转染IL－2cDNA在膀胱肿瘤细胞表达及其生物学行为的实验研究

作者报道逆转录病毒载体介导的人白细胞介素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ在人源性膀胱肿瘤细胞Ｔ２４中的表达及对其生物学行为的影响。用磷酸钙沉淀法把ＩＬ－２ｃＤＮＡ转入Ｔ２４细胞，经原位杂交、免疫细胞化学和生物学活性测定，证明转染成功并表达有生物活性的ＩＬ－２，观察４０天，其分泌ＩＬ－２的量为８～３２ｕ／ｍｌ／１×１０５细胞／２４小时。转染并表达ＩＬ－２ｃＤＮＡ，对Ｔ２４的生长曲线无明显影响。但在软琼脂中细胞体积减小，裸鼠致瘤力下降     

逆转录病毒转体介导的人IL—2基因在膀胱肿瘤细胞T24中的表达

报道逆转录病毒载体介导的人白细胞介素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ在人源性膀胱肿瘤细胞Ｔ２４中的表述，ＩＬ－２ｃＤＮＡ插入到真核表达载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ中，构建成ＩＬ－２ｃＤＮＡ的表达载体ｐＤＯＲＩＬ２，磷酸钙沉淀法将其导入Ｔ２４细胞中，经Ｇ４１８选择，转染阳性率约为２０％；原位杂交技术检测ＩＬ－２ｃＤＮＡ可转录ＩＬ－２ｍＲＮＡ，细胞培养上汪肿ＩＬ－２活性２４小时每１０＾５细胞为８－３４Ｕ／ｍｌ。表明Ｉ     

逆转录病毒载体介导的人IL－2基因在膀胱肿瘤细胞T_（24）中的表达

报道逆转录病毒载体介导的人白细胞介素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ在人源性膀胱肿瘤细胞Ｔ２４中的表述，ＩＬ－２ｃＤＮＡ插入到真核表达载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ中，构建成ＩＬ－２ｃＤＮＡ的表达载体ｐＤＯＲＩＬ－２，磷酸钙沉淀法将其导入Ｔ２４细胞中，经Ｇ４１８选择，转染阳性率约为２０％；原位杂交技术检测ＩＬ－２ｃＤＮＡ可转录ＩＬ－２ｍＲＮＡ，细胞培养上清中ＩＬ－２活性２４小时每１０５细胞为８～３４Ｕ／ｍ１。表明ＩＬ－２基因在Ｔ２４细胞中已表达，为研制膀胱肿瘤转基因瘤苗及开展膀胱肿瘤基因治疗打下了基础。     

人精原干细胞的磁式分选和功能鉴定

目的 :目前对人睾丸内精原干细胞 (SSC)的生物学本质特性尚缺乏深入研究。本研究旨在寻求人SSC的特异性表面标志以及对其进行有效分选和功能鉴定的合理方法。　方法 :应用α6、β1 整合素、Thy 1 (CD90 )和c kit作为人SSC标志 ,利用免疫磁珠分选技术对成人睾丸单细胞悬液进行多参数复合分选 ,并利用流式细胞仪对分选后细胞的光散射特性和DNA倍体特性进行检测 ;将人分选后生殖细胞进行显微注射移植 ,观察人SSC在裸鼠睾丸内克隆形成的数量及其精子发生的可能性 ,对上述分选后人SSC进行功能性评价。　结果 :分选后α+ 6Thy 1 + c kit-和 β+ 1 Thy 1 + c kit-细胞均为大小、形态特征较为均一的细胞亚群 ,分别占分离细胞总数的 2 %～ 3%和 0 .5 %～ 1 %。其光散射特性分析显示均为明显低侧向散射特征。DNA倍体分析显示明显DNA倍体组成改变 ,合成期和四倍体细胞消失 ,仅有单倍体、二倍体和减数分裂期细胞 ,α+ 6Thy 1 + c kit-细胞群中 ,二倍体细胞数提高至该细胞群的5 1 .2 %。功能性评价结果表明 ,分选后α+ 6Thy 1 + c kit-细胞中干细胞浓度富积约 4 0倍 ,β+ 1 Thy 1 + c kit-细胞中干细胞浓度富积约 2 0倍。　结论 :α6,β1 整合素和Thy 1可作为阳性标志用于人SSC的分选。应用上述标志的复合免疫磁珠分?     

