人MCHR2真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立

目的:构建人MCHR2真核表达载体,转染HEK293细胞,建立稳定转染细胞系. 方法:采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1( ),经酶切和PCR鉴定后,脂质体转染法转染HEK293细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,RT-PCR,Western Blot及免疫荧光法检测MCHR2的表达. 结果:成功构建了pcDNA3.1-MCHR2真核表达载体并已稳定转入HEK293细胞,建立了稳定转染细胞系,成功地表达目的基因. 结论:稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究MCHR2的功能提供了良好的实验基础.     

酵母双杂交筛选原癌基因proto-Dbl的上游调控分子

目的：探讨VL domain对Dbl癌基因活性的调控机制。方法：本文通过酵母双杂交的方法,以proto-Dbl的VL domain为诱饵蛋白对人胎脑文库进行筛选。结果：研究共获得7个能与VL domain相互作用的蛋白。结论：Proto-Dbl VL domain相互作用蛋白的发现将为揭示proto-Dbl的功能奠定基础。     

肿瘤患者家属对肿瘤患者心理治疗的态度研究

目的：：分析我院住院肿瘤患者家属对肿瘤患者进行心理治疗的态度。方法：采用自制调查问卷及心理痛苦温度计量表评分法分析肿瘤患者及家属的一般情况及心理痛苦程度,运用统计学方法分析肿瘤患者家属对肿瘤患者进行心理治疗的态度及相关因素。结果：肿瘤患者及家属具有不同程度的心理痛苦,大多数肿瘤患者家属对患者进行心理治疗持积极态度。不同文化程度、是否直系亲属及探望频率的患者家属对患者进行心理治疗的态度差异有统计学意义（P ＜0.05）。患者家属年龄与建议进行心理治疗的模式相关（P ＜0.05）。结论：应加强对肿瘤患者家属关于肿瘤患者心理治疗的健康宣教工作,争取家属的主动配合及支持肿瘤患者进行心理治疗。     

吉非替尼联合艾迪注射液治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的:评价吉非替尼联合艾迪注射液治疗晚期非小细胞肺癌的近期疗效和不良反应.方法:将44例患者随机分为两组,每组22例患者.治疗组给予艾迪注射液联合吉非替尼治疗.吉非替尼给予250mg每天口服一次,艾迪注射液给予50ml每天一次静脉输入.对照组仅予吉非替尼250 mg每天口服一次治疗.结果:全部44例患者可评价疗效,治疗组和对照组有效率为40.9％和27.3％.疾病控制率分别为86.4％和59.1％.治疗组在疗效和疾病控制率均高于对照组,其中两组疾病控制率相比较具有统计学意义(P＜0.05).常见不良反应多为Ⅰ～Ⅱ度皮疹改变和腹泻,但通常可能耐受.结论:吉非替尼联合艾迪注射液治疗晚期非小细胞肺癌,可以提高疗效及降低治疗的相关毒副作用.     

人MCHR2基因shRNA真核表达载体构建及鉴定

目的 构建针对人黑色素浓集激素受体2(MCHR2)的shRNA真核表达载体,并在人胚肾293(HEK293)细胞中观察其对MCHR2基因表达的影响.方法 根据MCHR2基因序列,设计并合成特异性的小干扰片段,并将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定.用脂质体将重组质粒转染到HEK293细胞中,观察其在mRNA和蛋白水平对MCHR2的影响.结果 通过酶切鉴定和序列测定,成功构建四条表达短发夹RNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功转染到HEK293细胞株中.四条shRNA真核表达载体在mRNA水平对MCHR2抑制率分别为54.9%、66.4%、56.9%、45.8%;在蛋白水平对MCHR2抑制率分别为62.0%、81.0%、73.3%、44.2%.结论 针对人MCHR2的shRNA真核表达载体成功构建及鉴定为进一步研究MCHR2功能奠定了良好的基础.     

