FK506抑制脊髓挫伤后诱导型一氧化氮合酶表达的实验研究

目的观察大鼠脊髓挫伤后早期应用FK506对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的抑制作用。方法45只成年雄性大鼠随机分为假手术组、对照组和治疗组。治疗组在脊髓挫伤后5 min一次性经尾静脉注射FK506(0.3mg/kg),其余两组以相同方法给予0.9%生理盐水。伤后3,7,14,21 d采用BBB评分法进行后肢运动功能评价,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学染色检测iNOS的mRNA和蛋白质的表达,同时行脊髓组织尼氏染色病理学观察。结果治疗组病理学观察和行为学评分明显优于对照组(P<0.05,P<0.01);iNOS的mRNA和蛋白质的表达均于伤后7 d达高峰,两者表达在治疗组明显低于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论FK506能抑制大鼠脊髓挫伤后iNOS表达,减轻继发性损害,从而改善脊髓损伤后的功能恢复。     

体外RNA干扰抑制Ezrin表达对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

背景与目的:细胞膜-细胞骨架联接蛋白(埃兹蛋白,Ezrin)参与了许多细胞的功能,包括细胞黏附、细胞运动以及细胞的生存.最近的许多研究表明Ezrin参与调控了肿瘤的侵袭与转移.然而,在骨肉瘤中,Ezrin所扮演的重要角色还没有被很清晰的阐明.本研究拟探讨Ezrin蛋白对人骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:以骨肉瘤MG-63细胞系为研究对象,针对Ezrin编码基因设计小干扰RNA片段,重组其shRNA(short hairpin RNA)表达载体转染入细胞,筛选稳定表达的克隆,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western-Blot)方法检测转染后Ezrin的mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测侵袭能力的变化.结果:RT-PCR和Western blot检测显示shRNA对Ezrin在基因和蛋白水平均有显著下调作用.骨肉瘤细胞生长速度减慢,处于分裂期的细胞比例有明显的下降,由25.05%下降到18.36%,而G1期细胞比例则由60.57%上升到67.65%.穿过人工基底膜的细胞数量也明显减少,由35.9±5.6减少为22.5±2.8(P＜0.01).结论:Ezrin在骨肉瘤的增殖和侵袭过程中发挥有重要作用,可能成为抑制肿瘤增殖和转移的关键性分子.     

Inhibition of Proliferation of Human Osteosarcoma Cells Transfected with PIN1 Antisense Gene

目的观察以pIRES2-EGFP质粒为载体的PIN1反义基因转染对人骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。方法用不同量(0、20、50、100、200、250μL)的以pIRES2-EGFP质粒为载体包装的反义PIN1基因转染人骨肉瘤细胞系MG-63细胞,收集转染前后的培养细胞和上清液,用MTT法观测转染前后细胞生长曲线;用流式细胞仪观测细胞生长周期变化和细胞凋亡情况;用免疫印迹法(Western-blot)检测Pinl蛋白的表达变化;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PIN1mRNA表达变化。结果MTT法和流式细胞仪显示反义PIN1基因转染能抑制细胞生长,促进其凋亡;Western-Blot结果表明转染反义Pin1基因的量越多,其灰度越低,测得空白对照组及不同量(0、20、50、100、200、250μL)的转染基因组其相应的吸光度比值分别为0．854±0．136、0．866±0．138、0．732±0．154、0．611±0．121、0．547±0．109、0．398±0．113、0．320±0．151,差异有显著性(P<0．05);RT-PCR检测其灰度比值分别为0．983±0．125、0．988±0．127、0．915±0．157、0．786±0．125、0．608±0．124、0．433±0．130、0．410±0．158,差异有显著件(P<0．05)。结论反义Pin1基因可封闭Pin1mRNA,使已转染反义Pin1基因的MG-63细胞表达的Pin1蛋白减少,从而抑制人骨肉瘤细胞MG- 63增殖。     

Effect of FK506 on Expression of Hepatocyte Growth Factor in Murine Spinal Cord Following Peripheral Nerve Injury

