宫颈癌HPV16 型L1基因的克隆和序列分析

目的 获取人乳头瘤病毒16(HPV16)晚期表达基因L1，为HPV感染的检测和诊断奠定基础。方法 收集宫颈癌组织标本，设计一对L1基因特异引物，用PCR方法从宫颈癌组织中获得L1基因片段，构建人克隆载体pGEM—T，双向测定插入片段序列并进行序列分析。结果 这一株HPV16型L1蛋白序列，与既往报道的L1序列高度同源。结论 构建的重组质粒为进一步研究L1蛋白的表达及其免疫学创造了条件。     

提取成熟骨组织总RNA的新方法

1 材料和方法 1.1 材料取三组正常成年SD大鼠股骨,以下用XHF-1型高速离散器按文献操作[1]. 1.2 方法选取三种提取总RNA的方法,即:A-按Trizol说明书进行;B-同A,其中氯仿抽提重复2次;C-同A,产物以DNA酶消化后再加Trizol重复A. 对结果进行RT-PCR验证,各取等质量RNA按Invitrogen说明书进行反转录,得到的cDNA进行I型胶原的PCR扩增.     

应用滴金免疫法检测血清甲肝病毒IgM抗体

甲型病毒性肝炎是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的急性传染病。目前临床广泛使用的病原学检测方法多为酶联免疫法(ELISA)检测甲肝病毒IgM抗体(抗-HAV-IgM),该方法具有较高的灵敏度和特异度,但检测时间相对较长,一般不适合单人份检测,操作相对复杂。我们应用的滴金免疫法(Dot Immunogold Filtration Assay,DIGFA)快速检测血清抗-HAV-IgM具有简便、快速、准确等优点。现报告如下。     

多聚抗原肽免疫磁珠在制备单表位抗体中的应用

目的： 建立用多聚抗原肽（multiple antigen peptides, MAP）包被磁珠制备单表位抗体的方法.方法： 通过Fmoc法固相化学合成UreB的8分支单表位MAP, 将其作为免疫原免疫小鼠, 获得多克隆抗血清.将MAP以共价偶联的方式包被磁珠制备免疫磁珠（immunomagnetic beads, IB）, 通过IB从多克隆抗血清中纯化单表位抗体, 荧光偏振（fluorescence polarization, FP）法鉴定抗体的特异性, SDS-PAGE鉴定抗体纯度, 紫外分光光度法测定其回收率.结果： 合成的MAP具有较强的免疫原性, 免疫小鼠后得到的抗体滴度高达1∶ 12 800.MAP制备免疫磁珠的最佳包被浓度为100 mg/L, 包被效率最高可达79%.应用MAP免疫磁珠从抗血清中纯化得到的单表位抗体, 经鉴定与其他抗原表位无反应性, 其纯度为95%, 抗体的回收率为5.8%.结论： MAP包被的磁珠可快速分离纯化出针对某一抗原表位的特异性抗体, 其性质类似单克隆抗体.这一方案在快速制备少量高特异性抗体中具有广阔的应用前景.     

人表皮细胞生长因子基因真核表达质粒pcDNA3-hEGF的构建

目的 :构建人表皮细胞生长因子 (hEGF)基因真核表达质粒 ,为深入研究hEGF在组织修复中的分子调节机制及临床应用提供物质基础。方法 :含hEGFcDNA的pUC18-hEGF质粒于大肠杆菌JM10 9内扩增 ;提取及纯化pUC18-hEGF质粒 ;经DNA序列分析其所含hEGFcDNA ;限制性酶切hEGFcDNA片段 ,连接酶连接到真核表达质粒pcDNA3 -neo内 ,克隆出真核表达质粒pcDNA3 -hEGF ;再经限制性酶切鉴定hEGF表达质粒。结果 :提取及纯化的pUC18-hEGF质粒含有大小正确的hEGFcDNA碱基片段 ,其碱基序列为编码目的基因的正确序列 ;凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3 -hEGF内。结论 :成功地构建了hEGF基因的真核表达质粒pcDNA3 -hEGF。     

