改良菌落PCR法筛选、鉴定DHBV部分核衣壳蛋白基因的重组克隆

目的优化并验证改良菌落PCR程序的有效性。方法经常规PCR扩增DHBV编码核衣壳蛋白与DNA多聚酶重叠区的部分核苷酸片段(DHBc-dp),纯化特异性扩增产物并连入pMD 18-T载体,转化DH5α感受态细胞后涂布于Amp加倍的LB平板,记为亲代样品(PS),37℃培养12h,室温放置4h～8h。无菌操作挑取细菌转入优化的PCR反应液扩增、鉴定;余菌体室温放置完成二次生长。PS剩余PCR鉴定产物继代转化并涂布LB平板,记为继1代样品(F1S),同样进行菌落PCR鉴定。选取PS和F1S中PCR强阳性样品进行扩增及菌液PCR、质粒PCR、质粒酶切和测序鉴定。结果挑菌后的菌落二次生长成面积扩大的菌苔;优化菌落PCR反应体系保持、甚或提高了原有方法的高度特应性和稳定性;携外源目的片段的重组质粒在菌落PCR反应过程中能保持结构完整,并能在继代转化宿主细胞中忠实复制与扩增。结论改进的菌落PCR程序,继承了既有菌落PCR程序鉴定重组克隆的特异性和高效性,并能有效预防阳性转化子的丢失;同时,在增加优势抗性菌落生长量的前提下有效地抑制了卫星菌落的生长。     

β-淀粉样蛋白对大鼠海马S100β表达及学习记忆的影响

目的　探讨 β-淀粉样蛋白 (Aβ)沉积与大鼠海马 S1 0 0 β表达的相关性及其在大鼠学习记忆中的作用。方法　采用不同浓度的 Aβ2 5-35选择大鼠海马 CA1区进行定位注射 ,通过行为学测试、光镜形态学观察 ,免疫组化染色的方法 ,观测大鼠学习记忆、海马 CA1区神经元和 S1 0 0β阳性细胞形态、数目的变化。结果　术后 7d,随着 Aβ2 5- 35脑内注射浓度的增加 ,实验组较对照组大鼠的学习记忆能力明显下降 (P<0 .0 5) ,海马CA1区神经元数目明显减少 (P<0 .0 5) ,而 S1 0 0β阳性细胞数则显著增多 (P<0 .0 5)。结论　 Aβ2 5- 35可以明显上调 S1 0 0β的表达 ,两者之间存在剂量效应关系 ;Aβ2 5- 35具有神经毒性作用 ,可以引起海马神经元丢失 ,造成大鼠学习记忆下降 ;S1 0 0 β的高水平表达可能与海马 CA1区神经元丢失以及大鼠的学习记忆下降有密切关系。     

中国人成人T细胞白血病/淋巴瘤12例临床分析

目的 探讨中国人成人Ｔ细胞白血病／淋巴瘤（ＡＬＴＴ）临床特征、鉴别诊断和与嗜人Ｔ细胞病毒Ｉ型（ＨＴＬＶ－Ｉ）感染的关系。方法 外周血淋巴细胞形态学检查用离心涂片法,淋巴细胞免疫分型用间接免疫荧光法,ＨＴＬＶ－Ｉ前病毒ＤＮＡ检测用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法并经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ证实。结果 １２例病人临床表现依次为发热１０例、淋巴结肿大８例、皮肤损害７例、脾、肝大７例、黄疸３例,个别有胸水和肺侵     

含HIV-1 gp120基因的重组腺相关病毒和重组腺病毒疫苗联合免疫的研究

目的 探讨含HIV-1 gp120基因的重组腺相关病毒(rAAV)和重组腺病毒(rAdV)疫苗在BALB／c小鼠中联合免疫的效果。方法 将密码子优化的HIV-1 gp120基因分别插入腺相关病毒(AAV)和腺病毒(AdV)载体质粒，构建含该基因的rAVV和rAdV载体疫苗。将两种疫苗以不同的联合方式免疫BALB／c小鼠，ELISA检测小鼠血清中的gp120特异性抗体，细胞内细胞因子染色法检测小鼠的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答。结果 两种重组病毒均可表达目的基因gp120；在小鼠体内两种重组病毒联合免疫可诱导特异性的CTL应答和血清1gG抗体反应，但用rAAV初免2次，再用rAdV加强3次所诱发的CTL和血清1gG反应最强。结论 rAAV和rAdV疫苗联合免疫可在小鼠体内诱导特异性的CTL应答和血清1gG抗体反应。     

