机会致病寄生原虫的系列研究

本课题包括：①对机会致病寄生虫，包括弓形虫、卡氏肺孢子虫及隐孢子虫动物模型的建立，虫体的分离及提纯；②弓形虫感染的循环抗原（ＣＡ）和抗体（ＩｇＧ、ＩｇＭ），用竞争抑制酶联免疫吸附试验（ＩＥＬＩＳＡ）、金葡菌Ａ蛋白酶联免疫吸附试验（ＳＰＡＥＬＩＳＡ）、直接捕获法酶联免疫吸附试验（ＤＥＬＩＳＡ）进行检测；③用地高辛标记探针及聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测核酸，自由引物ＰＣＲ鉴别弓形虫株以及生物特性；④用流式细胞仪对卡氏肺孢子虫及弓形虫的ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质含量的动力学进行了分析；⑤用激光微束系统对含８个子孢子成熟包囊施行手术，切除４个或２个子孢子后，包囊仍具有感染力。     

广州市天河区流动人口生殖健康现状调查

目的了解广州市天河区流动人口的生殖健康现状。方法采用匿名问卷的形式对广州市天河区1244例15～45岁流动人口的生殖健康知识、态度、行为以及主要生殖健康问题进行横断面调查。结果获取有效问卷1206份。受调查的流动人口平均年龄为29．82岁;文化程度主要是初中及以下（58．1％）;职业以工人、商贸餐饮业和社会服务业为主（80．6％）;流动人口对受孕知识知晓率不高,正确率仅占44．9％,已婚人群正确率远高于未婚人群（P〈0．05）;流动人口对艾滋病3种传播途径回答正确率为56．4％,非传播途径回答正确率为33．5％;已婚人群和未婚人群对计划生育服务政策知晓率分别为69．0％和42．6％（P〈0．05）;已婚人群进行生殖健康咨询的比例高于未婚人群（P〈0．05）;未婚女性和男性在避孕措施上主要选择使用避孕套（分别占75．2％和89．1％）;绝大多数已婚女性（94．0％）和已婚男性（93．9％）采取的前三位避孕措施为宫内节育器、输卵管结扎、避孕套。结论流动妇女对生殖健康相关知识及政策了解不足,自我保健意识薄弱。积极采取有效措施提高流动已婚妇女的生殖健康认知水平是迫切需要解决的问题。     

随机引物聚合酶链反应技术鉴别弓形虫株的研究

本文运用随机引物聚合酶链反应技术鉴别弓形虫株，获得较满意结果。实验根据Ｍ１３噬菌体已知部分核酸序列，自行设计并合成了３条引物，在一定条件下扩增ＲＨ，ＺＳ１、ＺＳ２、ＳＨ－１等４株弓形虫基因组ＤＮＡ，扩增产物经２％琼脂糖凝胶电泳分带。扩增带型显示４株受检的弓形虫株具有株间差异。     

体外受精-胚胎移植术中使用冷冻供精及夫精的临床效果观察

目的 观察比较IVF-ET中使用冷冻供精及夫精的临床效果,了解正常精液经冷冻保存后使用是否影响IVF-ET的效果。方法 回顾本院常规IVF-ET中使用新鲜夫精172周期(夫精组)及采用冷冻供精47个周期(供精组)资料,对两组的精液情况、受精率、卵裂率以及临床妊娠率进行分析比较。结果 冷冻供精组在精子密度、精子总活动率、前向运动精子率3项指标均低于新鲜夫精组(P<0.01),而受精率、卵裂率、临床妊娠率两组比较无显著性差异(P>0.05)。结论 正常精液经冷冻保存后,尽管精液各项参数有一定改变,但对IVF-ET中受精率、卵裂率及临床妊娠率无明显影响。     

弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体的构建及筛选

目的 构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体，建立基因敲除突变株，为进一步探讨SAG3功能和弓形虫侵入宿主细胞机制提供可行的研究方法。方法 用基因克隆方法将SAG31．53kb和2．81kb两个同源序列分别插入TUB5／CAT质粒中，构建置换型打靶载体，氯霉素乙酰转移酶(CAT)抗性基因作为筛选标记，采用电转移转染细胞方法进行基因打靶，建立突变型的弓形虫株，采用PCR、酶切分析和Southern Blot杂交方法筛选鉴定。结果 构建了弓形虫RH株5’SAG3-T15135／CAT-3’SAG3置换型载体，获得了敲除SAG3基因的弓形虫突变株，建立基因敲除突变株，获得了阳性的筛选克隆，经鉴定证明基因打靶结果准确。结论 通过构建基因打靶载体，可有目的地敲除弓形虫膜抗原基因，为进一步研究弓形虫侵入机制，探讨弓形虫病防治提供可行的方法。     

梯度密度离心法与上游法在冷冻精液供精体外受精-胚胎移植术中应用比较

目的观察在使用冷冻精液的供精体外受精-胚胎移植术中采用梯度密度离心法与上游法处理精液后的妊娠率,比较两种精液处理方法对体外受精-胚胎移植术成功率的影响.方法回顾本院常规体外受精-胚胎移植术中使用冷冻供精71个周期,其中上游法35周期,梯度密度离心法36周期的资料,观察经上游法和梯度密度离心法处理后精子密度、精子总活动率、前向运动精子活动率等精液情况和受精率、卵裂率、临床妊娠率.结果梯度密度离心组在精子密度、精子总活动率、前向运动精子活动率3项指标均高于上游组,而受精率、卵裂率、临床妊娠率也是梯度密度离心组较上游组高(P＜0.01).结论在使用冷冻精液的供精体外受精-胚胎移植术中,采用梯度密度离心法处理精液优越于上游法,能获得更高的受精率和妊娠率.     

