TGF-β1，TGF-βRII和CDK4在原发性肝细胞肝癌中的表达及其意义

摘要：探讨TGF β1，TGF βRII和CDK4的表达与肝癌临床病理因素的关系。检测57例原发性肝细胞肝癌和癌旁组织中TGF β1，TGF βRII和CDK4的表达水平，并作相关分析。结果示TGF β1在肝癌组织中的阳性表达率（82.46%），显著高于癌旁组织（66.67%）（P<0.05）；TGF βRII在肝癌组织中的阳性表达率（35.09%），显著低于癌旁组织（84.21%）（P<0.05）；CDK4在肝癌组织中阳性表达率(61.40%)，与癌旁组织中的表达（77.19%），两者差异无显著性（P>0.05）。TGF β1在有转移的患者中的表达率（92.31%），明显高于无转移者（74.19%）（P<0.05）；而TGF βRII在有包膜浸润、转移、组织分化III，IV患者中染色较浅且阳性表达率明显下降，分别为19.52%，19.23%和7.14%，明显低于相对应组的50.0%，49.39%和62.07%（P<0.01）。CDK4的阳性表达主要集中在有包膜浸润、转移、组织分化III，IV患者中（P<0.05）。TGF β1与CDK4的表达呈正相关（r=0.5848,P<0.01）。提示TGF β1过表达和TGF βRII表达下降可能增强了肝癌细胞的浸润、转移；CDK4升高可能促使肿瘤细胞对TGF β1介导的生长抑制和促进凋亡作用产生逃逸现象。     

循肝静脉入路腹腔镜肝切除术59例临床分析

目的 分析循肝静脉入路腹腔镜下肝切除术的安全性与临床效果。方法 回顾性分析2019年7月至2020年12月苏州大学附属第三医院肝胆胰外科59例循肝静脉入路腹腔镜肝切除术患者的临床资料。结果 本组35例行鞘内阻断,24例行鞘外阻断,其中51例联合Pringle阻断（15+5）min,最多阻断5次,累计75 min,22例解剖第二肝门联合肝静脉预阻断。手术时间为（155.8±71.3）min,术中出血50~600 mL,术中输血2例,无中转开腹病例。术中肝静脉修补5例,发生CO₂栓塞4例。术后胆漏4例,胸腹水7例,经保守治疗治愈,无出血、肝衰病例,无再次手术或死亡病例,术后住院时间为（7.9±5.4）d。结论 循肝静脉入路腹腔镜下肝切除技术安全可行,术中准确定位、暴露肝静脉走行是为关键,断肝过程应避免肝静脉损伤和气体栓塞。     

单层间断套入式胰肠吻合在胰十二指肠切除术中的应用

目的探讨单层间断胰肠端侧套入式吻合在经典胰十二指肠切除术(pancreaticoduodenectomy,PD)—Whipple术中的临床疗效。方法回顾性分析2010年1月至2016年7月苏州大学附属第三医院62例行单层间断胰肠端侧套入式吻合的Whipple术患者临床资料。结果本组患者全部手术成功,除1例发生胰瘘,无再手术和围手术期死亡病例。结论单层间断胰肠端侧套入式吻合方式简单、安全、实用,学习曲线较短,值得推广。     

小发夹RNA抑制人上皮生长因子受体-2基因表达细胞株的构建

目的 在经反式二羟环氧苯并芘(BPDE)恶性转化人支气管上皮细胞基础上建立一种载体介导的小发夹RNA(shRNA)抑制人上皮生长因子受体-2(HER2/neu)表达的稳定细胞株.方法 构建靶向干扰HER2/neu shRNA逆转录病毒载体pSIREN-RetroQ-neu,经酶切及测序鉴定后,将重组表达载体经脂质体介导入反式BPDE恶性转化细胞中,同时以阴性片段重组载体转染细胞(阴性对照)和空白细胞(16HBE-T)做对照,经嘌呤霉素筛选阳性转染细胞株.半定量RT-PCR和Westernblotting技术分别检测分析各组细胞中HER2/neu基因mRNA和蛋白表达差异.结果 获得载体介导靶向抑制反式BPDE恶性转化细胞中HER2/neu基因表达的细胞株.pSIREN-RelroQ-neu阳性转染细胞组分别比较阴性对照和空白细胞组HER2/neu mRNA表达量均下降(平均灰度值分别为0.114±0.003、0.186±0.001、0.182±0.015),其差异有统计学意义(t值分别为39.154、7.564,P值均<0.05),而阴性与空白对照组间相比差异无统计学意义(t=-0.409,P>0.05).pSIREN-RetroQ-neu转染细胞组相比阴性对照和空白细胞组HER2/neu蛋白表达明显下降,其抑制率分别达40%和39%.结论 成功构建pSIREN-RetroQ-neu重组质粒,并能有效抑制反式BPDE恶性转化细胞中HER2/neu表达.     

