Purification and identification of HIV-1 gag p20 protein expressed in E.coli

The human immunodeficiency virus type 1 gag p20 gene fragment was clonedinto plasmid pBV220 to construct a recombinant expression plasmid pCY7.By induction,the p20 protein was expressed in E.coli,and it was confirmed by Western blotting thatthe expressed p20 protein could be specifically recognized by anti-p17 monoclonalantibodies.The recombinant bacteria was lysed and fractionated into snpernatant andprecipitate by centrifugation.It was found that the p20 protein was present chiefly inthe precipitate.After p20 protein being washed twice,its purity reached 27.4%.Then theprecipitate was washed with 1 mol/L urea solution and the purity of p20 protein wasraised to 58.1%.Finally,the precipitate was dissolved in 6mol/L of urea and appliedonto a heparin affinity column.Four peaks were obtained and the p20 protein wasfound mainly in peak 3.The purity of p20 protein at this step reached 84.2% as meas-ured by gel scanning.     

荧光偏振技术在单核苷酸多态性及基因型检测中的应用

单核苷酸多态性及基因型检测在多种疾病的诊断、病原体检测、组织配型、疾病预警及指导药物应用中具重要的临床价值。荧光偏振检测技术因不需特制探针、简单、敏感、成本与芯片等DNA高通量检测技术相比较为低廉 ,有在临床推广应用的价值。     

人骨肉瘤中5个新基因片段在不同骨肿瘤中的差异表达

目的 筛选数个在人骨肉瘤中检出率高的差异表达基因片段并探讨其临床意义。方法 以筛选出5个新基因片段作为研究对象，采用RT－PCR技术检测37例骨肉瘤，68例其他骨肿瘤及19例截除肢体上的正常骨组织标本。结果 在37例骨肉瘤中，表达检出率高的5个片段依次为：ZOL03为92．6％，1C82为89．4％，1C74为73．9％，2G12为66．5％，2A21为53．7％；在23例骨软骨瘤中表达率依次为：ZOL03为6．5％，1C82为14．7％，1C74为8．3％，2G12为11．9％，2A21为12．2％；在29例骨巨细胞瘤中表达率依次为：ZOL为8．3％，1C82为15．6％，1C74为12．5％，2G12为13．8％，2A21为5．4％；在16例软骨肉瘤中表达率依次为：ZOL03为9．4％，1C82为14．3％，1C74为7．5％，2G12为6．8％，2A21为6．2％；在19例正常骨组织标本中表达率依次为：ZOL03为0，1C82为6．4％，1C74为0，2G12为4．8％，2A21为3．9％，这5个基因片段检出率在骨肉瘤与其他骨肿瘤中存在显著差异（P＜0．01）；其检出率与骨肉瘤与正常骨组织中存在显著差异（P＜0．01）。结论 ZOL03，1C82，1C74，2G12及2A21这5个基因片段可能与骨肉瘤的发生，发展有关，监测骨组织中此5个基因片段的表达水平的变化可能对骨肉瘤的早期发现更有意义。     

直接用细菌重组体进行聚合酶链反应及其在克隆鉴定中的应用

作用不需提纯ＤＮＡ模，可直接从质粒的宿主菌中扩增插入片段的方法进行扩增和克隆鉴定。结果说明，该方法不但在扩增的灵敏度和特异性与经用酚氯仿抽提纯化的质粒ＤＮＡ作模板一致，使质粒鉴定的时间由原来４８－７２ｈ缩短至２－８ｈ，而且节省了细胞培养及质粒纯化过所用的试剂及器械。特别是对于无法用酶切法鉴定的克隆有特殊意义。     

抗体酶的研究进展

抗体酶,又称催化抗体(Abzymes or Catalytic Antibody),是1986年底才出现的一种新的生物工程技术。在这短短的几年里,抗体酶已由催化简单的酯解反应,发展到具有多种催化功能,对多个学科都具有较高的理论和实用价值的一类新型蛋白质。它已经引起了广泛的关注,并将发挥更大的作用。本文拟就抗体酶的研究进展作一综     

高通量apoE基因分型技术的建立及应用

目的建立一种准确、快速、高通量的apoE基因分型技术。方法从外周血样品提取基因组DNA，PCR扩增覆盖第112和158密码子的apoE基因片段；构建apoE基因片段重组质粒，并进行定点诱变，以得到3种等位基因型的对照样品；PCR产物消化处理，以除去残余的引物和dNTPs；进行模板指导的荧光染料标记终止碱基的掺入反应，应用荧光偏振检测仪分析荧光偏振值的变化；检测79例阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)患者和63名健康老年人的apoE基因型，分析基因型与AD易感性之间的关系。结果对分析结果进行测序验证，表明模板指导的荧光染料标记终止碱基掺入-荧光偏振检测技术分析结果与测序结果完全相符。AD组和健康对照组样品的基因分型结果提示apoEε4等位基因是迟发型AD的危险因素。结论应用此技术进行apoE基因多态性的基因分型分析，具有准确、简易和高通量等优势，可以作为AD风险分析的一种新技术．也适于apoE基因与其他疾病相关性研究时的大规模基因筛查分析。     

全自动(定量PCR)基因扩增诊断仪配套定量试剂的研制

目的 研究一种能用于仪器操作的灵敏、快速、特异的定量试剂。方法 使用一个生物素标记的上游引物,对HBV DNA及其竞争模板DNA进行不对称PCR扩增,使扩增出的单链带有生物素,并可结合在固定有链亲合素的微孔板的表面,用标有辣根过氧化物酶的待测模板探针和竞争模板探针分别与两个微孔中固定的相应单链PCR产物杂交,而后加底物显色,测定吸光度进行分级定量分析。结果 该定量方法可以检测10拷贝数的模板,而且对简单处理的标本适应性强;以分级定量的形式定量时,具有良好的重复性。结论 该试剂适用于仪器操作,可对临床血清中HBV DNA进行分级定量分析。     

人乳头瘤病毒11型主要衣壳蛋白L1基因的克隆及序列分析

目的 从临床尖锐湿疣标本克隆人乳头瘤病毒（HPV）11型主要衣壳蛋白L1基因,进行序列测定及序列分析比较,以为研究该临床病毒株的免疫原性及流赞美同学奠定基础。方法 以临床尖锐湿疣标本总DNA为模板,用L1基因保守区简并引物以PCR方法分段扩增衣壳蛋白L1基因在部,重组入pGEM-3zf(-)质粒载体,以双脱氧法双向测定插入片段序列,拼接出L1基因序列,通过BLAST2.0与已报道序列进行比较。结果 从西安地区一尖锐湿疣临床标本克隆到的一株HPV11型L1蛋白编码序列与一文献报道大部分相同,但有些位点有点突变,结论 构建的pGEM-3zf(-)重组质粒为进一步通过杂交、体内分段表达等手段研究研究该株病毒L1蛋白的免疫学和流行病学性质创造了条件。     

生物芯片技术研究幽门螺杆菌的应用

分子生物学技术已越来越多的应用于幽门螺杆菌Hp的检测,检测的主要靶分子为抗Hp抗体、Hp抗原和Hp基因组。以ELISA,金标记和PCR技术为主体的分子生物学诊断技术在Hp诊断中所发挥的作用越来越大。随着分子生物技术的飞速发展,各种高新生物技术不断诞生,给Hp的分子诊断带来了新的起点和高度,现结合作的一些研究工作,主要就生物芯片技术在Hp诊断中的应用前景做一简述。