叉头转录因子1质粒标准品的构建

背景：研究表明叉头转录因子1是一种新的2型糖尿病易感基因,但2型糖尿病患者与健康人的叉头转录因子1基因在转录水平上差异性的研究不多。由于还没有商品化叉头转录因子1的质粒标准品,因此有必要构建其标准品。 目的：构建应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测叉头转录因子1 mRNA的质粒标准品。 设计、时间及地点：单一样本重复实验,于2007-11/2008-03在苏州大学附属第一医院检验科实验室完成。 材料：SYBR ExScript TM反转录-聚合酶链反应Kit试剂盒,SYBR Premix Ex TaqTM试剂盒,凝胶回收纯化DNA试剂盒,质粒DNA小量纯化试剂盒,PMD18-T Vector试剂盒等。 方法：从健康志愿者血标本中提取总RNA,反转录合成cDNA,以cDNA为模板应用聚合酶链反应扩增出目的片段,对其回收纯化连接到PMD18-T载体及转化JM109,阳性克隆经测序分析,确认重组质粒正确。抽提重组质粒,用紫外分光光度仪测定其浓度,再根据公式换算成拷贝浓度,最后稀释成梯度标准品。 主要观察指标：重组质粒聚合酶链反应和基因测序结果,标准品标准曲线的相关系数及标准品的重复性。 结果：成功构建了叉头转录因子1质粒标准品,通过聚合酶链反应及基因测序鉴定其目的片段已成功插入载体。各稀释度的标准品经荧光定量-聚合酶链反应扩增后,其循环阈值与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系,线性范围是2.39×(105~1012) copies/mL。各稀释度标准品的批内重复性好,其变异系数范围为0.29%~1.16%。 结论：实验成功构建了具有较好灵敏度和重复性的叉头转录因子1质粒标准品。     

结直肠癌Dukes各期局部免疫功能变化研究

采用ＡｐＡＡＰ法、ＥＬＩＳＡ和ＲＩＡ法检测４５例结直肠癌（ＣＲＣ）患者外周血和局部动静脉血Ｔ细胞亚群（ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋）、ｓＩＬ－２Ｒ、ＴＮＦα和ＰＧＥ２，结果发现，局部动静脉血中ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值随Ｄｕｋｅｓ分期进展而下降；ｓＩＬ－２Ｒ和ＰＧＥ２浓度则随Ｄｕｋｅｓ分期进展而升高，各期差异显著，局部静脉血ＰＧＥ２浓度显著高于局部动脉血；ＴＮＦα水平也随Ｄｕｋｅｓ分期不同而变化，Ｄｕｋ     

表皮葡萄球菌细胞间脂多糖黏附素的表达与耐药特征的相关性

目的：探讨表皮葡萄球菌细胞间脂多糖黏附素（polysacchatide intercellular adhesion,PIA）的表达与细菌耐药特征的相关性.方法：收集分离临床标本中的表皮葡萄球菌,通过使用刚果红琼脂平皿检测PIA,考察该菌生物膜的形成能力;按照结果分为PIA阳性组和阴性组,选取八种抗生素,应用K-B琼脂扩散法进行药物敏感试验并计算耐药率,同时探讨两者之间的关系.结果：临床标本中分离到的表皮葡萄球菌对青霉素G有极高的耐药率（100%）,对甲氧西林、红霉素、克林霉素、环丙沙星有较高的耐药率（40.5%～96.8%）.对利福平耐药率较低（2.4%～3.1%）,而对万古霉素和替考拉宁耐药率极低（0%）;除对利福平外,PIAF阳性和阴性菌株对其他四组抗生素的耐药率均有显著性差异（P＜0.05）.结论：生物膜形成能力强的表皮葡萄球菌通常对抗生素的耐药性更高（对利福平除外）,推荐使用利福平作为治疗和预防治疗植入物生物膜感染的联合用药.     

血清抗HP—IgG试验及临床意义探讨

经内窥及组织学检查确诊的胃，十二指肠溃疡，慢性胃炎等７１例（Ａ组）与未经内窥镜及组织学检查的消化道相关疾病４３例（Ｂ组），均采用血清酶联免疫吸附试验检测血清幽门螺杆菌ＩｇＧ特异抗体，结果Ａ组ＨＰ－ＩｇＧ特异抗体阳总检出率为８１．４３％，其中十二指肠溃疡和十二指肠疡为病人均达１００％，胃溃疡患者为７５％，慢性胃炎为８３．３％，Ｂ组总检出率为３２．５５％，Ａ组血清ＨＰ－ＩｇＧ抗体检出与胃镜及组织学检查     

血小板计数与膳食的关系

血小板参与体内的凝血过程,血小板数量的减少将会影响凝血过程,引起血小板减少性紫癜。Ruan等调查了苏州、成都、哈尔滨和Kobe(日本) 4城市居民的血小板计数(PLT)发现,苏州和成都市居民有近30 %的人PLT低于10 0×10 9/L ,而哈尔滨和Kobe市则没有人低于10 0×10 9/L〔1〕。一些外地人在苏州滞留几天后出现血小板减少,返回原籍后1周内恢复正常。由于血小板的平均寿命较短,短期作用即可影响血小板数量。为了解是否因膳食差异引起血小板计数的变化,我们进行了PLT与膳食关系的研究。1　对象与方法1 1　调查对象　2 0 0 2年5月从体检(第1次…     