广东省东源县已婚育龄夫妇地中海贫血发病率及基因型分布现况分析

目的利用国家孕前优生检查技术平台,对广东省东源县已婚育龄夫妇进行地中海贫血(简称地贫)筛查,了解其发病率及基因型分布情况,为地贫的防控提供流行病学依据。方法对2011~2013年我县已婚育龄夫妇开展免费地贫筛查工作,获得相应的平均红细胞容积(mean corpuscular volume,MCV)、平均红细胞血红蛋白(mean corpuscular hemoglobin,MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC)等数据,阳性患者进行α、β地贫基因诊断,对基因诊断阳性者进行遗传咨询和生育指导。结果共筛查已婚育龄夫妇14 334人,地贫筛查阳性1 662例,发病率为11.59%,其中男性916例,MCV、MCH、MCHC均值分别为(69.19±6.44)fl、(19.16±4.70)pg、(258.08±21.02)g/L;女性746例,MCV、MCH、MCHC均值分别为(69.79±4.33)fl、(19.73±4.27)pg、(255.46±34.62)g/L;男、女性地贫发病率比较差异无统计学意义(P0.05)。地贫基因诊断阳性1 163例,其中按基因型分类α地贫674例(57.95%),β地贫378例(32.50%)。结论广东省东源县已婚育龄夫妇地贫发病率较高,其α、β地贫基因型分布的特点符合广东省的基本特点。对育龄人群进行地贫的筛查和基因诊断,为地贫的防控提供重要的参考依据,对提高出生人口素质具有重要意义。     

lncRNA H19调控TGF-β1的表达及对人卵巢颗粒细胞功能的影响

目的探讨多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)颗粒细胞lncRNAH19基因和转化生长因子(transforming growth factor, TGF)-β1之间的关系及对颗粒细胞增殖和凋亡的影响。方法分别以浓度2 μg/L、4 μg/L、10 μg/L TGF-β1处理人类卵巢颗粒细胞株KGN, 采用Q-PCR方法检测H19的表达水平, 分别构建H19过表达质粒pcDNA3.0-H19和 siH19-1617并转染KGN, 采用Western blotting方法检测TGF-β1的表达情况, 采用CCK8法检测颗粒细胞增殖情况, 采用流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡情况。结果加入TGF-β1后, H19的表达量较未处理的KGN细胞的表达量增加, 当TGF-β1浓度≥4 μg/L时H19的表达量显著增多, 差异具有统计学意义(P=0.023);H19过表达后, TGF-β1表达量显著高于转染空质粒的对照组KGN+pcDNA3.0-NC(P=0.017), H19沉默后TGF-β1表达量显著低于对照组KGN+NC(P<0.001)。H19过表...     

荧光定量RT-PCR技术分析人地中海贫血β654珠蛋白基因转基因小鼠mRNA的表达

目的 采用荧光定量RT-PCR技术检测所制作的人地中海贫血β^654珠蛋白基因转基因小鼠模型mRNA的表达情况,评价该技术应用于小鼠mRNA分析的价值.方法 根据GenBank小鼠mRNA序列,设计用于扩增小鼠mRNA的引物和反向探针,构建荧光定量RT-PCR技术.实验分两组,分别对转基因小鼠和正常小鼠中mRNA进行检测.采用SPSS统计软件,分析和比较两组动物中mRNA的表达量及表达的稳定性.结果 所检测的11只转基因阳性小鼠中检测出人β^654珠蛋白基因mRNA和小鼠内源性mRNA;而在33只正常小鼠中只检测到小鼠内源性mRNA.荧光定量RT-PCR技术可检测到105拷贝数的人β^654珠蛋白基因mRNA和115拷贝数的小鼠内源性mRNA.荧光定量RT-PCR技术分别在F1代和F2转基因阳性小鼠中稳定地检测到,表明转基因小鼠mRNA获得稳定表达.结论 所构建的荧光定量RT-PCR技术分析转基因小鼠mRNA表达具有检测定量、敏感、高效快捷的特点,该方法在鉴定和评估转基因小鼠mRNA的表达中稳定性好、定量准确,具有非常重要的应用价值.     

多重荧光定量PCR技术快速诊断唐氏综合征方法的建立及临床应用

目的:建立适合中国广东地区人群特点的唐氏综合征快速产前诊断技术,并评价其临床应用价值。方法:选取21号染色体上杂合度较高的3个短串联重复序列(STR,D21S1411、D21S1412、D21S1270)作为遗传标记,采用多重荧光定量聚合酶链反应(QF-PCR)扩增技术,对广东地区106例无亲缘关系的正常人外周血DNA进行分析,计算这3个STR位标的多态性信息含量(PIC);用该方法对25例唐氏综合征患儿外周血和10例正常孕妇羊水的DNA进行检测,并与染色体核型分析结果进行对照分析。结果:21号染色体上的3个STR(D21S1411、D21S1412、D21S1270)的PIC分别为0.913、0.835、0.856,确立了QF-PCR产前诊断唐氏综合征的方法。对25例唐氏综合征患儿外周血和10例孕妇羊水同时进行QF-PCR检测与染色体核型分析,两种方法均检测到27例唐氏综合征,结果吻合。结论:本研究所选STR位标在中国广东人群中呈现较高的遗传多态性,符合Hardy-W e inberg平衡定律;所构建的QF-PCR技术产前诊断唐氏综合征具有准确、快速、高效等特点,有较高的临床使用价值。