白花丹素对骨肉瘤细胞系U2OS的作用及其机制

目的研究白花丹素对骨肉瘤细胞系U2OS的作用,并初步探讨其作用机制。方法用CCK-8法检测白花丹素对骨肉瘤细胞的促凋亡作用;用HOECHST 33342染色研究白花丹素对骨肉瘤细胞作用后的形态学变化;用Western blot法检测白花丹素作用后骨肉瘤细胞MDM2和p53蛋白表达情况。结果CCK-8结果显示白花丹素对骨肉瘤细胞有明显的抑制作用,而且呈浓度依赖性;HOECHST 33342染色结果显示白花丹素对骨肉瘤U2OS 细胞的抑制作用主要是通过促进凋亡来实现;Western blot结果显示白花丹素能够改变p53/MDM2基因表达比例。结论白花丹素通过细胞凋亡途径抑制骨肉瘤细胞系U2OS细胞的生长。     

KTQ质量认证体系在提高电子病历质量中的作用

目的探讨借鉴KTQ质量认证体系提高电子病历质量的方法。方法根据KTQ质量认证体系的相关标准,按照P(计划)、D(实施)、C(检查)、A(处理)持续提高电子病历质量,并分析改进效果。结果执行KTQ质量管理体系后,各类病历质量问题均得到明显改善,甲级病案率由93.0%提高至99.0%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 KTQ质量认证体系可显著提高电子病历质量,具有较好的推广价值。     

磁刺激对脊髓内源性神经干细胞增殖分化影响

目的 探讨磁刺激对脊髓内源性神经干细胞（NSCs）增殖分化的作用。 方法 将46只Wistar大鼠分为正常组、对照组和治疗组,对照组和治疗组采用改良的Allen重物坠落法造成大鼠脊髓损伤（SCI）模型,治疗组于SCI后24 h开始,每天给予脉冲磁刺激,频率为0.5 Hz,强度为1.44 T,每次30个脉冲,每天1次,连续7 d。应用BBB运动功能评分评价磁刺激治疗后大鼠运动功能的改善,采用免疫组织荧光化学技术检测脊髓神经上皮干细胞巢蛋白的表达,采用免疫荧光三标技术结合激光共聚焦显微镜检测微管相关蛋2（MAP2）/巢蛋白/4,6 二乙酰基 2 苯基吲哚（DAPI）的表达。 结果SCI后,治疗组大鼠运动功能改善明显,治疗组脊髓中央管室管膜、室管膜下区、损伤病灶周围和血管周围巢蛋白阳性细胞数较对照组多（P<0.05）,且尽管总体细胞数量有限,在上述部位的MAP2/巢蛋白双标阳性细胞数多于对照组。 结论磁刺激可以促进脊髓内源性NSCs的激活,并有可能诱导其向神经元细胞分化,该诱导分化作用是否在神经再生方面具有实质性意义值得进一步深入研究。     

永生化人前软骨干细胞株的构建

背景:前软骨干细胞体外培养增殖能力有限,但永生化细胞株可以提供大量性状稳定的永生化细胞,并且猿肾病毒40大T抗原基因(simian virus 40 large tumor antigen,SV40Tag)是较为常用且有效的体外永生化细胞的基因片段之一.目的:以SV40Tag转染的人前软骨干细胞构建永生化人前软骨干细胞株.方法:采用酶消化法及免疫磁珠筛选技术分离纯化人胚胎前软骨干细胞.利用脂质体介导基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染原代胚胎前软骨干细胞,以未转染细胞作阴性对照.阳性克隆扩大培养,观察细胞形态学以及传代复苏情况,计算细胞存活率和群体倍增时间,绘制细胞生长曲线.以免疫荧光细胞化学技术检测永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3,以RT-PCR检测永生化人前软骨干细胞及人前软骨干细胞中SV40Tag和成纤维生长因子受体3表达.结果与结论:贴壁培养的永生化人前软骨干细胞形态与原代人前软骨干细胞形态无明显差别.传代、冻存、复苏对人永生化前软骨干细胞的存活率无影响,第6,10代人前软骨干细胞的存活率降低(P<0.01).与第6,10代人前软骨干细胞相比,永生化人前软骨干细胞增殖较旺盛,群体倍增时间短、增殖率高(P<0.01).第2代永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3染色阳性.成纤维生长因子受体3的RT-PCR结果显示在约400 bp处有一特异形扩增条带,SV40Tag的RT-PCR结果显示在约560 bp处有一特异形扩增条带,未转染的原代细胞未见条带.提示以免疫磁珠筛选技术及脂质体转染技术成功构建了SV40Tag永生化人前软骨干细胞株.     

