己糖激酶在原代培养腹膜间皮细胞的表达

目的 :探讨大鼠腹膜间皮细胞 (peritonealmesothelialcell,PMC)的原代培养方法及其己糖激酶 (hexoki nase ,HK)的表达。方法 :胰蛋白酶 EDTA消化法进行PMC的分离、培养 ,6 磷酸葡萄糖脱氢酶 (G6PDH)偶联比色法检测其HK总活性。结果 :PMC的原代及传代细胞 5～ 8d即可达到融合 ,其HK的基础活性为 (4.80± 0 .39)U/g蛋白。结论 :改良的胰蛋白酶消化法是进行PMC原代培养的一种可靠的实验方法。PMC有较强的HK活性 ,参与了腹膜透析时对葡萄糖吸收和利用方面的调节 ,可能对透析超滤有较大的影响     

西咪替丁引起的急性肾功能衰竭

西咪替丁引起的急性肾功能衰竭中国医科大学附属第一医院马健飞周希静，沈阳１１０００１西咪替丁（Ｃｉｍｅｔｉｄｉｎｅ），是一种组胺Ｈ２受体拮抗剂，可与组胺竞争Ｈ２受体从而消除组胺所致胃酸分泌作用。自１９７６年以来，西咪替丁广泛应用于临床，治疗消化性溃疡，...     

氧化应激及丝裂原活化蛋白激酶在醛固酮加盐诱导肾脏损害中的作用

目的 探讨氧化应激与丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs)在醛固酮加盐诱导肾脏损伤中的作用。 方法 SD大鼠随机分为以下5组: ⑴ 0.5%乙醇作为对照组； ⑵ 1%氯化钠+0.5%乙醇（氯化钠组）； ⑶ 1%氯化钠+醛固酮+0.5%乙醇（醛固酮组）；⑷ 1%氯化钠+醛固酮+0.5%乙醇+依普利酮（依普利酮组），⑸ 1%氯化钠+醛固酮+0.5%乙醇+超氧化物歧化酶模拟物tempol（tempol组）。实时定量PCR检测肾皮质NADPH氧化酶亚基p22phox、Nox-4 和 gp91phox mRNA水平。Western印迹检测肾皮质磷酸化ERK1/2、JNK及ERK5蛋白表达。 结果 与氯化钠组大鼠相比，醛固酮组大鼠的血压[（165±5）比（118±3） mm Hg]及尿蛋白量（24 h） [(101.0±24.0) 比 (9.1±3.0) mg]显著增高(P均 < 0.05)；肾皮质脂类过氧化反应产物（TBARS）水平明显升高[(0.23±0.02) 比 (0.09±0.01) nmol/mg 蛋白，P < 0.05]；肾皮质NADPH氧化酶亚基p22phox、Nox-4和 gp91phox mRNA表达显著升高[分别为氯化钠组的(2.3±0.2)、(4.3±0.8)和(3.0±0.3)倍，P < 0.05]；肾皮质ERK1/2、JNK与ERK5活性显著增高[分别为氯化钠组的(3.3±0.3)、(2.3±0.3)和(3.0±0.2)倍，P < 0.05]。依普利酮或tempol明显降低醛固组大鼠的血压、尿蛋白量（24 h） [依普利酮组和tempol组分别为(10.0±2.0)、(9.3±2.0) mg]以及肾皮质TBARS水平[依普利酮组和tempol组分别为(0.08±0.01)和(0.11±0.03) nmol/mg 蛋白] (P < 0.05)；并使肾皮质组织ERK1/2、JNK及ERK5活性降至接近对照组水平。 结论 氧化应激与MAPKs通路激活在醛固酮加盐诱导的肾脏损伤中发挥重要作用。     

细胞毒因子在肾小球疾病中的作用

本实验应用结晶紫染色法，检测了５０例肾小球疾病病人血和尿的细胞毒因子水平及治疗前后该因子的动态变化。结果显示，在活动性肾小球疾病及难治性肾病综合征、尿素症晚期经血液透析治疗的病人，血、尿中该因子水平不同程度增高；而治疗后随疾病的缓解和治愈，细胞毒因子水平逐渐下降至恢复正常。该结果提示：细胞毒因子在肾小球疾病的发病中具有明显的致病作用，与肾损伤密切相关；可根据该因子的动态变化，判断疾病的发作与缓解，     

