乳腺癌中NDRG-1基因甲基化状态研究

目的 研究NDRG1基因启动子区甲基化状态,探讨NDRG-1基因甲基化在乳腺癌发生中的作用.方法 采用双色荧光杂交微阵列基因芯片技术对33对乳腺癌标本和癌旁组织标本NDRG-1基因启动子区甲基化状态进行研究.结果 肿瘤标本和癌旁组织标本中NDRG-1基因启动子区CpG位点均有不同程度的甲基化,肿瘤组织中NDRG-1基因启动子区CpG位点甲基化率明显高于相应的癌旁组织(t=14.12,P＜0.05).结论 NDRG-1基因启动子区过甲基化可能在乳腺癌的发生过程中起重要作用.     

一种中药鉴定gDNA芯片的制备与展望

中药鉴定是中药质量控制系统的首要环节,中药鉴定技术的不断发展提高了药材品质评价水平。至今,中药鉴定技术经历着从传统生药鉴定学的细胞和亚细胞水平向遗传物质DNA分子水平发展的历程,运用DNA芯片技术进行中药鉴定成为中药鉴定发展的方向之一。介绍了筛选gDNA种特异性探针的抑制性差减微阵列“SSH-ar-ray”新技术,该技术是将抑制性差减杂交与基于尼龙膜微阵列杂交相结合。以名贵中药材石斛5个品种作为实验材料,首先是用抑制性差减杂交获得2个品种之间的gDNA差异片段,然后用这些gDNA差异片段与由所有研究品种的gDNA制备成的微阵列杂交筛选到某一个品种的种特异性gDNA片段。这些种特异性gDNA探针作为种特异性探针进行物种鉴定。在此基础上建立中药鉴定gDNA芯片的方法并对其应用进行了展望探讨。     

蛋白质芯片技术及应用

在高密度微孔板技术和DNA微阵列技术的基础上发展起来的蛋白质芯片技术,能够在蛋白质水平上进行基因高通量表达分析,从而成为蛋白质组学研究的有效方法。蛋白质芯片依靠手工、压印或喷墨的方法将探针蛋白点样在化学膜、凝胶、微孔板或玻片上形成阵列,经过与样品的杂交捕获靶蛋白,再用原子力显微镜、磷光成像仪、光密度仪或激光共聚焦扫描仪进行检测,获得靶蛋白表达的种类、数量及关联等信息。蛋白质芯片已经用于研究蛋白质表达谱构成及变化、蛋白质与生物分子(蛋白质、核酸、配体等)的相互作用、抗原体筛选、酶与底物相互作用。蛋白质芯片在医学临床诊断、疗效分析和药物筛选方面具有潜在的重要应用价值。     

近红外光学成像技术检测视觉搜索任务期间大脑前额叶氧合血红蛋白水平变化

目的 研究视觉搜索对大脑前额叶氧合血红蛋白水平变化的影响.方法 25名右利手健康大学生被试者在一列非靶字母中搜索靶字母,依据非靶字母数目(2个或6个),将任务分为2个水平(任务1或2).实验期间同时记录被试者行为反应和前额叶脑区氧合血红蛋白水平变化.结果 1)与任务1相比,任务2期间被试者反应时延长、正确率下降,前额叶脑区氧合血红蛋白水平明显上升;2)任务2期间被试者前额叶脑区激活水平与反应时呈负相关.结论 前额叶区域氧合血红蛋白反应与视觉搜索行为结果相一致,较高的氧合血红蛋白水平有可能缩短行为反应时间.     

异硫氰酸苯己酯降低U266细胞株p16基因甲基化的研究

本研究探讨异硫氰酸苯己酯对p16基因高甲基化的多发性骨髓瘤U266细胞株是否有去甲基化的作用。用异硫氰酸苯己酯0、5、10μmoL／L孵育U266细胞株，提取DNA备用。用亚硫酸氢盐处理正常人基因组DNA，并以此为模板进行PCR扩增。设计1组特殊荧光标记探针以构建1种检测p16基因启动子区3个CpG位点甲基化改变的芯片，特殊荧光标记探针包括1对非甲基化探针和甲基化探针，检测相邻的3个CpG位点甲基化的程度。采用基因芯片的方法，将完全未甲基化的DNA和完全甲基化的DNA混合后制成标准曲线，将U266细胞株样本处理后点在芯片上与标准曲线进行比较后得出定量检测的结果。结果表明：芯片上探针的可重复性和精确性很好，0、5、10μmol／L异硫氰酸苯己酯处理后的U266细胞株p16基因的甲基化程度分别为78．2％、61．7％、54．8％。结论：异硫氰酸苯己酯可以降低U266细胞株p16基因甲基化的程度。     

