HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响

目的：观察缺氧诱导因子HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides,ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响。方法：设计针对HIF-1α亚基的mRNA反义和正义寡核苷酸（sense oligodeoxynucleotides,SODN）,并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,观察不同时相5μmol/L的HIF-1αASODN对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响。半定量RT-PCR方法检测HIF-1α和p53 mRNA的转录水平,免疫组化SP法和免疫印迹（Western blot）检测HIF-1α和p53蛋白表达情况。结果：与常氧组比较,单纯缺氧组及SODN缺氧组的蛋白表达水平随缺氧时间延长明显升高（P〈0.05）;而p53 mRNA以及蛋白的表达水平较常氧组均显著增强（P〈0.05）。在ASODN缺氧组,HIF-1α蛋白表达水平显著降低（P〈0.05）;p53 mRNA及其蛋白的表达水平也明显减弱（P〈0.05）。结论：缺氧可以通过诱导野生型p53的突变使HIF-1α稳定表达。而ASODN明显抑制HIF-1α的表达,且使突变型p53的表达水平显著下降,这说明HIF-1α可能在缺氧诱导野生型p53突变方面有一定的作用。     

跑台训练结合高钙对去势小鼠骨代谢和结构的影响

目的：研究高钙饮食结合跑台训练对去势小鼠骨骼代谢和微结构的影响。方法：20只雄性C57/B6小鼠随机分为对照组和实验组各10只,采用睾丸切除法制造成年小鼠骨质疏松模型,对照组给予常规饲料喂养,实验组给予高钙饲料喂养及跑台训练。8周后2组小鼠处死取材,测定血清碱性磷酸酶（ALP）活性,并运用micro-CT方法分析动物胫骨微结构定量参数。结果：与对照组比较,实验组小鼠血清ALP活性明显升高,胫骨平台松质骨骨小梁数目、厚度及联结密度明显增强,骨小梁结构类似年轻的板状结构;胫骨中段骨皮质横截面积增大,骨皮质增厚,骨髓腔面积变化不明显。结论：高钙饮食结合跑台训练能显著改善实验动物骨骼微结构参数,提高血清ALP活性,对于延缓骨质流失,防治骨质疏松性骨折具有参考意义。     

类固醇局部注射联合理疗治疗下背部及臀区疼痛

2008年开始,我院特需门诊接诊下背部及臀区疼痛症患者135例,均符合下背部及臀区疼痛症的诊断标准[1],并经临床体征和影像学检查确诊,分为2组。①观察组65例,男47例,     

利用藻酸盐与骨髓间充质干细胞及前列腺癌细胞混合培养：观察干细胞对癌细胞增殖速度及成簇大小的影响☆

背景：肿瘤外环境研究的模型主要集中在实验室细胞的二维培养与体外动物实验,缺乏三维立体模型的研究与构建。 目的：体外模拟肿瘤骨转移的三维模型,并比较在有无骨髓间质干细胞时前列腺癌细胞的增殖速度与成簇大小以及成簇率。 方法：清洁级SD大鼠2只用于提取骨髓间质干细胞。利用藻酸盐模拟骨髓微环境,将前列腺癌细胞与SD大鼠骨髓间质干细胞在藻酸钙中共培养。通过显微镜与组织切片观察细胞在模型中的生长情况。利用绿色荧光蛋白转染肿瘤细胞,通过培养在普通光及荧光显微镜下观察三维模型中肿瘤单克隆的生长扩增情况。 结果与结论：有干细胞存在共培养的三维藻酸钙微环境中前列腺癌细胞的成簇速度、数量及成瘤率均较对照组高。对照组在7.75 d、有干细胞的混合培养组在6.00 d能形成单克隆细胞簇, 10 d后对照组瘤簇细胞计数为(95.13±11.63)个;有干细胞的混合培养组为(112.53±14.67)个,荧光细胞克隆形成率对照组为(77.10±6.85)%;有干细胞的混合培养组为(64.55±6.21)%;两者相比均有显著性意义。结果提示前列腺癌细胞与骨髓基质干细胞在藻酸钙微球环境中,有利于细胞增殖及成簇性发展。     

体外纯化乳鼠雪旺氏细胞的三种方法比较

背景：许旺细胞是外周神经系统中修复神经损伤及神经疾病的主要种子细胞之一。但是,许旺细胞的来源有限,且由于成纤维细胞的污染,使许旺细胞的纯度受到影响。有学者提出了其他的纯化方法,但每种方法都存在其不足之处而不能很好的满足临床应用的需要。 目的：比较差速贴壁消化法、冷喷注法、磁珠分选法和G418筛选法4种体外纯化乳鼠许旺细胞方法的差异。 方法：取SD大鼠坐骨神经得到所需神经组织。分别用差速贴壁消化法、冷喷注法、磁珠分选法和G418筛选法纯化许旺细胞。比较4种方法获得细胞的活力,免疫组织化学法鉴定许旺细胞并计算纯度。 结果与结论：差速贴壁消化法所得到的细胞纯度稍低,活力尚可;冷喷注法获得的细胞纯度和活力均较高;磁珠分选法获得的细胞纯度和冷喷注法相当,但是活力稍差;G418筛选法活力差,纯度高。     