3-磷酸甘油醛脱氢酶的修饰蛋白减轻急性肾小管坏死自由基损伤的研究

目的通过分离、纯化、鉴定及蛋白质氨基酸测序3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PD)修饰蛋白(MP),观察庆大霉素诱发大鼠急性肾小管坏死(ATN)时,MP抗自由基损伤及对肾小管上皮细胞的修复作用。方法采用Western印迹法及间接免疫荧光检测等方法对MP进行鉴定分析。纯化的MP以氨基酸自动分析仪测定氨基酸序列。将SD雄性大鼠随机分成正常对照组(腹膜内注射0.9%氯化钠溶液2 mL/d×7 d 0.9%氯化钠溶液2 mL/d×14 d)、阴性对照组(腹膜内注射庆大霉素140 mg·kg~(-1)·d~(-1)×7 d 0.9%氯化钠溶液2 mL/d×14 d)、阳性对照组(腹膜内注射庆大霉素140 mg·kg~(-1)·d~(-1)×7 d 表皮生长因子20μg·kg~(-1)·d~(-1)×14 d)及实验组(腹膜内注射庆大霉素140 mg·kg~(-1)·d~(-1)×7 d MP 250μg·kg~(-1)·d~(-1)×14 d)。应用MP观察7和14 d的ATN大鼠模型血清及肾组织中脂质过氧化物(LPO)、还原型谷光苷肽(GSH)及一氧化氮(NO)水平的动态变化。通过光学显微镜、电子显微镜及免疫组织化学等形态学方法,观察MP修复ATN时大鼠肾小管上皮细胞的组织形态学及细胞间黏附因子-1(ICAM-1)表达的变化。同时测定血肌酐(SCr)水平。结果间接免疫荧光法证实,MP位于细胞质内,且钾浓度为3.2 mmol/L条件下的荧光强度明显强于钾浓度为5.4 mmol/L时。MP由25个氨基酸残基组成。实验组的血清及肾皮质匀浆中LPO、NO水平均较阴性对照组明显下降(P值均<0.01),GSH明显上升(P值均<0.01)。MP组肾脏病理改变比模型组明显减轻,同时SCr下降(P<0.01);实验组的ICAM-1表达较阴性对照组下调。结论自由基积极参与ATN肾小管上皮细胞损伤,MP能够抑制ATN大鼠血清及肾组织中LPO、NO水平的升高及GSH水平的下降。MP具有抗自由基损伤及修复肾小管上皮细胞的作用。     

脂多糖对大鼠腹膜间皮细胞白细胞介素15、6及丙二醛表达的影响

目的研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal me-sothelial cells,RPMC)白细胞介素15(interleukin-15,IL-15)、IL-6及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的影响。方法胰蛋白酶法行RPMC的原代培养和传代,经鉴定第3代用于试验。分组:①正常对照组;②LPS组:不同浓度LPS组(1、10、100mg/L)分别作用6h和12h;③不同时间组:10mg/L LPS分别作用于RPMC3、6、12、24h。实时定量PCR法测IL-15mRNA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中IL-15和IL-6的表达;硫代巴比妥法测MDA。结果 LPS可刺激RPMC的IL-15mRNA及蛋白的表达增高且在12h内呈时间剂量依赖性(P<0.05);LPS诱导RPMC IL-6的蛋白表达增高(P<0.05);LPS诱导RPMC MDA的含量表达增高且呈浓度依赖(P<0.05)。结论 IL-15作为炎症因子参与了腹膜透析相关性腹膜炎的病理过程。LPS可上调RPMC IL-15、IL-6和MDA的表达,导致腹膜炎症及氧化应激。     

糖尿病肾病早期尿Ⅳ型胶原检测的意义

我们采用ELISA法检测糖尿病肾病(DN)患者尿(Col Ⅳ)水平,并与24 h尿白蛋白排泄率(UAE)比较,以探讨尿ColⅣ检测在DN早期肾损害中的临床诊断价值。     

碱性成纤维细胞生长因子在慢性间质性肾炎中的表达及意义

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在慢性间质性肾炎(CIN)患者肾组织中的表达及意义。方法2001-022002-12对中国医科大学附属第一医院的30例慢性间质性肾炎患者及5例正常人采用免疫组织化学SP法检测肾组织中bFGF的表达,并采用图像分析技术测定bFGF阳性表达部分的平均灰度值、平均光密度值及其与整个视野面积的比值,所得数据进行统计学比较。结果慢性间质性肾炎患者肾间质中bFGF表达明显增强,其平均灰度值、平均光密度值及阳性表达面积较正常对照组差异有显著性。结论bFGF能够促进慢性间质性肾炎患者肾间质成纤维细胞及单核细胞增生,从而导致肾间质纤维化。     

前列腺素E1加用皮质激素治疗慢性间质性肾炎的疗效观察

为观察前列腺素E1(PGE1)、强地松，对慢性间质性肾炎(CIN)的治疗作用，我们选择50例(CIN)患者，分别给予强的松、PGE1、强的松 PGE1，凯时，凯时 强的松治疗，检测用药前后的血肌酐、血色素水平，结果多数治疗组血肌酐明显下降，血色素明显上升，提示外源性PGE1和皮质激素可以延缓CIN进入终末期肾袁，保护残余肾功能。     

姜黄素对急性腹膜炎大鼠腹膜Toll样受体2和6表达的影响

Toll样受体(TLR)家族是重要的膜受体家族,由TLR介导的天然免疫反应是机体对感染因素入侵的第1道防线[1].TLR2和T186受体在表皮葡萄球菌诱发的急性腹膜炎中的相关性研究目前还未见报道.姜黄素的药理作用十分广泛,包括抗炎、抗肿瘤、免疫调节等.我们研究TLR2和TLR6在由表皮葡萄球菌诱发的急性腹膜炎中的表达情况以及姜黄素是否会在此过程影响TLR2和TLR6受体的表达.