同种异体骨材料复合自体浓缩红骨髓移植治疗良性骨肿瘤和瘤样病变

背景:同种异体骨足临床常用的骨移植材料,但缺乏诱导成骨能力是最人的问题.目的:评价良性骨肿瘤及瘤样病变刮除或切除后应用同种异体骨复合白体红骨髓修复骨缺损的效果.设计、时间及地点:回顾性病例对比分析,于2004-05/2006-05在华中科技人学同济医学院附属同济医院骨科进行.对象:选择良性骨肿瘤及瘤样病变108例患者,男58例,女50例:年龄10-58岁,平均32岁.其中采用异体骨复合自体浓缩红骨髓植骨52例(复合红骨髓植骨组);单纯异体骨植骨56例(单纯植骨组).方法:复合红骨髓植骨组惠者根据预计植骨量从每位患者两侧的骼前上棘或髂后上棘抽取红骨髓40～100 mL,在植骨前将同种异体骨与红骨髓充分混匀.肿瘤刮除或切除后,用电刀烧灼骨缺损腔,将同种异体骨剪成细小的短棒状或修成2 mm见方的块状,植入骨缺损区内.单纯植骨组将相同比例的生理盐水与同种异体骨充分混匀后植入骨缺损区内.主要观察指标:术后定期进行植骨区X射线检查及骨密度检测,比较两组间移植骨颗粒界限模糊、消失的时间及不同时间骨密度的情况.同时观察术后并发症如免疫排斥反应、感染等发生情况.结果:100例患者达骨性融合(复合红骨髓植骨组49例,单纯植骨组51例),并获得24个月随访,数据进入结果分析.复合红骨髓植骨组移植骨界限模糊时间和消失时间均短于单纯植骨组(P<0.05～0.01).术后3,6,12个月时复合红骨髓植骨组骨密度高于单纯植骨组(P<0.05～0.01).复合红骨髓植骨组2例,单纯植骨组3例出现排异反应,使用免疫抑制剂治疗两三周后痊愈.结论:同种异体骨复合自体红骨髓米源相对丰富,抗原件减弱,能明显促进骨融合和骨缺损的愈合.     

抽吸法诱导兔椎间盘退变模型的病理及影像表现

背景:椎间盘退变的病理生理学机制至今尚未明了,需要构建更稳定和简便易得的椎间盘退变模型,观察其病理及影像表现,揭示其内在因素.目的:实验希望通过病理学及影像学枪测,来验证利用抽吸法构建兔椎间盘退变模型的可行性、以及造模的简便和稳定性.材料:10月龄健康新西兰大耳白兔42只,雌雄不拘,随机分为对照组和实验组各21只.速眠新由长春市军需大学兽医研究所提供.方法:设两组兔椎间盘高度指数均为100%.利用21G皮肤穿刺针分别在实验组白兔L4-5单节段刺入,抽吸髓核8～12mg造模;对照组不做处理.造模完毕,两组兔分别于4,12,20周各取7只进行指标检测.主要观察指标:利用椎间盘高度指数百分比、X射线片、MRI及Alcian blue组织染色观察退变椎间盘的变化.结果:4,12,20周实验组退变椎间盘高度指数百分比分别为(81.0±3.2)%,(75.0±2.5)%,(71.0±1.8)%,与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.05).退变椎间盘T2加权像信号明显降低,Alcian blue组织染色显示退变椎间盘组织中聚集蛋白多糖含量明显降低.结论:抽吸法构建兔椎间盘退变模型简便可靠,其退变过程的病理及影像表现与人椎间盘退变过程的病理及影像表现十分相似.     