This study is to investigate the effect of FK506 on expression of hepatocyte growth factor （HGF） in rats＇ spinal cord following peripheral nerve injury and to elucidate the mechanisms for neuroprotective property of FK506. Fifty male rats were randomly divided into normal group, injury group and treatment group. Models of peripheral nerve injury were established by bilateral transection of sciatic nerve 0.5 cm distal to piriform muscle. Then the treatment group received subcutaneous injection of FK506 （1 mg/kg） at the back of neck, while the injury group was given 0.9% saline. The L4-6 spinal cords were harvested at various time points after the surgery. Western blotting and immunofluorescent staining were used to detect the level and position of HGF in spinal cord. Immunofluorescent staining showed that HGF-positive neurons were located in anterior horn, intermediate zone and posterior horn of gray matter in normal spinal cord. Western blotting revealed that there was no significant difference in the expressions of HGF between the injury group and the normal group, while the expression of HGF was significantly higher in the treatment group than in the injury group 7 and 14 days after surgery. It is suggested that peripheral nerve injury does not result in up-regulation of the expression of HGF in spinal cord, while FK506 may induce high expression of endogenous HGF after injury thereby protecting neurons and promoting axonal outgrowth.     

强直性脊柱炎非骨水泥型全髋关节置换术后中期随访

目的:观察强直性脊柱炎非骨水泥型全髋关节置换术后中期的随访结果。方法:对37例(52髋)强直性脊柱炎非骨水泥型全髋关节置换术后患者进行了24～172个月,平均69个月的随访。临床随访根据Harris的评分方法进行评分,X线随访根据Gruen等和DeLee and Charnley分区法分别进行股骨柄和臼杯X线分析,根据Brooker等0～4级分级法进行异位骨化分级。结果:患者髋关节屈伸、收展、内外旋总活动度由术前的平均27°提高到术后平均152°。术后无脱位、感染等并发症发生。Harris评分术前平均为32(8～64)分,术后平均为82(64～96)分,其中优38髋,良8髋,可6髋,优良率88.5％。X线片分析未见假体松动,11髋(21.2％)发生异位骨化。结论:人工全髋关节置换术治疗强直性脊柱炎髋关节病变,中期可取得满意的临床效果。     

Expression of Vascular Endothelial Growth Factor （VEGF） in Human Osteosarcoma Cells Transfected with Adeno-associated Virus-antisense VEGF

Ithasbecomeacommonmethodforcancertreatmentthroughantivascularizationinthepresent.Somestudieshaverevealedthatlivercancer ,lungcancerandcervicalcancercanbetreatedsuccessfullythroughholdingbackvascularendothelialgrowthfac tor (VEGF) proteinbecauseofitsimport…     

Effect of rhBMP-2 and Osteogenic Revulsants on Proliferation and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells in Rats

The effects of recombinant human bone morphogenetic protein-2 （rhBMP-2） and osteogenic revulsants alone or in combination at different time points and in different dosages on proliferation and osteogenesis of bone marrow stromal cells （BMSCs） in SD rats were investigated. Rat BMSCs were cultured in vitro and induced by rhBMP-2 in different dosages （10, 50, 100 and 200μg/L） alone or in combination with osteogenic revulsants. MTT colorimetric assay was used to evaluate The proliferation, activity of alkaline phosphoric （ALP） and osteocalcin were measured at 3rd, 6th, 9th, 12th day respectively. The results showed that rhBMP-2 and osteogenic revulsants could promote the differentiation of BMSCs towards osteoblast phenotype. The proliferation of BMSCs could be enhanced by rhBMP-2 in a dose-dependent manner. The expression of osteoblast phenotype was significantly higher by using both of them than by using them alone, which was verified by the activity of ALP and osteocalcin. It was suggested that the combined use of rhBMP-2 and osteogenic revulsants could promote the proliferation and simultaneously induce and maintain the expression of osteoblast phenotype of BMSCs in rats.     