脑梗死患者BDNF水平变化及临床意义

目的评估血清脑源性神经营养因子(BDNF)在脑梗死患者中的水平变化及临床意义。方法收集96例脑梗死患者及40例健康体检者(健康对照组)的外周血标本,采用ELISA法检测血清BDNF水平,并检测其红细胞分布宽度(RDW)、血清同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、纤维蛋白原(Fbg)及D-二聚体(D-D)。结果脑梗死患者血清BDNF水平明显低于健康对照组,差异有统计学意义(P0.05);脑梗死患者Hcy、hs-CRP、RDW、Fbg及D-D均高于健康对照组,差异有统计学意义(P0.05)。BDNF、Hcy、hs-CRP、RDW、Fbg及D-D诊断脑梗死的受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积分别为0.828、0.699、0.799、0.644、0.649、0.702。结论血清BDNF水平在脑梗死患者的诊断中有一定的临床意义,其诊断效能高于Hcy、hsCRP、RDW、Fbg及D-D,血清BDNF水平降低可能是脑梗死发病的危险因子之一。     

叉头转录因子1质粒标准品的构建

背景:研究表明叉头转录因子1是一种新的2型糖尿病易感基因,但2型糖尿病患者与健康人的叉头转录因子1基因在转录水平上差异性的研究不多.由于还没有商品化叉头转录因子1的质粒标准品,因此有必要构建其标准品.目的:构建应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测叉头转录因子1 mRNA的质粒标准品.设计、时间及地点:单一样本重复实验,于2007-1 1/2008-03在苏州大学附属第一医院检验科实验室完成.材料:SYBR ExScriptTM反转录-聚合酶链反应Kit试剂盒,SYBR Premix Ex TaqTM试剂盒,凝胶回收纯化DNA试剂盒,质粒DNA小量纯化试剂盒,PMDl8-T Vector试刺盒等.方法:从健康志愿者血标本中提取总RNA,反转录合成cDNA,以cDNA为模板应用聚合酶链反应扩增出目的片段,对其回收纯化连接到PMD18-T载体及转化JMl09,阳性克隆经测序分析,确认重组质粒正确.抽提重组质粒,用紫外分光光度仪测定其浓度,再根据公式换算成拷贝浓度,最后稀释成梯度标准品.主要观察指标:重组质粒聚合酶链反应和基因测序结果,标准品标准曲线的相关系数及标准品的重复性.结果:成功构建了叉头转录因子1质粒标准品,通过聚合酶链反应及基因测序鉴定其目的片段已成功插入载体.各稀释度的标准品经荧光定量-聚合酶链反应扩增后,其循环阈值与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系,线性范围是2.39×(105-1012)copies/mL.各稀释度标准品的批内重复性好,其变异系数范围为0.29%～1.16%.结论:实验成功构建了具有较好灵敏度和重复性的叉头转录因子1质粒标准品.     

医院血气分析网络化在线质量管理系统的建立及应用

目的探讨医院血气分析检测结果在线智能化质量管理系统的建立及其应用。方法基于GWP(GWP,GEM Web Plus)的分布式局域网,采用数据传输、导出功能,构建全院以检验科为中心的血气分析检测网络化在线控制平台。结果智能化质量管理自动化安全保障(intelligent quality manage auto safety assurance,i QM ASA)确保了每一份检测结果的准确性,GWP为医院提供了统一的血气分析检测数据管理平台。结论 i QM ASA对血气分析仪运行状态以及检测结果的准确性的远程控制和管理将发挥至关重要的作用。     

胃癌患者血清uPA测定及临床意义

目的探讨胃癌血清uPA的变化及其临床意义。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定34例胃癌血清uPA含量。结果胃癌血清uPA含量为5.06±1.45ng/ml,正常对照组(n=8)为1.54±0.26ng/ml,(P＜0.01)。但血清uPA变化与其肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期、病理细胞分化程度均无关联(P＞0.05)。结论血清uPA测定有助于胃癌的诊断。     

2型糖尿病患者血清超敏C反应蛋白与糖尿病肾病相关性分析

目的 探讨超敏C反应蛋白(hs-CRP)与糖尿病肾病(DN)发生、发展的相关性.方法 根据尿微量清蛋白(MAU)定量将90例2型糖尿病患者分为单纯糖尿病组(A组)、早期糖尿病肾病组(B组)和临床糖尿病肾病组(C组),30例本院健康体检者作为对照组,检测所有受试对象的血清hs-CRP、MAU及其他生化指标,将各组间hs-CRP值进行统计学比较,并进行相关分析.结果 糖尿病肾病各组血清hs-CRP水平均明显高于健康对照组,且hs-CRP水平随尿微量清蛋白的升高而升高.hs-CRP与三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、肌酐(Cr)呈正相关.结论 hs-CRP与DN的发生相关,且随着DN进展而逐渐增高,是预测DN进展的一个重要指标.