TNF琢对体外培养的人脂肪细胞葡萄糖摄取和IRS-1酪氨酸磷酸化的影响

【目的】探讨肿瘤坏死因子琢(TNF琢)对体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取和胰岛素受体底物1(IRS-1)酪氨酸磷酸化的影响,为多囊卵巢综合征(PCOS)的胰岛素抵抗(IR)病因学研究提供新的实验依据。【方法】脂肪细胞葡萄糖摄取的测定采用3H标脱氧右旋葡萄糖(2-[3H]DG)吸收法,IRS-1酪氨酸磷酸化的检测采用免疫沉淀、Western印迹和增强化学发光蛋白免疫印迹法及图像分析。【结果】①胰岛素(100nmol/L)作用下,TNF琢刺激浓度分别为0、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL时,脂肪细胞2-[3H]DG的摄取分别为(652±203)U,(609±172)U,(511±135)U和(404±168)U,当TNF琢刺激浓度达20ng/mL时,脂肪细胞对葡萄糖摄取的降低有显著性差异(P<0.05)。②胰岛素(100nmol/L)刺激下IRS-1的酪氨酸磷酸化在TNF琢(5ng/mL)作用时(74.50%±16.86%)较无TNF琢作用(94.00%±14.70%)有所降低,但无显著性差异;当TNF琢刺激浓度分别为10ng/mL(31.16%±10.44%)和20ng/mL(27.33%±9.63%)时,胰岛素(100nmol/L)刺激后IRS-1的酪氨酸磷酸化明显降低(P<0.001)。【结论】①TNF琢刺激浓度的升高可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取。②TNF琢可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的IRS-1的酪氨酸磷酸化,并存在一定的量效关系,可能阻碍了胰     

雪旺细胞分泌的＞10kD蛋白分子支持脊髓前角神经元生存的初步报告

目的：探讨成年大鼠坐骨神经瓦勒变性期雪旺细胞（SC）促进周围神经再生的物质基础。方法：将215mlSC无血清条件培养液经PM10超滤浓缩器（分子筛）分离，获得分子量＜10kD（1dalton＝0．9921u）蛋白质滤过液及＞10kD蛋白质浓缩液，分别加入24孔、96孔培养板内脊髓前角神经元（SAHN）的培养液中，用倒置显微镜及MTT微量自动比色法进行神经营养活性观察。结果：在＞10kD蛋白分子影响下，SAHN在体外培养48小时仍存活良好，并伴有少部分SAHN长出短突起。MTT微量自动比色法进一步显示，＞10kD蛋白分子神经营养活性在统计学上显著高于＜10kD蛋白分子。结论：成年大鼠瓦勒变性期SC在无血清培养条件下仍能合成与分泌神经营养因子，其活性存在于＞10kD蛋白分子中。     

组织工程心脏瓣叶体外研究瓣叶基质的检测

目的　初步探讨组织工程心脏瓣叶体外生成基质的检测。方法　杂种猪 4只 ,取主动脉。分离并培养、扩增内皮与成纤维、平滑肌细胞 ,将细胞种植在湿化处理后的支架材料上 (聚羟基烷酸酯 ,PHA)。以首次种植成纤维、平滑肌细胞为起点 ,培养 2 8d ,使用氯胺 T法检测样本的羟脯氨酸含量 ,并行扫描电镜检测。结果　氯胺 T法检测羟脯氨酸 ,方法简便 ,准确性高 ,经测定组织工程心脏瓣叶羟脯氨酸含量为 (10 93± 2 89) μg/g(材料重量 )。扫描电镜检测显示细胞表面可见基质的形成。结论　氯胺 T法可精确测定体外培养的组织工程心脏瓣叶胶原含量 ,结合扫描电镜可有效检测基质的生成     

雪旺细胞无血清条件培养液中的神经营养蛋白活性

目的进一步探测雪旺细胞无血清条件培养液中神经营养蛋白活性.方法收集成年大鼠坐骨神经雪旺细胞无血清条件培养液(Schwann cell serum-free condioned medium ,SC-SFCM ),通过PM10超滤获取＞10Kd浓缩液,再经Disc-PAGE分离和Biotrap电洗脱,从SC-SFCM中分离出A、B、C、D四组蛋白带, 选择其最佳活性浓度,四组蛋白带按照7种不同组合加入脊髓前角神经元(SAHN)培养液中,通过MTT法进行神经营养活性检测.结果含D蛋白带的各组,其OD值均显著高于对照组﹙p＜0.01),而不含D蛋白带的其它各组,其OD值与对照组比较无显著性差异(p＞0.05).结论来自于SC-SFCM中的D蛋白带具有明显促进SAHN体外存活的神经营养活性.     

