钙调素－环核苷酸磷酸二酯酶测定体系的建立

用热处理，ＤＥＡＥ－ＳｃｐｈａｄｅｘＡ－２５层折，电泳和电渗析等方法，从牛睾丸组织中分离和纯化钙调素（ＣａＭ）；用（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀和ＤＥＡＥ－ｃｃｌｌｕｌｏｓｅ层析等方法，从牛心肌中分离和纯化ＣａＭ依赖环核苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ），从而建立了ＣａＭ－ＰＤＥ测定体系。这对筛选ＣａＭ的拮抗剂和激活剂提供快速可靠的研究方法。     

许旺细胞源运动神经营养因子单克隆抗体的制备

目的获得针对许旺细胞源神经营养因子（SDNF）的单克隆抗体。方法SDNF免疫Balb／c小鼠，取其脾细胞与同系小鼠SP2／O—Ag14骨髓瘤细胞按1：5比例进行融合，间接ELISA法筛选阳性克隆，有限稀释法进行克隆化培养，制备腹水抗体。结果获得4株能稳定分泌抗体的细胞株6D3、B8、C9E9、A6C6，效价为1：5120。结论所获得的4株杂交瘤细胞株均有较强稳定分泌抗BDNF单克隆抗体的能力，这为进一步的研究打下了基础。     

雪旺细胞无血清条件培养液中的神经营养蛋白活性

目的 :进一步探测雪旺细胞无血清条件培养液中神经营养蛋白活性。方法 :收集成年大鼠坐骨神经雪旺细胞无血清条件培养液 (Schwanncellserum freecondionedmedium ,SC SFCM ) ,通过PM1 0超滤获取 >1 0kD浓缩液 ,再经Disc PAGE分离和Biotrap电洗脱 ,从SC SFCM中分离出A、B、C、D四组蛋白带 ,选择其最佳活性浓度 ,四组蛋白带按照 7种不同组合加入脊髓前角神经元 (SAHN)培养液中 ,通过MTT法进行神经营养活性检测。结果 :含D蛋白带的各组 ,其OD值均显著高于对照组 (P <0 .0 1 ) ,而不含D蛋白带的其它各组 ,其OD值与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :来自于SC SFCM中的D蛋白带具有促进SAHN体外存活的神经营养活性     

多囊卵巢综合征患者脂肪组织TNFR2的表达及其意义

目的研究多囊卵巢综合征(PCOS)患者脂肪组织肿瘤坏死因子受体II(TNFR2)mRNA的表达,探讨PCOS患者发生胰岛素抵抗(IR)的分子生物学机制。方法用RTPCR技术,半定量检测PCOS及其对照组脂肪组织TNFR2mRNA的表达。结果TNFR2mRNA的表达在PCOS肥胖组(0.90±0.12)和PCOS非肥胖组(0.62±0.14)均显著高于非肥胖对照组(0.50±0.15),在PCOS肥胖组升高更为明显(P<0.001),PCOS肥胖组与肥胖对照组(0.88±0.14)差异无显著性(P>0.05)。结论PCOS脂肪组织TNFR2mRNA的表达率升高,可能与PCOS患者发生IR、肥胖有关。     

宫颈粘液蛋白质电泳分析在宫颈癌分子流行病学研究中的意义

宫颈癌是严重危害妇女健康的常见病。以35～55岁为多见，宫颈癌的早期诊断和早期治疗是提高生存率的关键．国内外学者对如何早期诊断宫颈癌均进行了大量研究，但采用宫颈粘液作蛋白电泳分析，从而诊断宫颈癌尚为数不多。我们于1991年12月到1992年4月在广州地区中山医科大学附属肿瘤医院门诊病人中随机抽取宫颈癌患者7例，非癌织8例进行宫颈粘液的蛋白质电泳分析，现将结果报告如下。材料与方法一、宫颈粘液采集法：以窥阴器插入阴道，暴露宫颈，用于棉球拭净宫颈外口周围分泌物，然后注入10ml生理盐水冲洗后用滴泵吸出，离心3000r／min，取…     