生物陶瓷人工椎体以及脊柱前路解剖型钢板重建椎体的生物力学评价☆

目的：基于胸腰椎解剖学的研究，设计制作了胸腰椎脊柱前路解剖型固定钢板以及生物陶瓷人工椎体，并对应用脊柱前路解剖型固定钢板，Kaneda装置以及生物陶瓷人工椎体等技术重建椎体的动物脊柱标本进行了生物力学测试比较。 方法：实验于2001-10/2002-06在华中科技大学力学系国家重点试验室完成。选取正常成年新鲜牛脊柱标本40具，由华中科技大学力学系试验室提供, 分为正常组，生物陶瓷人工椎体组，脊柱前路解剖型固定钢板加植骨组，Kaneda装置加植骨组，单纯植骨不加任何外固定组。应用与华中科技大学力学系联合研制的生物力学测试系统，采用动态加载，应用传感器动态记录方式，对各组牛脊柱标本进行三维六度的测试分析。 结果：①单纯植骨不加任何外固定组在各个方向均最不稳定。②脊柱前路解剖型固定钢板在前屈，后伸方向明显较Kaneda装置稳定。③在Kaneda装置的对侧即右侧：脊柱前路解剖型固定钢板在右旋，右弯方向与Kaneda装置固定效果相当，甚至稍强。④在Kaneda装置的固定侧即左侧，脊柱解剖型固定钢板的稳定性稍弱于Kaneda装置。⑤生物陶瓷人工椎体的固定效果各个方向均较为理想，明显地高于Kaneda装置固定、脊柱前路解剖型钢板的固定，与正常脊柱相当。 结论：应用生物陶瓷人工椎体以及脊柱前路解剖型钢板重建椎体具有良好的生物力学稳定性。     

新生大鼠前软骨干细胞株的体外培养分选、鉴定及永生化研究

背景：前软骨干细胞虽然具有较强的自我增殖能力和多向分化潜能，但生物学性状不稳定，易分化。导入外源性基因能使其永生化，且不改变细胞的表型和性状。 目的：建立永生化大鼠前软骨干细胞株，为以后精确调控前软骨干细胞的增殖与分化打下基础。 设计、时间及地点：单一样本观察，于2005-10/2006-09在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室完成。 材料：出生< 24 h的新生SD大白鼠，雌雄不限，用于取前软骨干细胞。 方法：用LipofectamineTM2000介导基因转染，将含有SV40T抗原基因的真核表达载体pCMVSV40T/PUR导入经免疫磁珠分选出的原代前软骨干细胞进行稳定表达，用嘌呤霉素筛选出阳性克隆并扩大培养。 主要观察指标：①前软骨干细胞的生物学性状。②质粒鉴定。③用免疫细胞化学方法和反转录聚合酶链反应鉴定SV40T抗原基因在转染细胞中的表达。④反转录聚合酶链反应结果。⑤细胞生长曲线。 结果：①免疫磁珠分离获得细胞阳性克隆，用免疫组织化学证实FGFR-3表达阳性。②双酶切质粒，电泳证实pCMV为3 kb，SV40T基因为2.3 kb。③嘌呤霉素分离获得转化后细胞阳性克隆，用免疫组织化学证实FGFR-3表达阳性。④提取RNA后用反转录-聚合酶链反应法成功扩增出588 bp的片段。转染细胞经扩大培养，命名为永生化前软骨干细胞。⑤贴壁培养的转染细胞群体倍增时间为 (22.98±2.77) h，传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响。 结论：在体外培养条件下，可以从新生大鼠干骺端中分离、培养出前软骨干细胞，pCMVSV40T/PUR转染能使其永生化。     

磁性生物陶瓷椎体间融合器的研究

目的 检测由磁性生物陶瓷制作椎体间融合器生物愈合的可行性与稳定性.方法 应用磁性生物陶瓷制作椎体间融合器后,选健康2～4岁山羊9只,平均体重27.8kg,经氯胺酮诱导,气管插管,安氟醚吸入麻醉后,取右下腹腹膜外斜切口,暴露L3与L4椎间隙后,保留前纵韧带,从椎间隙外侧切开纤维环,摘除髓核后,牵引及撑开椎间隙,刮除软骨终板,凿去大部分椎骨表面皮质骨,植入"楔形"磁性生物陶瓷椎体间融合器.结果 9只山羊均成活,术后约8h即可恢复站立,行走;24h后恢复正常行走,进食,但是活动较少,大多数时间处于卧位,休息;3周后情况明显好转,活动恢复至正常.术后6个月,腹部彩色B超检查未见血拴形成,腹部大血管血供正常.定期X线检查,肉眼大体标本观察,光境观察,扫描电镜(SEM)观察,材料与骨实现牢固的"生物愈合".结论 采用磁性生物陶瓷制作椎体间融合器植入体内是可行的.