磁刺激对脊髓神经组织损伤的早期保护作用

目的探讨脊髓损伤后,应用磁刺激(magnetic stimlation,MS)对损伤脊髓组织早期钙、镁离子的影响.方法实验利用Allen的WD(weight drop,WD)技术,以10g×2.5cm致伤力造成wistar大鼠T8脊髓损伤模型,实验组分别于术后即刻,1h,2h,4h,24h分别予0.5HZ,70%输职强度的磁刺激,对照组不做处理.术后2h,6h,24h取治疗组,对照组动物损伤区脊髓组织作以下检测用干湿法测水含量;用原子吸收光谱法测钙、镁离子含量.结果损伤区脊髓组织水含量增多,钙离子水平升高,镁离子水平下降,白质内髓鞘结构紊乱,囊性变重;而应用MS可改善上述变化.结论脊髓损伤后应用磁刺激可减损脊髓损伤后的离子失衡,从而对继发性脊髓损伤具有保护作用.     

髋关节置换术后感染的临床分析

感染是髋关节置换术后最严重的并发症之一。尽管现代手术运用了预防性抗生素、严格的无菌条件及规范化的操作技术 ,使髋关节置换术后感染的发病率有了显著的下降 ,但仍然保持在 1%左右〔1、2〕。由于感染发生在植入物 骨界面中 ,常规的抗生素治疗很难取得较好的疗效 ,因此感染一旦发生 ,治疗十分棘手 ,大部分病例不得不行翻修手术 ,以达到彻底清创。目前对于清创术后假体再置入的时机意见尚不一致。我院从 1994年 3月～ 2 0 0 0年 3月采用一期或二期假体返修技术治疗 12例髋关节置换术后感染患者 ,通过平均 5 4个月的随访 ,临床疗效满意。…     

增强型绿色荧光蛋白基因转染及TGFβ3诱导前软骨干细胞向成软骨方向分化

目的　探讨增强型绿色荧光蛋白基因 (EGFP)转染前软骨干细胞 (PSCs)的效果及TGFβ3 诱导PSCs向成软骨方向定向分化的可行性。方法　利用磁性细胞分选系统分离纯化有成纤维细胞生长因子受体 3(FGFR 3)表面标志的PSCs。采用脂质体介导法将EGFP基因转染PSCs,G4 18筛选得到EGFP基因修饰PSCs。用免疫组化及免疫荧光检测EGFP基因修饰PSCs的FGFR 3表达。采用藻酸盐凝胶培养 ,以TGFβ3 诱导分离纯化的PSCs向成软骨方向定向分化。应用免疫组化、RT PCR检测PSCs向成软骨方向分化过程中特异性软骨基质成分的表达情况。结果　EGFP基因转染PSCs后 ,2 4hGFP开始表达 ,4 8～ 72hGFP表达最强。G4 18筛选后 ,EGFP基因修饰PSCs体外培养 6周仍有较强GFP表达。在含TGFβ3 的藻酸盐凝胶培养 7、14、2 1d均有II型胶原表达 ;诱导2 1d的PSCs免疫组化检测可见细胞及周围均有X型胶原、Aggrecan、COMP表达 ;RT PCR检测显示在培养早期 ( 8d内 )开始出现Aggrecan、X型胶原、COMP等的表达 ,中期 ( 8d后...     

含胎牛血清胶原酶消化法培养兔成骨细胞

背景:成骨细胞原代培养技术已经很成熟,然而各种消化酶单纯作用于原代组织时对成骨细胞膜蛋白有一定影响。目的:为尽可能避免酶对细胞的损害,用含胎牛血清的胶原酶消化胎兔颅盖骨骨组织,进行体外成骨细胞培养,观察加入胎牛血清后胶原酶对成骨细胞消化的效果。设计:对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院骨外科研究室。材料:实验于2004-03/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨外科研究室完成。妊娠28d日本大耳白种孕兔2只。方法:将同一个批号的Ⅰ型胶原酶分别用含体积分数为0.15胎牛血清的培养基和DMEM溶液配制成0.1%的含胎牛血清的胶原酶和0.1%不含血清的胶原酶,分别作为实验组和对照组的酶消化液A液和B液。妊娠28d的孕兔,无菌条件下剖腹取出胎兔,然后取胎兔的颅盖骨,剔净、漂洗、剪碎。实验组和对照组分别加5mL37℃的A液和B液消化,两组均用含体积分数为0.15胎牛血清的培养液分别成梯度稀释为0倍、1倍、2倍和4倍后继续消化-培养成骨细胞。锥虫蓝染色测定细胞的存活率,细胞内碱性磷酸酶染色鉴定和测定成骨细胞的纯度,显微镜下观察细胞生长情况。主要观察指标:①用锥虫蓝染色来检测两组细胞的存活率。②以细胞内碱性磷酸酶染色来检测两组细胞的纯度。③用显微镜观察细胞形态来区别两组细胞的生长情况。结果:①细胞锥虫蓝染色结果:通过记数计算,实验组拒染率高达98%,细胞存活率高;对照组拒染率也高达95%,细胞存活率也较高。②细胞内碱性磷酸酶染色结果:实验组碱性磷酸酶染色阳性区域不少于95%,细胞纯度高;但对照组碱性磷酸酶染色阳性区域不超过75%细胞纯度较低。③显微镜下观察结果:实验组细胞饱满凸起,有立体感,细胞生长旺盛,营养充足;而对照组细胞凸起不明显,立体感较差,细胞生长营养较实验组差。结论:用含胎牛血清胶原酶消化胎兔颅盖骨骨组织,培养出的成骨细胞具有典型的成骨细胞特征,且成分单一,存活率高。     

