永生化人前软骨干细胞株的构建

背景：前软骨干细胞体外培养增殖能力有限,但永生化细胞株可以提供大量性状稳定的永生化细胞,并且猿肾病毒40大T抗原基因(simian virus 40 large tumor antigen,SV40Tag)是较为常用且有效的体外永生化细胞的基因片段之一。 目的：以SV40Tag转染的人前软骨干细胞构建永生化人前软骨干细胞株。 方法：采用酶消化法及免疫磁珠筛选技术分离纯化人胚胎前软骨干细胞。利用脂质体介导基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染原代胚胎前软骨干细胞,以未转染细胞作阴性对照。阳性克隆扩大培养,观察细胞形态学以及传代复苏情况,计算细胞存活率和群体倍增时间,绘制细胞生长曲线。以免疫荧光细胞化学技术检测永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3,以RT-PCR检测永生化人前软骨干细胞及人前软骨干细胞中SV40Tag和成纤维生长因子受体3表达。 结果与结论：贴壁培养的永生化人前软骨干细胞形态与原代人前软骨干细胞形态无明显差别。传代、冻存、复苏对人永生化前软骨干细胞的存活率无影响,第6,10代人前软骨干细胞的存活率降低(P < 0.01)。与第6,10代人前软骨干细胞相比,永生化人前软骨干细胞增殖较旺盛,群体倍增时间短、增殖率高(P < 0.01)。第2代永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3染色阳性, 成纤维生长因子受体3的RT-PCR结果显示在约400 bp处有一特异形扩增条带,SV40Tag的RT-PCR结果显示在约560 bp处有一特异形扩增条带, 未转染的原代细胞未见条带。提示以免疫磁珠筛选技术及脂质体转染技术成功构建了SV40Tag永生化人前软骨干细胞株。     

壳聚糖/纳米羟基磷灰石分层复合支架的生物相容性研究

制备壳聚糖/纳米羟基磷灰石(CS/nHA)分层复合支架,对其进行细胞毒性评价.分离培养大鼠软骨细胞接种于支架,相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附及生长情况.动物皮下埋植试验观察其组织相容性.实验结果证实壳聚糖/纳米羟基磷灰石分层复合支架具有良好的生物相容性,有望成为较好的骨软骨组织工程支架.     

管好创造80％价值的员工

长期以来,绩效管理一直被作为企业管理的重要工具。公立医院虽然是事业单位,但在管理上也面临提高绩效和强化竞争力的要求,这促使医院也要进行绩效管理。     

RNA干扰抑制骨肉瘤MG-63细胞β-catenin的表达

目的通过抑制Wnt信号通路核心蛋白β-catenin在骨肉瘤细胞系MG-63中的表达,探讨β-catenin对MG-63细胞的生长、细胞侵袭性以及耐药性等方面的作用。方法设计合成β-catenin的si RNA序列,LipofectamineTM2000转染入MG-63细胞。用RT-PCR和Western blot法检测干扰后β-catenin的mRNA和蛋白表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力,CCK-8法检测细胞增殖,利用阿霉素检测细胞耐药性。结果干扰后,实验组细胞的β-catenin mRNA和蛋白表达较对照组和空白组显著降低(均P<0.05);细胞周期检测实验组与对照组和空白组比较差异无统计学意义(P>0.05);Transwell法结果显示实验组细胞侵袭能力较对照组和空白组显著下降(均P<0.05);CCK-8法检测显示实验组细胞增殖力较对照组和空白组略有降低,但差异无统计学意义(均P>0.05);多柔比星敏感性检测显示实验组较对照组和空白组细胞生长抑制率显著增加(均P<0.05)。结论特异性抑制β-catenin基因表达可抑制骨肉瘤MG-63细胞的侵袭能力,并...     