2，2’，4，4’-四溴联苯醚对SD大鼠生殖发育的影响

目的探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚（2,2’,4,4’tetrabromodiphenyl ethers,PBDE-47）对SD大鼠生殖发育的影响。方法PBDE-47设3个剂量组（1、5、10ms／kg．bw）,大豆油为溶剂对照组,对出生后第10d的清洁级（CL级）SD大鼠进行染毒。在大鼠出生后第10d、30d和60d分别进行体重、身长和尾长的检测。在大鼠2月龄时,捕杀大鼠,测定睾丸、附睾、子宫和卵巢脏器系数;同时利用气相色谱．质谱联用仪检测血清中PBDE-47浓度;利用放射性免疫法对血清中睾酮（testosterone,Ts）和雌二醇（estradiol,E2）进行检测。结果出生后第10d、30d和60d的大鼠体重、身长和尾长与同期对照组相比较,差异无显著性（P〉0．05）。SD大鼠2月龄时,与对照组比较,5、10ms／kg染毒组血清PBDE-47水平仍较高,差异有统计学意义（P〈0．05）;与对照组比较,5、10ms／kg染毒组卵巢脏器系数较高,差异有统计学意义（P〈0．05）;各染毒组睾丸、附睾和子宫脏器系数与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;5、10mS／kg染毒组血清Ts水平分别为（7．83±1．10）ng／ml、（9．41±0．08）ns／ml,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）;各染毒组血清E2水平分别为（31．004-12．00）ps／ml、（38．50±11．50）pg／ml、（44．67±3．79）ps／ml,显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论出生后第10d一次性经口暴露于一定剂量的PBDE-47对大鼠生殖发育具有一定的影响。     

军事航空噪声性隐匿性听力损失动物模型的建立与评价北大核心CSCD

目的 建立军事航空噪声性隐匿性听力损失(Hidden Hearing Loss,HHL)动物模型并从功能学方面进行评价。方法 90只雄性豚鼠随机分为3组:100dB(A)组、105 dB(A)组、110dB(A)组,不同噪声强度组再随机平均分为5组:对照组、暴露后1天组(1d PE)、暴露后1周组(1w PE)、暴露后2周组(2w PE)、暴露后1月组(1m PE)。对照组不给予噪声刺激,各实验组给予相应强度的军用直升机噪声刺激2h,在相应的时间点运用听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)、畸变产物耳声发射(distortion product otoacoustic emission,DPOAE)进行测试。结果100dB SPL噪声暴露后,豚鼠ABR阈值表现为暂时性阈移,Ⅰ波波幅、DPOAE幅值降低后可恢复至暴露前水平;105dB SPL噪声暴露后,豚鼠ABR阈值表现为暂时性阈移,Ⅰ波波幅降低后未能恢复至暴露前水平,高频区的DPOAE幅值降低;110dB SPL噪声暴露后,豚鼠ABR阈值表现为永久性阈移,Ⅰ波波幅降低后未能恢复至暴露前水平,高频区的DPOAE幅值降低。结论 105 dB SPL某型军用直升机噪声暴露后可使豚鼠出现暂时性听阈偏移,ABRⅠ波波幅降低,从功能学角度考虑,可作为军事航空噪声性隐匿性听力损失模型的理想刺激参数。     