髓内、外内固定与人工关节置换术治疗高龄股骨粗隆间骨折疗效对比研究

目的比较髓内、外内固定与人工关节置换术治疗高龄股骨粗隆间骨折的临床疗效。方法回顾分析自2012-09—2015-01诊治的107例高龄粗隆间骨折的临床资料,根据手术方式不同分为髓内固定(PFNA组)、髓外固定(PFLCP组)和人工关节置换(BHR组),比较3组出血量、时间和并发症发生率、切口大小、术中透视次数、术后患肢完全负重时间、卧床和住院时间、术后髋关节Harris评分。结果 3组均顺利完成手术。所有患者均获随访3~36个月,平均12个月。BHR组与另外2组比较,手术时间短、切口大、出血多、透视少、卧床和住院时间短、术后负重时间早、髋关节功能更好,差异有统计学意义(P0.05),3组并发症发生率比较差异无统计学意义(P0.05)。术后9个月3组均获得良好的关节功能,Harris评分两两比较差异无统计学意义(P0.05)。结论双极人工股骨头置换术治疗高龄股骨粗隆间骨折术后可获得良好的关节功能,患肢完全负重早,是一种安全的治疗方法。     

Yes相关蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的研究

目的研究Yes相关蛋白（Yes?associated protein, YAP）通过Wnt/β?catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的机制。方法用siRNA分别沉默YAP基因和Lats1基因来调控YAP的活性,通过Real?time PCR检测软骨特异性基因和Wnt/β?catenin信号通路下游基因的表达;通过Western Blot检测GSK3β的磷酸化水平、活化β?catenin的蛋白水平以及Sox9的蛋白水平;并通过阿利新蓝染色检测软骨细胞外基质的分泌情况。用siRNA沉默YAP基因后,再用氯化锂干预细胞,通过Western Blot检测Sox9的表达和GSK3β的磷酸化水平。结果沉默YAP基因后,磷酸化GSK3β和活化β?catenin的蛋白水平减少,c?Myc和Nanog基因表达减少,Sox9、Col2和Aggrecan基因表达升高,并且软骨细胞分泌基质增多;沉默Lats1基因后,磷酸化GSK3β和活化β?catenin的蛋白水平增加,c?Myc和Nanog基因表达上调,Sox9、Col2和Aggre?can基因表达减少,并且软骨细胞分泌基质减少。此外,氯化锂可以阻断沉默YAP引起的Sox9表达上调。结论 YAP通过Wnt/β?catenin信号通路调控软骨细胞Sox9的表达。     

新型冠状病毒肺炎疫情期骨科诊疗规范化流程的专家共识

正罗卓荆7*张英泽2*郭风劲1游洪波1肖骏1罗政强1康皓1熊伟1祝文涛1方忠1廖晖1陈安民1李锋1*#共同第一作者     

正反义人PIN1基因克隆及真核表达载体的构建

目的 克隆正、反义人PIN1基因（hPIN1）及构建hPIN1基因正、反义真核表达载体.方法 应用RT-PCR技术从人骨肉瘤细胞系MG-63细胞总RNA中成功扩增出990bp包含hPIN1基因编码区的cDNA序列,按正、反方向加上BamHⅠ及 HindⅢ双酶切位点后形成正、反义hPIN1基因,然后连入含BamHⅠ及 HindⅢ双酶切位点的pIRES2-EGFP表达质粒上,构建正、反义hPIN1基因的重组真核表达质粒phPIN1.结果 扩增的cDNA经测秩序与基因文库完全一致;BamHⅠ及HindⅢ双酶切后,正、反义表达质粒形成5.3 ＋0.99kb 两条带,与理论计算值完全一致.结论 成功克隆正、反义人PIN1基因及构建hPIN1基因的正、反义真核表达载体.     

超低频电磁场对硝普钠诱导的软骨细胞凋亡的影响

目的:研究超低频电磁场对硝普钠诱导的SD大鼠肋骨骨骺软骨细胞凋亡的影响。方法:不同浓度硝普钠诱导软骨细胞凋亡,检测不同时间软骨细胞半数致死量(LD50)的硝普钠浓度;观察超低频电磁场对软骨细胞凋亡的影响。结果:半数软骨细胞致死的硝普钠浓度呈时间依赖性下降;经超低频电磁场和硝普钠同时作用后的细胞凋亡率明显低于单纯硝普钠作用的细胞凋亡率(P<0.05);单纯硝普钠诱导的细胞在超微结构上有典型的凋亡改变,超低频电磁场能在一定程度上恢复软骨细胞的正常结构。结论:超低频电磁场能抑制硝普钠诱导体外培养的大鼠软骨细胞的凋亡。     

预防骨科大手术后深静脉血栓形成的专家建议

骨科大手术术后易发生深静脉血栓形成（deep venous thrombosis，DVT），少数可造成肺栓塞导致死亡。有文献报道，我国骨科大手术后DVT的发生率与西方国家相当，但目前国内对DVT防治工作的重视程度远低于国外，而且没有相应的防治方案可供参考。