藻酸盐水凝胶与前软骨干细胞构建组织工程化骺板

目的探讨藻酸盐水凝胶(alginate hydrogel,AH)与前软骨干细胞(precartilaginousstem cells,PSCs)复合物体内构建骺板样组织的可行性。方法利用多聚赖氨酸和藻酸盐制备AH。将PSCs在含有TGF-β3的藻酸盐微珠中培养,分别于7、14、21天将被诱导的PSCs包埋入AH制备成AH-PSCs复合物,未被诱导的PSCs作对照。分别将AH-PSCs自体植入大鼠背部肌肉中,定期取材测定移植物的重量、细胞数,并行组织学检查及Ⅱ型胶原免疫组化检测。结果PSCs被诱导7天组移植物大约70％能形成骺板样结构;PSCs被诱导14天组及21天组的移植物能形成软骨组织及骨组织,但无骺板样结构;PSCs未被诱导的移植物无软骨组织及骨组织形成。被诱导7天组的移植物在20周的平均重量及每个移植物所含的细胞数均大于被诱导14天组或21天组的移植物(P<0.01);被诱导7天组的移植物在20周时平均重量及每个移植物所含的细胞数均大于在4周或10周时(P<0.01)。结论TGF-β3诱导PSCs7天的AH-PSCs复合物在体内能构建骺板样组织。     

载药骨基质明胶缓释体的研制与实验

目的　研制载药骨基质明胶缓释体 ,为人工关节感染和松动的防治提供新方法。方法　将BMG溶于头孢唑林钠溶液 ,通过真空吸附、冻干等处理 ,制得载药BMG。测定其体内、体外释药浓度及持续时间以及载药BMG的诱导成骨能力。结果　载药BMG体外对金葡菌的抑制作用为 2 2d ,体内为 14d。载药BMG体内释药时 ,局部组织浓度高 ,血浆浓度低 ;局部组织早期浓度高 ,以后为稳定的低浓度释放。载药BMG中掺入抗生素后不影响BMG的诱导成骨能力。结论　载药BMG既能持续释放有效浓度的抗生素 ,又具有强的诱导成骨能力 ,可望成为防治人工关节感染和松动的一种新方法。     

几丁糖在骨科临床的应用前景

几丁糖是一种天然的多聚糖纤维素 ,即甲壳素 [poly- β- (1→ 4) - N- acetyl- D- glucosamine],广泛存在于甲壳类动物中 ,来源方便。早在 1811年 ,法国学者 Braconnot〔1〕首先在蘑菇中发现了几丁质 ,当时称 Fungin,到 182 3年法国学者 Odier〔2〕在昆虫表面坚硬的外壳中发现了这种物质 ,并用希腊语命名为几丁质 (Chitin) ,沿用迄今。近几年来 ,其研究开发进展很快 ,在工业、农业、纺织、造纸、食品等方面均取得较大成果。在医疗方面 ,也广泛用于制造人工皮肤、可吸收缝线、止血材料、防粘连剂、药物载体等。大量研究〔3〕证明几丁糖无…     

颈椎小关节囊的神经支配及其临床意义

目的：研究颈椎小关节囊的神经支配来源及其通路，为阐明小关节损伤后弥漫性头颈肩部疼痛的机制及其治疗提供依据。方法：39只SD雄性大鼠，分为颈交感神经未切除组（A组，18只）、切除组（B组，18只）及对照组（C组．3只）．A、B组分别于Cl-2、C3—4或C5—6（各6只大鼠）小关节囊内注射5％双雀甲亚胺（Bb）0．6μl．C组注射等量生理盐水。8h后检查各组C1～C8脊神经节（DRG）和交感神经节（SG）的荧光标记细胞，片作统计学分析。结果：A组脊神经节和交感神经节内均可见到荧光标记细胞，其中，C1-2和C3—4关节囊内注射组的C1～C8DRG内有Bb（＋）细胞，C5—6关节囊内注射组的C3～C8DRG内可见Bb（＋）细胞；B组注射节段和相邻节段Bh（＋）细胞无明显减少，但远节段的Bh（＋）细胞明显减少；C组未见Bb（＋）细胞。结论：颈椎小关节囊神经支配来源于感觉和交感神经系统，脊神经节和交感神经节间有神经纤维联系，存临床上阻断脊神经和交感神经有可能缓解患者的头颈肩痛症状。