肺癌抑癌基因1对前列腺癌T_3B细胞侵袭、成瘤和转移能力的影响

[目的]研究肺癌抑癌基因1(TSLC1)对人前列腺癌T3B细胞侵袭、成瘤和转移能力的影响。[方法]将克隆有TSLC1全长cDNA的真核表达载体pCI-TSLC1稳定转染至前列腺癌T3B细胞中。实验组T3B细胞转染pCI-TSLC1质粒,以转染空质粒pCI-neo的T3B细胞为对照组,未加任何处理的T3B细胞为空白组。Transwell法检测体细胞体外侵袭能力,将三组细胞分别以4.0×106/200μl浓度注入裸鼠皮下,观察各组成瘤情况,将三组细胞分别以2.0×106/10μl进行骨原位注射建立骨转移瘤模型,观察各组骨转移率。[结果]与对照组和空白组相比,实验组细胞株细胞体外侵袭能力受到显著抑制(P<0.01);实验组皮下瘤出现明显晚于对照组和空白组,而且瘤体也明显小于对照组和空白组(P<0.01);实验组骨转移率为20%,明显低于对照组(100%)和空白组(100%)(P<0.05)。[结论]TSLC1基因明显抑制T3B细胞的侵袭、成瘤和转移能力。     

反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞MTA1基因表达及侵袭性影响的研究

目的:合成人肿瘤转移相关基因(MTAl)的反义脱氧寡核苷酸,观察其转染后对人骨肉瘤MG-63细胞系中MTA1表达及骨肉瘤侵袭性的影响.方法:免疫细胞染色观察人工合成正义、反义及无意义MTA1基因片段转染人骨肉瘤细胞MG-63后,人肿瘤转移相关基因的表达;RT-PCR和蛋白质印迹法检测MTA1基因mRNA和蛋白质表达水平的变化;Boyden小室体外侵袭实验检测转染前后细胞侵袭力的变化.结果:反义寡核苷酸处理骨肉瘤细胞后,MTA1 mRNA的表达下降(吸光度之比为25.09±0.21),与正义链组、无意义链组和空白对照组(35.19±0.17、33.20±0.23和37.17±0.18)相比差异有统计学意义,P<0.05.Boy-den小室体外侵袭实验检测显示,反义寡核苷酸处理后骨肉瘤细胞的透膜能力明显下降.结论:MTA1同骨肉瘤的转移能力密切相关,反义寡核苷酸的转染可阻遏骨肉瘤细胞中MTA1的表达,并因此有可能限制骨肉瘤的侵袭和转移.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对人骨肉瘤的作用

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对人骨肉瘤的作用,以及此作用与TRAIL受体（TRAILR）在人骨肉瘤中表达的相关性。方法应用原位杂交、Western blot方法检测人骨肉瘤细胞系MG-63及新鲜骨肉瘤组织块中TRAILR的表达;将在大肠杆菌中表达的TRAIL纯化后用于MG-63及新鲜骨肉瘤组织块,同法处理人白血病细胞株Jurkat作为阳性对照。MTT法检测细胞毒作用;流式细胞术检测凋亡,光镜下观察形态学变化,计数细胞,绘制生长曲线,测定细胞倍增时间。结果人骨肉瘤中死亡受体DR4、DR5呈高表达而诱惑受体DcR1、DcR2呈低表达,但TRAIL抑制人骨肉瘤细胞增殖而不能诱导其凋亡,MG-63在TRAIL作用下变肥大且呈编织排列。结论人骨肉瘤细胞对TRAIL耐受与其诱惑受体表达无关,TRAIL能改变体外培养的人骨肉瘤细胞形态及增殖动力学。