阿尔茨海默病血清蛋白质组学研究

目的对6例阿尔茨海默病（AD）患者血清二向电泳前预处理，去除高丰度蛋白，增加低丰度蛋白的检测效果。方法采用去除白蛋白球蛋白试剂盒对受试者血清进行预处理．然后二向电泳，结合质谱仪分析来鉴定兴趣蛋白质。结果通过对比AD组和对照组二向电泳图．得到24个差异蛋白质点，对这些差异蛋白点进行质谱仪分析，发现6例AD病人血清触珠蛋白表达增高，而只有3例AD病人血清转甲状腺素蛋白㈣表达降低。结论对AD血清二向电泳前预处理可以提高低丰度蛋白的检测效果，提示该方法可很好地用于鉴别AD血清生物标记。     

脑卒中患者红细胞衰老因素的探讨

本实验对27例脑梗塞、18例脑出血以及42例同年龄健康对照组测定红细胞丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)。结果表明在脑卒中组和对照组之间MDA含量有显著性差异,以及老年组MDA含量又高于老年前期组。因而认为红细胞的这种与年龄有关的脂质过氧化作用是影响卒中发生与转归的伴随因素,值得进一步探讨。此外,本实验未显示SOD含量的显著性差异,认为尚需对实验方法进一步改进。     

吗啡备用根大鼠脊髓组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定

我室以往的研究表明 ,吗啡作用的部分去传入大鼠脊髓组织提取液中 ,大于 10 k D组份具有神经营养活性作用 ,但尚不知道是哪些分子量的蛋白质具有神经营养活性。为了寻找这些物质 ,本研究用 Sephacryl S- 2 0 0凝胶层析、高效液相色谱 (HPL C)、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)和组织培养等技术和方法 ,进一步分离纯化吗啡备用根大鼠部分去传入的脊髓组织提取液 ,以期获得某些神经营养活性物质 ,为吗啡促进脊髓可塑性变化的分子基础提供新资料。SD大鼠 40只 ,分为 4组 :A组为正常对照大鼠组 ;B组为备用根手术组 ,即将大鼠一侧 L…     

钙调素－环核苷酸磷酸二酯酶测定体系的建立

用热处理，ＤＥＡＥ－ＳｃｐｈａｄｅｘＡ－２５层折，电泳和电渗析等方法，从牛睾丸组织中分离和纯化钙调素（ＣａＭ）；用（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀和ＤＥＡＥ－ｃｃｌｌｕｌｏｓｅ层析等方法，从牛心肌中分离和纯化ＣａＭ依赖环核苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ），从而建立了ＣａＭ－ＰＤＥ测定体系。这对筛选ＣａＭ的拮抗剂和激活剂提供快速可靠的研究方法。     

TNFα对体外培养的人脂肪细胞葡萄糖摄取和IRS-1酪氨酸磷酸化的影响

[目的]探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取和胰岛素受体底物1(IRS-1)酪氨酸磷酸化的影响,为多囊卵巢综合征(PCOS)的胰岛素抵抗(IR)病因学研究提供新的实验依据.[方法]脂肪细胞葡萄糖摄取的测定采用3H标脱氧右旋葡萄糖(2-[3H]DG)吸收法,IRS-1酪氨酸磷酸化的检测采用免疫沉淀、Western印迹和增强化学发光蛋白免疫印迹法及图像分析.[结果]①胰岛素(100nmol/L)作用下,TNF α刺激浓度分别为0、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL时,脂肪细胞2-[3H]DG的摄取分别为(652±203)U,(609±172)U,(511±135)U和(404±168)U,当TNFα刺激浓度达20 ng/mL时,脂肪细胞对葡萄糖摄取的降低有显著性差异(P＜0.05).②胰岛素(100nmol/L)刺激下IRS-1的酪氨酸磷酸化在TNFα(5 ng/mL)作用时(74.50%±16.86%)较无TNFα作用(94.00%±14.70%)有所降低,但无显著性差异;当TNFα刺激浓度分别为10 ng/mL(31.16%±10.44%)和20 ng/mL(27.33%±9.63%)时,胰岛素(100nmol/L)刺激后IRS-1的酪氨酸磷酸化明显降低(P＜0.001).[结论]①TNFα刺激浓度的升高可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取.②TNFα可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的IRS-1的酪氨酸磷酸化,并存在一定的量效关系,可能阻碍了胰岛素的受体后信号传导并与IR有关.