假丝酵母菌分离鉴定及药敏试验分析

目的监测院内假丝酵母菌感染菌种的分布及耐药情况,为临床抗真菌治疗提供依据。方法患者标本接种血平板、沙保罗、巧克力培养基,28～35℃培养24～48h,挑取可疑菌落涂片,革兰染色确认为酵母样真菌后转种假丝酵母菌显色培养基进行培养鉴定分型。采用纸片扩散法进行假丝酵母菌药敏试验。结果2006年3月—2008年11月从临床送检的2 196份标本中共检出假丝酵母菌118株,检出率为5.37%,其中白色假丝酵母菌65株(55.08%)、热带假丝酵母菌22株(18.64%)、近平滑假丝酵母菌17株(14.41%)、克柔假丝酵母菌14株(11.86%);在各种标本中以痰标本假丝酵母菌检出率最高84株占71.19%;各年龄段假丝酵母菌感染分布,60岁以上老年患者所占比例较大占77.1%;药物敏感试验显示,制霉菌素对假丝酵母菌敏感性最高,敏感率为85.7%～100.0%,而两性霉素B、酮康唑、伊曲康唑、5氟-胞嘧啶的敏感性较低。结论临床感染性疾病中假丝酵母菌感染占有一定的比例,加强真菌的分离及药敏监测对提高临床治疗效果有重要意义。     

人白细胞抗原-B27在诊断强直性脊柱炎中的意义

目的 探讨人白细胞抗原-B27(HLA-B27)检测诊断强直性脊柱炎(AS)的意义.方法 应用ELISA法,对107例AS患者、70例类风湿性关节炎(RA)患者及100例健康体检者进行HLA-B27对比检测.结果 AS组HLA-B27阳性率为92.5%,RA组阳性率为7.1%,体检组阳性率为3.0%,AS组明显高于RA组和体检对照组,差异有统计学意义(χ2＝214,P＜0.01).男性HLA-B27阳性率(49.7%)明显高于女性(14.8%),差异有统计学意义(χ2＝30.9,P＜0.01).不同年龄组HLA-B27阳性率有明显差异,30岁以下年龄组明显高于其他年龄组.结论 HLA-B27与AS具有很强的相关性,检测HLA-B27对于AS的早期诊断和鉴别具有重要意义.     

葛根素对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响

目的：应用Aβ25-35孵育PC12细胞株制作细胞损伤模型,以研究葛根素对模型细胞凋亡的影响。方法：用Aβ25-35和葛根素对PC12细胞进行处理,MTT法检测干预后不同时间点的细胞活性,电镜观察细胞形态的改变,异硫氰酸荧光素（FITC）标记的AnnexinⅤ及碘化丙锭（PI）双染流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,以确认药物的保护作用。结果：PC12细胞经过Aβ25-35处理后,细胞生存率下降,且呈现时间依赖性。电镜观察显示Aβ25-35可导致PC12细胞凋亡,使用葛根素后,模型细胞凋亡情况明显改善。流式细胞技术显示Aβ25-35损伤模型组凋亡率明显升高,使用葛根素后,细胞凋亡率下降,具有显著性差异（P〈0.05）。结论：葛根素可拮抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,具有一定的神经细胞保护功能。     

HIV-1 C亚型Gp120蛋白表达、纯化及其抗体制备的研究

目的 制备HIV-1 C亚型Gp120蛋白及其抗体.方法 用PCR技术从表达C亚型HIV-1全长gp16O基因的质粒上扩增gP120基因羧基末端部分片段,其长度为612个核苷酸,编码204个氨基酸.将测序鉴定正确的gp120基因片段克隆到原核表达载体pET-30a上,以包涵体的形式在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,Gp120蛋白C端融合6×His标签便于纯化.将纯化的蛋白免疫新西兰大白兔制备C亚型Gp120特异性兔多克隆抗体,用间接ELISA法测定抗体滴度,并用Western Blot方法验证该抗体是否可识别在哺乳动物细胞内表达的C亚型Gp160蛋白.结果 成功地获得高纯度的C亚型Gp120融合蛋白,用其制备的多克隆抗体滴度可达1:204 800,该抗体可特异性识别在COS-1细胞中瞬时表达的C亚型Gp160蛋白.结论 获得了高纯度的C亚型Gp120融合蛋白及其高效价的抗体.     

607例血液肿瘤科医院感染患者的病原菌分布及耐药性分析

目的 分析血液肿瘤科患者医院感染病原菌分布及其耐药现状.方法 收集2009年1月-2010年12月住院患者医院感染的临床标本分离病原菌,药敏试验采用K-B纸片扩散法.结果 5678例出院患者发生医院感染607例、692例次,感染率为10.69％、例次感染率为12.19％;感染部位呼吸道、胃肠道、泌尿道为前3位,占全部医院感染的86.13％;两年共分离401株细菌,其中革兰阴性杆菌198株,占49.38％,革兰阳性球菌57株,占14.21％,真菌146株,占36.41％;铜绿假单胞菌对6种抗菌药物耐药率＞50.00％,而鲍氏不动杆菌虽然检出株数少,但耐药率较高,除美罗培南外,对所检测的其他抗菌药物耐药率均≥50.00％,未检出耐万古霉素革兰阳性球菌.结论 医院感染以革兰阴性杆菌为主,真菌呈上升趋势,对常用抗菌药物耐药率较高,定期对细菌耐药性监测,为临床合理使用抗菌药物、控制医院感染具有重要意义.