细胞周期素E的干扰RNA对HeLa细胞增殖的抑制作用

目的 利用RNAi技术下调宫颈癌HeLa细胞中cyclin E mRNA水平,研究对HeLa细胞增殖及周期的影响.方法 构建针对cyclin E基因的RNAi真核表达载体,脂质体转染HeLa细胞下调细胞中cyclin E mRNA含量.RT-PCR检测抑制效果;MTT检测细胞生长情况;流式细胞仪分析HeLa细胞周期变化.结果 成功构建针对cyclin E基因的RNAi真核表达载体,可以特异下调cyclin E mRNA含量,并抑制细胞恶性增殖.细胞周期分析显示干扰使细胞停留在G0～G1期,S期细胞明显减少.结论 RNAi能特异地下调HeLa细胞中cyclin E mRNA含量,抑制宫颈癌细胞恶性增殖,提示cyclin E可能成为宫颈癌基因治疗中的一个新的靶点.     

人黑色素浓集激素1型受体真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立

目的 构建人黑色素浓集激素1型受体(MCHR1)真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系.方法 采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR1基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1( ),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、Western blot及免疫荧光法检测MCHR1的表达.结果 成功构建了pcDNA3.1( )/MCHR1真核表达载体,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达了目的基因.结论 真核表达载体的构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究MCHR1功能奠定了良好的实验基础.     

组蛋白修饰在胰腺癌预后和疗效预测中的作用

1文献来源 Manuyakom A, Paulus R, Farrell Cellular histone modification patterns predict J, et al. prognosis and treatment response in resectable pancreatic adenocarcinoma： Results from RTOG 9704 [J] J Clin Oncol, 2010, 28（8）： 1358-1365.     

男性青少年手腕关节X线片骨骺融合增龄性变化的初步观察

目的观察15～19岁男性青少年手腕关节骨骺融合的形态学特征,为研究现阶段男性青少年骨骺融合增龄性变化规律积累新的数据。方法利用62例已知年龄的15～19岁男性青少年的手腕关节X线片,采用形态学分级、赋值法对其骨骺融合状况进行观察和半定量研究。按研究结果所获得的规律,采用上述赋值计分法对另外6例已知年龄的男性青少年骨龄进行粗测,并与中国人手腕骨发育标准（CHN）法进行对比。结果 15～19岁男性青少年手腕关节骨骺融合呈现动态的形态学变化趋势;18岁组以后各骨骼形态学变化仍在继续,但经赋值量化的统计学差异不明显;利用本方法可以粗测6例已知年龄的男性个体的大致骨龄。结论 15～19岁男性青少年手腕关节骨骺融合存在一定的增龄性变化;骨骺融合较以往文献报道有提前趋势;本研究的分级、赋值法可大致反映现阶段男性青少年骨骺发育的一般规律。     

Rac1小干扰RNA对胃肠道肿瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的 观察Rac1小干扰RNA(Rac1 siRNA)对胃肠道肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.方法 Rac1 siRNA 在lipofectamineTM 2000介导下转染胃癌SGC803细胞和结直肠癌Lovo细胞, 转染48 h后,采用半定量RT-PCR和Western blot技术分别检测Rac1 mRNA及蛋白的表达;Cell Counting Kit-8检测Rac1 siRNA转染细胞的增殖变化;损伤刮擦实验和体外侵袭实验(Transwell小室)分别检测转染细胞株的迁移与侵袭能力;用流式细胞仪检测转染细胞株的凋亡.结果 成功转染Rac1 siRNA的肿瘤细胞,RT-PCR及Western blot显示Rac1 mRNA和蛋白表达在相应的肿瘤细胞中都明显下降;Rac1 siRNA对肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭均有显著的抑制作用并能促进肿瘤细胞的凋亡.结论 Rac1与胃肠道肿瘤细胞的恶性生物学行为密切相关.Rac1 siRNA能够部分逆转胃癌细胞SGC803和肠癌细胞Lovo的恶性生物学行为.