硒对大鼠肝细胞核糖体相关蛋白质含量的影响

本文通过高、超速差速分步离心肝组织匀浆,并用高浓度盐溶液洗涤核糖体沉淀得核糖体相关蛋白质粗制品,然后经 Sephadex 柱层析,SDS—PAGE 电泳将其分离。结果显示,低硒组大鼠肝核糖体相关蛋白质的种类和数量均此西安组低,加硒能一定程度改善上述变化。从而说明,硒可以通过改变机体核糖体相关蛋白质而影响其蛋白质的合成。     

PCR对352例泌尿生殖道淋球菌感染检测分析

ＰＣＲ对３５２例泌尿生殖道淋球菌感染检测分析邹菊贤，李陕区，阎小君，刘茂贤（第四军医大学唐都医院检验科西安７１００３８第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所）关键词淋病双球菌，ＰＣＲ检测中图号Ｒ３７８．１６性传播疾病是当前世界上广泛流行的传染病，其中...     

斑点金免疫滤渗试验快速测丙型肝炎病毒抗体方法的初步研究

建立胶体金虑虎试验用于快速检测丙型肝炎ＩｇＧ抗体，将丙型肝炎抗原固相在硝酸纤维素薄膜上，用来捕获血清标本中的抗ＨＣＶＩｇＧＡ，通过胶体金标记ＳｐＡ而显色。整个试验过程仅需２－４ｍｉｎ。用本法与ＥＩＡ对比检测血清标本１３１份，两法均阳性４９份，阴性７８份，总符合率为９７％。     

胃癌高发区14岁及以下儿童幽门螺杆菌感染及细胞毒素相关蛋白A阳性幽门螺杆菌感染的检测分析

目的　对胃癌高发区 (西安地区 )≤ 1 4岁儿童进行幽门螺杆菌 (Hp)感染及细胞毒素相关蛋白A(CagA)阳性Hp感染的血清学检测 ,以了解各年龄段Hp的感染率及CagA阳性Hp的感染率。 方法　采用斑点金免疫渗滤法检测末梢血清中抗Hp尿素酶IgG及抗Hp -CagA -IgG ,共检测 1 4 1 5人 ,其中市区儿童 791人 ,市郊儿童 62 4人。 结果　小儿Hp感染并非逐龄连续性增高 ,但总体趋势是随年龄的增加而增高 ,≤ 4岁Hp的感染率在市郊明显高于市区 ;在Hp感染者中 ,市区及市郊小儿CagA阳性Hp感染率分别为2 9.60 %～ 55 .0 0 %及 2 3 .53 %～ 58.33 % ,≤ 4岁CagA阳性Hp感染率分别 37.50 %～ 55 .0 0 %及 2 3 .53 %～ 58.33 %。统计学分析两地间差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论　本地区小儿CagA感染菌株可能为相同的Hp菌株感染 ,本地区消化性溃疡及胃癌高发可能与CagA阳性Hp菌株感染有密切关系。重视儿童期CagA阳性Hp感染的血清流行病学研究 ,对减少成年消化疾病发病率 ,提高民族健康素质具有深远的意义。     

滴金免疫法快速检测肾综合征出血热血清特异性IgM的研究

目的建立一种快速、敏感、适于基层应用的检测肾综合征出血热患者血清特异性ＩｇＭ的方法。方法将汉坦病毒核蛋白点于硝酸纤维薄膜上，用来捕获血清标本中的肾综合征出血热病毒特异性ＩｇＭ，通过胶体金标记的抗人μ链单克隆抗体直接显色，阳性者出现红色斑点。结果整个试验过程仅需２～４分钟，操作简单。用该法与酶联免疫吸附试验对比检测４５份肾综合征出血热患者血清标本，两法均阳性为４１份，两法均阴性为２份，总符合率为９６％。结论滴金免疫法简便、快速，适于基层应用，可用于肾综合征出血热的早期诊断及流行病学研究。