在日益受到重视。肾小球ＥＣＭ生化上由Ⅳ型胶原、层粘连蛋白(ＬＮ)、纤维粘连蛋白 (ＦＮ)及Ｖ、Ⅵ型胶原、硫酸肝素蛋白聚糖(ＨＳＰＧ)等组成 ;形态上则由肾小球基底膜 (ＧＢＭ )、系膜基质和包氏囊基底膜所组成。近年研究表明 ,在肾小球硬化的进展过程中 ,作为ＥＣＭ主要成分Ⅳ型胶原合成和 (或 )降解异常 ,使其在病变肾小球中积聚 ,从而参与硬化病灶的形成。本…     

妇科分清丸所致马兜铃酸肾病的临床和病理特点

目的探讨妇科分清丸所含马兜铃酸对肾脏、肝脏和血液系统的毒性作用及治疗途径。方法收集该院2003￣2004年14例由妇科分清丸所致马兜铃酸肾病(AAN)病人的临床和病理资料,并用前列腺素E1(10μg/d)静点或静推10￣14d治疗。结果妇科分清丸含有关木通,能引起血液、消化和肾脏等多器官功能障碍,症状出现早而严重。该组病人住院期间应用前列腺素E1治疗后血肌酐下降而血红蛋白水平升高(P<0.05)。结论马兜铃酸可能引起前列腺素系统或其他影响肾脏血流量的血管活性因子异常,所以改善微循环治疗对改善AAN的肾功能损伤有效,但是用量及疗程尚有待于进一步探讨。     

谈谈有关肾病综合征的诊治问题

编辑部负责同志： 我是一名乡村医生，今去信求助于贵社。我爱人弟弟今年２４岁，未婚，因淋雨后全身浮肿，于２０００年４月 ２６日在蛟河市人民医院确诊为“肾病综合征”，当时化验检查尿蛋白（），颗粒管型３～４个，血浆白蛋白 ２１ｇ／ Ｌ，总蛋白 ３９ｇ／ Ｌ，尿素氮１３．６ｍｍｏｌ ／Ｌ（医院认为，尿素氮升高与尿少有关），血脂高。入院后服强的松，６０ｍｇ顿服，并间断补白蛋白、利尿治疗１７天。患者一周内水肿渐消，血压（舒张庄高）渐降。但第１５天又全身浮肿，左侧胸腔大量积液、呼吸困难。医院准备加用环磷酰胺。该院医…     

前列腺素E1治疗慢性间质性肾炎患者血中AngⅡ,6-K-PGF1α/TXB2的变化及意义

研究慢性间质性肾炎患者应用前列腺素E1(POE1)治疗前后血中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)，6-K-PGF1α／TXB2的变化及其临床意义。经30例慢性间质性肾炎的患者临床治疗结果表明，PGE1能够下调慢性间质性肾炎患者的血中AngⅡ值，改善6-k-PGF1α／TXB2比值，进而改善肾脏血液供应，对于延缓肾功恶化具有一定的临床意义。     

前列腺素E1和羟苯磺酸钙联合应用对马兜铃酸肾病临床疗效分析

目的观察联合应用前列腺素E1(PGE1,凯时)和羟苯磺酸钙(安多明)对马兜铃酸肾病(AAN)的临床疗效。方法于2003—2005年对中国医科大学附属第一医院的46例慢性AAN患者随机分为对照组20例(PGE1)和治疗组26例(PGE1和羟苯磺酸钙),观察2组治疗前后及组间相关指标的变化。结果治疗后治疗组和对照组患者血肌酐比治疗前明显下降(分别为P<0·01及P<0·05),血红蛋白比治疗前明显升高(分别为P<0·01及P<0·05),治疗组比对照组更明显。结论联合应用PGE1和羟苯磺酸钙可以缓解AAN患者肾功能损伤。     

miR-29对腹膜间皮细胞EMT的作用

目的观察miR-29a对高糖刺激人腹膜细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)导致上皮细胞-间充质细胞转分化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的影响。方法应用高糖刺激HPMCs,建立HPMCs EMT模型,运用Real time PCR检测高糖刺激HPMCs不同浓度及不同时间后上皮细胞标志物E-cadherin及间充质细胞标志物α-SMA和FN信号分子的表达水平及miR-29a表达水平变化。然后用miR-29a inhibitor转染HPMCs下调miR-29a表达,运用Real time PCR检测miR-29a表达水平及EMT相关标志物E-cadherin、α-SMA、FN等信号分子的变化水平。结果 Real time PCR结果显示,不同浓度及不同时间葡萄糖刺激均可使HPMCs的间充质细胞标志物α-SMA(不同浓度:1.5%1.970±0.153比1,F=7.692,P=0.008;2.5%3.291±0.265比1,F=4.479,P0.001;4.25%4.301±0.346比1,F=5.496,P0.001;不同时间:6h 2.161±0.202比1,F=6.563,P=0.001;12h 2.820±0.285比1,F=5.111,P0.001;24h 3.291±0.265比1,F=4.479,P0.001;48h 3.980±0.407比1,F=9.377,P=0.006)、FN(不同浓度:1.5%1.630±0.157比1,F=7.092,P=0.002;2.5%2.910±0.199比1,F=4.000,P0.001;4.25%3.601±0.301比1,F=5.575,P0.001;不同时间:6h 1.761±0.172比1,F=7.144,P=0.002;12h 2.390±0.170比1,F=4.499,P0.001;24h 2.910±0.199比1,F=4.000,P0.001;48h 3.601±0.300比1,F=4.570,P0.001)表达逐渐增加,上皮细胞标志物E-cadherin(不同浓度:1.5%0.693±0.065比1,F=4.665,P=0.001;2.5%0.452±0.045比1,F=4.994,P0.001;4.25%0.302±0.030比1,F=4.000,P0.001;不同时间:6h 0.802±0.084比1,F=4.000,P=0.012;12h 0.630±0.070比1,F=7.030,P=0.001;24h 0.452±0.045比1,F=4.994,P0.001;48h 0.290±0.030比1,F=4.000,P0.001)表达逐渐减少,提示HPMCs发生EMT改变。并且随着葡萄糖浓度升高及作用时间延长,miR-29a(不同浓度:1.5%1.452±0.147比1,F=13.411,P=0.001;2.5%3.120±0.320比1,F=10.372,P0.001;4.25%4.130±0.368比1,F=12.497,P0.001;不同时间:6h 1.330±0.114比1,F=5.788,P=0.001;12h2.310±0.173比1,F=5.546,P0.001;24h 3.100±0.236比1,F=10.372,P0.001;48h 3.310±0.211比1,F=4.929,P0.001)表达逐渐升高。Real time PCR结果表明,与高糖组相比,应用miR-29a inhibitor转染HPMCs后,α-SMA(1.871±0.206比3.291±0.265,F=0.104,P=0.002)、FN(1.782±0.156比2.910±0.199,F=0.091,P=0.002)表达减少,E-cadherin(0.873±0.085比0.452±0.045,F=0.760,P=0.002)表达升高。结论高糖以浓度依赖及时间依赖的方式诱导EMT,并且EMT与miR-29a表达正相关。应用miR-29a inhibitor下调miR-29a表达能够部分逆转HPMCs EMT的发生。