狼毒大戟的化学成分研究(Ⅱ)

狼毒大戟Euphorbia fischeriana Steud．系大戟科植物，近年临床多用于治疗肿瘤、皮肤病和结核病等。作者对狼毒大戟的化学成分进行了系统研究。本研究从狼毒大戟石油醚和乙醚萃取物中分离出3个化合物：3，3′-二乙酰基-4，4′-二甲氧基2，2′，6，6′-四羟基二苯基甲烷(Ⅰ)、富马酸(Ⅱ)和β-     

触珠蛋白可能是阿尔茨海默病患者血清生物标记

阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）是老年人群中最常见的变性性痴呆.目前,AD尚无可靠的死前诊断指标.蛋白质组学（proteomics）作为研究蛋白质谱和蛋白生物功能的新学科,在神经变性疾病研究中已成为一个非常有价值的方法.我们于2004年11月至2005年5月应用蛋白组学方法对AD患者血清蛋白进行研究,以期发现对AD诊断有价值的生物学指标.     

雪旺细胞胞浆神经营养蛋白促进周围神经再生的实验

目的 研究雪旺细胞胞头神经营养蛋白（ＳＤＮＦ）对周围神经再生的影响。方法 选用９０只成年ＳＤ大鼠,在右侧坐骨神经造成长１０ｍｍ缺损,用植入血管的变性骨骼肌桥接神经缺损。分成三组,每组３０只。分别将分子量为２６、５８ｋｕ的ＳＤＮＦ和生理盐水（对照组）于术中、术后７及１４天注入肌桥的近段、中段和远段。术后均观察６个月。术后１５天开始,每隔１５天走足印一次,测定坐骨神经功能指数。术后１、３、６个月,每组     

雪旺细胞浆神经营养蛋白高效液相分离纯化及其生物活性研究

目的　分离纯化雪旺细胞浆神经营养蛋白并研究其生物活性。方法　取 30 0只出生后 1～ 3天SD大鼠双侧坐骨神经 ,纯化培养 ,收集雪旺细胞 ,超声粉碎 ,超速离心 ,不同孔径分子筛滤膜 (PM10、30、5 0 )超滤浓缩 ,收集分子量 10～ 30 ku,30～ 5 0 ku和 >5 0 ku三种组份胞浆蛋白浓缩液 ,分别加入体外无血清培养的 E14SD胎鼠脊髓运动神经元培养液中 ,用 MTT酶标法检测证实 10～ 30 ku和 >5 0 ku两组份蛋白有神经营养活性。再通过Diol- 15 0高效液相分子层析进一步从雪旺细胞胞浆中纯化分离出分子量为 2 6 ku和 5 8ku两种胞浆蛋白 ,并对其神经生物活性进行研究。结果　 2 6 ku和 5 8ku雪旺细胞胞浆蛋白能维持体外无血清培养的脊髓运动神经元存活 ,其最佳生物活性浓度为 2 0 ng/孔。结论　雪旺细胞胞浆内含有分子量为 2 6 ku和 5 8ku的运动神经营养蛋白     

六种中草药有效成分对钙调素依赖环核苷酸磷酸二酯酶的作用

用正交设计观察了6种中草药有效成分和三氟啦嗪（TFP）对钙调素依赖环核苷酸磷酸二酯酶（CaM-PDE）激活活性的影响，结果表明：a）两面针碱（Nit）、槲皮素（Que）和TFP对CaM－PDE激活活性具有明显抑制作用（P＜0．01），其抑制强度：Qne＞TFP＞Nit；小檗碱（Ber）、麻黄碱（Eph）和鱼腥草素（Hou）对CaM－PDE无明显作用（P＞0．05），青藤碱（Sin）对酶的作用可疑；c）Qne与TFP、Nit与TFP之间有协同作用。结果提示Nit和Que可能是CaM拮抗剂，两者的作用位点似乎不同于TFP。     

多囊卵巢综合征患者血浆TNFα、sTNFR2水平与胰岛素抵抗的相关性

[目的]探讨血浆肿瘤坏死因子α(TNFα)、可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ(sTNFR2)与多囊卵巢综合征(PCOS)患者胰岛素抵抗和血清雄激素(T)水平的相互关系.[方法]PCOS患者和对照者根据体重指数(BMI)分为PCOS肥胖组(21例)、PCOS非肥胖组(25例)、肥胖对照组和非肥胖对照组,各25例,采用ELISA法测定血浆TNFα、sTNFR2水平,化学发光法测定血清性激素6项,已糖激酶终点法测定血清葡萄糖浓度,时间分辨免疫分析法测定血清胰岛素浓度,按Cederholm的方法计算胰岛素敏感指数(ISI).[结果]①PCOS肥胖组血浆TNFα和sTNFR2水平及PCOS非肥胖组血浆sTNFR2水平均较非肥胖对照组明显升高,且以肥胖者升高更为明显.②血浆TNFα与其ISI在PCOS肥胖组和肥胖对照组均呈负相关(P＜0.05).③血浆sTNFR2与其ISI在PCOS肥胖组、PCOS非肥胖组和肥胖对照组均呈负相关(P＜0.05).[结论]PCOS肥胖组血浆TNFα和sTNFR2水平及PCOS非肥胖组血浆sTNFR2水平均较非肥胖对照组明显升高,且与其ISI呈负相关,提示二者可能与PCOS患者发生胰岛素抵抗有关.