DPYD多态性与中国人群胃癌患者应用氟尿嘧啶为基础的辅助化疗的临床结果

背景:二氢嘧啶还原酶,5-FU代谢的关键酶,是药物遗传学研究5-FU疗效及毒副作用的热点之一。本研究旨在探讨DPYD多态性与中国人群中胃癌患者应用氟尿嘧啶为基础的辅助化疗的临床结果之间的关联性。 方法：362名中国胃癌患者应用氟尿嘧啶为基础的方案化疗。采用基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对治疗前从患者外周血中提取的DNA样本进行DPYD基因单核苷酸多态性的检测。 结果：平均化疗有效率为46.7%。rs1801159位点的基因型分布在化疗有效组及无效组中存在显著性差异(χ2=8.76, p=0.012)。其中rs1801159A/A野生纯合子在化疗有效组中更多见,而rs1801159A/G基因型携带者在化疗无效组中更常见。单倍型分析发现两组间的单倍型分布有显著性差异(χ2 = 3.96,p = 0.0465)。 结论：rs1801159位点多态性也许可用以预测中国胃癌患者应用氟尿嘧啶为基础的方案的化疗反应,进一步明确DPYD基因多态性的预测价值还需要设计更优的、综合的、前瞻性的研究。     

定量检测E-cadherin基因启动子区甲基化芯片的建立

目的：拟建立一种能够定量检测抑癌基因E-cadherin甲基化改变的基因芯片.方法：用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,并以此为模板进行PCR扩增.目的序列中未甲基化的CpG住点被翻转成TpG,而甲基化的CpG位点保持不变.设计5组探针构建一种检测E-cadherin基因启动子区17个CpG住点甲基化改变的芯片,每组探针包括一对非甲基化探针和甲基化探针,检测相邻的3或4个CpG位点.结果：绘制标准曲线显示,芯片上探针的可重复性和精确性很好,并定量检测了1例白血病样本的甲基化改变.结论：基因芯片能够作为一种定量检测基因多个CpG位点甲基化改变的有效工具,并用于肿瘤的研究.     

母亲抑郁对6、14月龄婴儿气质评估的影响

目的:探讨母亲抑郁倾向对母亲报告的婴儿气质是否有影响。方法:采用母亲问卷报告让269位母亲在婴儿6、14个月时报告婴儿气质及其自身的抑郁程度。结果:婴儿从6～14个月气质具有稳定性,6个月时高、中、低抑郁型的母亲报告的婴儿活动性水平差异有统计学意义,但是14个月时没有出现。6、14个月时高、中、低抑郁性母亲均报告的婴儿受限后水平差异有统计学意义。结论:母亲抑郁倾向对婴儿气质确实存在影响,高抑郁性母亲报告的婴儿气质存在偏差。     

三维聚丙烯酰胺凝胶DNA芯片用于大样本单核苷酸多态分型的方法研究

目的 建立三维聚丙烯酰胺凝胶DNA芯片用于大样本单核苷酸多态(single nucleotide polyrnorphisms,SNP)分型的方法.方法 丙烯酰胺基团修饰的PCR产物与丙烯酰胺单体混合后,在丙烯酰胺基团修饰的玻片上点样进行共聚合,建成三维凝胶DNA阵列;芯片与一对特异探针和一对分别标记了Cy3或Cy5的通用序列标签(Tag1和Tag2)进行杂交;杂交后用施加电场的方法去除非特异吸附和错配,最后通过双色荧光共聚焦扫描进行SNP分型.结果 3-D凝胶芯片不但具有很高的固定效率,而且可以提供高效的杂交环境;通用序列标签的使用木需对每个位点都标记荧光,使检测成本大幅降低;外加电场使得单碱基错配容易识别,且能显著降低芯片的信噪比.结论 基于3-D凝胶的基因芯片技术用于大样本SNPs分型简单易操作,且高通量、高特异性、低成本,该方法将可以更广泛地应用于不同需求的DNA检测中.     

基因芯片技术在药物研究和开发中的应用

基因芯片技术能够对细胞或生物体中核酸序列信息进行快速、高通量和低成本的检测和分析。基因芯片已在化学药物的筛选和评价,新的药物作用靶分子的确定,药物的代谢和一生及其个体化差异的检测,以及药物作用机理等方面得到了应用,并将为在分子水平上建立现代中药理论方面发挥重要的作用。