氯氰菊酯和甲基对硫磷混配对大鼠内分泌和免疫系统的影响——Ⅰ.剂量-效应关系

目的探讨农药氯氰菊酯(Cyp)和甲基对硫磷(MP)混配对大鼠生殖激素、甲状腺激素和免疫功能的影响及其剂量-效应关系。方法健康2月龄Wistar大鼠80只,随机分为4组,氯氰菊酯和甲基对硫磷剂量分别为(0、1/600、1/135和1/30)LD50混配,即Cyp0·0、0·4、1·8和8·0mg/kg bw+MP0·0、0·0115、0·0518和0·2300mg/kg bw;对照组用色拉油,隔日对大鼠灌胃1次,共30天。测量大鼠体重增长,称量脏器湿重;用放射免疫法测定血清生殖激素指标促黄体生成激素(LH)、促卵泡成熟激素(FSH)、雌二醇(E2)和睾酮(T);甲状腺激素指标(T3、T4和TSH),以及免疫指标IgG和IgA;取血测定淋巴细胞转化率、中性粒细胞吞噬率。结果未观察到2种农药混配对大鼠体重增长的影响;肾上腺相对重量各剂量组比对照组增加(P<0·05)。血清FSH和E2水平中、高剂量组比对照组升高(P<0·05);血清TSH含量随混配农药剂量升高有上升趋势(rs=0·327,P=0·004)。淋巴细胞转化率各剂量组比对照组显著降低(P<0·01),中性粒细胞吞噬率各剂量组比对照组升高(P<0·01),血清IgG水平中、高剂量组比对照组显著降低(P<0·01);IgA水平雌鼠中、高剂量组比对照组升高(P<0·01),而雄鼠低剂量组比对照组降低(P<0·05)。以上改变均呈现剂量-效应关系。结论氯氰菊酯与甲基对硫磷混配可干扰大鼠生殖激素和免疫系统,尤其是使雌二醇水平明显增高。     

活性氧在硒致HepG2 DNA损伤中的作用

目的探讨亚硒酸钠(Na2SeO3)致HepG2细胞DNA损伤的作用机制。方法用0、2·5、5、10、20μmol/L的Na2SeO3、及分别加有还原性谷胱甘肽(GSH)和N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)的Na2SeO3(10μmol/L)处理HepG2。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞活性;流式细胞仪测细胞内活性氧(ROS)的水平以及用彗星实验检测细胞的DNA损伤。结果5、10、20μmol/L Na2SeO3作用于HepG21h即引起ROS增加,12h后即导致细胞HepG2活性下降,24h后DNA损伤增强,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0·05);抗氧化剂GSH和NAC有效抑制了ROS升高,并增强了细胞活性,减弱了细胞DNA损伤,与未加GSH和NAC的Na2SeO3组(10μmol/L)相比,差异有统计学意义(P<0·05)。结论ROS的产生可能是亚硒酸钠造成HepG2DNA损伤的重要原因。     

雌性SD大鼠围产期铅染毒对仔鼠脑细胞Brn-3a表达及凋亡的影响

目的探讨铅对中枢神经系统神经细胞内转录因子Brn-3a表达的影响及诱导细胞凋亡的作用.方法20只受孕SD大鼠随机分为4组,经围产期饮水染铅(0、0.5、1.0、2.0g/L)后,对其21日龄仔鼠不同脑区的Brn-3a蛋白表达水平进行观察,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率及应用间接免疫荧光反应测定Bcl-2蛋白的表达情况.结果染铅组大鼠大脑皮层、海马及小脑的Brn-3a蛋白表达的阳性面积比、平均灰度与对照组比较,其差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),并呈剂量依赖性的变化,Brn-3a表达低于对照组;染铅组大鼠海马组织细胞凋亡率高于对照组(P＜0.01);染铅组大脑皮层、海马、小脑部位Bcl-2蛋白表达下降(P＜0.05或P＜0.01).结论铅对发育期神经组织的损害可能与其诱导的神经细胞凋亡相关联,铅致Brn-3a蛋白表达下降可能是铅致神经细胞凋亡的途径之一.     

氟致大鼠脑细胞DNA损伤及硒锌对氟的拮抗作用研究

目的研究氟对大鼠大脑皮层神经细胞的DNA损伤及硒锌联合对其的影响.方法体内染毒后采用单细胞凝胶电泳技术检测DNA单链断裂.结果F组、FSeZn组和SeZn组细胞DNA损伤程度均显著大于对照组,各自Ridit值分别为0.364 6,0.455 7和0.527 6,显著低于对照组的0.652 2(P＜0.01),3个组相互之间的差异也具有显著性意义(P＜0.01).结论氟或硒锌合用均可造成大脑皮层神经细胞DNA损伤,硒锌对氟所致脑细胞DNA损伤具有显著的拮抗作用.