医院危机事件中的媒体沟通探讨

现代媒体的医疗报道越来越强烈地影响到社会公共安全和政府决策人员及民众的价值观点,同时也影响到医疗卫生从业人员的情绪。媒体应当客观、专业地报道各项医疗卫生事件。然而,目前实际状况不容乐观。阻碍医疗报道质量提高的因素主要有缺乏相关知识、商业市场竞争、专业术语理解匮乏、医疗事件内情了解困难等。医疗报道十分重要,只有医院专业人员与媒体实时交换信息,协同报道各类危机事件,才能有效提高医疗新闻的客观真实性,才能使医疗卫生从业人员与社会大众相互理解。     

Construction of Sox9 gene eukaryotic expression vector and its inductive effects on directed differentiation of bone marrow stromal cells into precartilaginous stem cells in rats

Sox9 gene was cloned from immortalized precartilaginous stem cells and its eukaryotic expression vector constructed in order to explore the possibility of bone marrow-derived stromal cells differentiation into precartilaginous stem cells induced by Sox9. A full-length fragment of Sox9 was obtained by RT-PCR, inserted into pGEM-T Easy clone vector, and ligated with pEGFP-IRES2 expression vector by double digestion after sequencing. The compound plasmid was transfected into born marrow-derived stromal cells by Lipofectamine 2000, and the transfection efficacy and the expression of Sox9 and FGFR-3 were observed. Flow cytometry was used to identify the cell phenotype, and MTT was employed to assay proliferative viability of cells. Sequencing, restrictive endonuclease identification and RT-PCR confirmed that the expansion of Sox9 and construction of Sox9 expression vector were successful. After transfection of the recombinant vector into bone marrow-derived stromal cells, the expression of Sox9 and FGFR-3 was detected, and proliferative viability was not different from that of precartilaginous stem cells. It was concluded that Sox9 gene eukaryotic expression vector was successfully constructed, and the transfected bone marrow-derived stromal cells differentiated into the precartilaginous stem cells.     

载药骨基质明胶缓释体的研制与实验

目的　研制载药骨基质明胶缓释体 ,为人工关节感染和松动的防治提供新方法。方法　将BMG溶于头孢唑林钠溶液 ,通过真空吸附、冻干等处理 ,制得载药BMG。测定其体内、体外释药浓度及持续时间以及载药BMG的诱导成骨能力。结果　载药BMG体外对金葡菌的抑制作用为 2 2d ,体内为 14d。载药BMG体内释药时 ,局部组织浓度高 ,血浆浓度低 ;局部组织早期浓度高 ,以后为稳定的低浓度释放。载药BMG中掺入抗生素后不影响BMG的诱导成骨能力。结论　载药BMG既能持续释放有效浓度的抗生素 ,又具有强的诱导成骨能力 ,可望成为防治人工关节感染和松动的一种新方法。     

RNA干扰抑制骨肉瘤MG-63细胞β-catenin的表达

目的通过抑制Wnt信号通路核心蛋白β-catenin在骨肉瘤细胞系MG-63中的表达,探讨β-catenin对MG-63细胞的生长、细胞侵袭性以及耐药性等方面的作用。方法设计合成β-catenin的si RNA序列,LipofectamineTM2000转染入MG-63细胞。用RT-PCR和Western blot法检测干扰后β-catenin的mRNA和蛋白表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力,CCK-8法检测细胞增殖,利用阿霉素检测细胞耐药性。结果干扰后,实验组细胞的β-catenin mRNA和蛋白表达较对照组和空白组显著降低(均P<0.05);细胞周期检测实验组与对照组和空白组比较差异无统计学意义(P>0.05);Transwell法结果显示实验组细胞侵袭能力较对照组和空白组显著下降(均P<0.05);CCK-8法检测显示实验组细胞增殖力较对照组和空白组略有降低,但差异无统计学意义(均P>0.05);多柔比星敏感性检测显示实验组较对照组和空白组细胞生长抑制率显著增加(均P<0.05)。结论特异性抑制β-catenin基因表达可抑制骨肉瘤MG-63细胞的侵袭能力,并...     

肺癌肿瘤抑制物-1基因在肾腺癌伴骨转移组织的表达及临床意义

目的探讨肺癌肿瘤抑制物-1(TSLC1)基因在肾腺癌伴骨转移组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学(SP)法检测TSLC1在54例肾腺癌无骨转移患者的癌组织标本,10例肾腺癌伴骨转移患者的癌组织标本及10例正常肾组织中的表达。结果 TSLC1蛋白在肾腺癌无骨转移患者的癌组织中阳性表达率为53.7%(29/54),在肾腺癌伴骨转移患者的癌组织中阳性表达率为2/10,在正常肾组织中的阳性表达率为10/10,三组间差异有统计学意义(P<0.05)。TSLC1蛋白在肾腺癌病理分级Ⅰ～Ⅱ级中阳性表达率为54.0%,在Ⅲ级中阳性表达率为21.4%,差异有统计学意义(P<0.05);在肾腺癌伴发骨转移患者的癌组织中阳性表达率为20.0%,在无骨转移患者的癌组织中阳性表达率为61.1%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TSLC1基因可能与肾腺癌伴发骨转移的发生、发展有关,可能对肾腺癌伴发骨转移的早期诊断及预后评估具有重要意义。