肿瘤的转基因治疗

根据转基因治疗肿瘤常用的信息药物、基因置换、基因添加和生产抗瘤疫苗等策略,综述了转基因治疗肿瘤的研究现状,存在问题和展望。     

人白细胞介素—2基因真核表达载体pDORIL—2的构建

构建逆转录病毒载体介导的人白细胞介素－２（ＩＬ－２）基因真核细胞表达载体。方法：合成带有和表达载体克隆位点相匹配酶切位点的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）引物，用ＰＣＲ方法从质粒ｐＨＩＧ５３中扩增出人的ＩＬ－２ｃＤＮＡ，将其定向克隆入表达载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ。结果：ＰＣＲ扩增出的ＩＬ－２ｃＤＮＡ片段约４７５ｂｐ，酶切鉴定该片段已被克隆入ｐＤＯＲ－ｎｅｏ的多克隆位点，构建成人ＩＬ－２基因真核表达载体ｐＤＯＲ     

泌尿系肿瘤基因治疗进展

随着分子生物学的发展以及人们在基因水平上对肿瘤发生、发展及生物学行为的深入,不但可在分子水平上作出肿瘤生物学行为的诊断,以指导选择正确的治疗原则,而且近年更是发展了在基因水平上的治疗方法。１９８５年Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ证明了逆转录病毒载体（ＲＶ）在人体进行基因治疗的安全性,并于１９９１年获准用ＲＶ把ＴＮＦ基因转入肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）进行肿瘤的基因治疗,从而揭开了肿瘤基因治疗的序幕。近年来国内外在肿瘤基因治疗领域进行了大量研究,并取得了可喜成果。１　基因转染载体选用合适载体把目的基因转入细胞内…     

T淋巴细胞中核转录因子κB在膀胱肿瘤细胞抑制T淋巴细胞功能中的作用

目的 :了解T淋巴细胞中核转录因子κB在膀胱肿瘤细胞抑制T淋巴细胞功能中的作用。方法 :1 采用免疫组化法检测与膀胱肿瘤细胞EJ、T2 4、正常移行上皮细胞共培养时T淋巴细胞NF κB。 2 用NF κB激动剂、抑制剂调节T淋巴细胞NF κB活性 ,应用免疫组化法、MTT法 ,了解膀胱肿瘤细胞EJ、T2 4作用下NF κB活性与T淋巴细胞功能的相关性。结果 :1 EJ T淋巴细胞组、T2 4 T淋巴细胞组 ,T淋巴细胞胞核染色阳性细胞的百分比与人正常膀胱移行上皮细胞组、空白对照组相比显著降低 (P <0 0 1) ;2 膀胱肿瘤细胞EJ、T2 4作用下T淋巴细胞NF κB胞核染色阳性细胞的百分比与增殖反应 (A值 )呈显著正相关 (Pearson相关系数 =0 74 4 ,P <0 0 0 1,n =6 0 )。结论 :膀胱肿瘤细胞EJ、T2 4可能通过下调NF κB活性抑制T淋巴细胞增殖功能     

腹腔镜前列腺癌根治术36例报告

目的探讨腹腔镜前列腺癌根治术(laparoscopic radical prostatectomy,LRP)的可行性和手术技巧。方法2005年3月～2008年12月,行LRP36例。平均年龄64岁(51～73岁),术前病理检查均证实为前列腺癌。T111例,T225例。21例参照Montsouris方法行经腹腔途径LRP,15例行经腹膜外途径LRP。结果平均手术时间265min(155～480min),平均出血量455ml(170～2500ml)。中转开放手术3例,其中2例为阴茎背静脉复合体出血,1例为直肠损伤。术后病理报告切缘阳性2例。术后尿管留置10～30d,平均14d,无真性尿失禁发生。术后漏尿6例,尿道狭窄2例。术后平均随访15.5月(2～44个月),穿刺孔皮下种植转移1例,余35例无复发转移。术后1个月前列腺特异抗原(PSA)0～5.85ng/ml。结论LRP治疗局限性前列腺癌安全有效。熟练掌握盆腔解剖,预先处理阴茎背静脉复合体,熟练掌握膀胱颈重建和镜下吻合技术是成功完成手术的关键。