宫颈癌与HLA等位基因DQB1*03、DR15的相关性研究

目的: 探讨我国陕西地区宫颈癌的发生与人类白细胞抗原(HLA)-DQB1*03、DR15等位基因的相关性.方法: 采用序列特异性引物的聚合酶链式反应(PCR-SSP)方法,扩增HLA等位基因DQB1*03、DR15的目的DNA片段(分别为79、197 bp),分析两对等位基因在陕西地区宫颈癌患者和正常人中分布频率的差异.结果: 45名宫颈癌患者组中DQB1*03等位基因频率显著高于50名健康对照组,DR15等位基因频率在两组中的分布无显著差异.结论: HLA等位基因DQB1*03可能与宫颈癌的发生具有相关性,DR15可能与宫颈癌的发生不存在关联.     

用单表位合成肽抗原荧光偏振免疫法检测抗幽门螺旋杆菌尿素酶的抗体

目的:应用单表位合成肽抗原,建立一种新的基于荧光偏振技术(fluorescencepolarization,FP)的抗体检测方法。方法:用幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B(UreB)的单表位合成分支肽抗原免疫小鼠,以ELISA法分析免疫的效果。分析FITC标记的合成肽抗原在不同浓度时的FP值,用FP技术分析抗原表位的抗原性以及不同稀释比例的血清样品对FP检测的影响。分别应用FPIA法和ELISA法,对126例样品进行Hp感染检测,对FPIA的检测数据进行受试者工作特征曲线(receiveroperatingcharacteristiccurve,ROC)分析。结果:UreB的单表位抗原肽具有较强的抗原性和免疫原性;1.0nmol/L的FITC标记肽可用于FPIA检测,血清样品做1∶25稀释时可明显区分阳性和阴性检测结果。与ELISA方法检测的结果相比较,用基于UreB单表位合成肽抗原的FPIA法检测Hp感染的灵敏度为85.7%,特异度为98%。结论:应用UreB单表位合成肽抗原,可对抗UreB的抗体进行快速FPIA检测,用此法检测抗体在疾病的临床诊断中具有广阔的应用前景。     

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与Hp相关性胃疾病的关系

现已确认,幽门螺杆菌（Ｈｐ）是慢性萎缩性胃炎及消化性溃疡的主要致病因素之一,与胃癌的发生有密切关系。人群中Ｈｐ的感染率在５０％以上,其中６０％～８０％的Ｈｐ具有单拷贝的细胞毒素相关蛋白基因Ａ,产生细胞毒素相关蛋白Ａ（ＣａｇＡ）。研究表明,产生ＣａｇＡ...     

西安地区Hp及cagA+亚型Hp感染的血清流行病学研究

目的 对胃病高发区的西安地区城市及农村自然人群Hp及(CagA-Hp)感染状况进行血清流行病学调查,以期了解各年龄段Hp及CagA-Hp感染状况以及与胃癌等胃疾病的关系。方法 对胃癌高发区的西安地区城市及农村自然人群2134人及525例胃病患者进行现况调查。并使用斑点金免疫渗滤法(DIGFA)对被调查者末梢血血清行抗Hp-尿素酶IgG(抗HpU-lgG)及抗Hp-CagA-IgG检测,检测结果进行统计学处理。感染率用百分数表示,做x2检验,P     

幽门螺杆菌vacA基因毒性相关片段原核表达载体的构建和表达

目的 构建幽门螺杆菌（Hp)vac A基因片段原核表达载体并进行表达。方法 采用PCR技术,扩增Hp vac A基因的1个片段B,并克隆入pGEM－3Zf(-)质粒。测序正确后,再克隆入质粒pRSETA中,构建重组表达载体pRSETA-B。结果 经过转化E.coli BL21 DE3(plysS)后,诱导表达出相对分子质量（Mr)为33000的蛋白。SDS－PAGE分析显示,表达量占全菌总蛋白质的47．8％。清中目的蛋白占全菌总蛋白的10．9％。ELISA和Western blot分析表明,表达蛋白能与免抗Vac A多抗结合。结论 成功地构建原核表达载体pRSETA-B,为进一步探讨该片段的生物学活性,以及临床上通过检测患者血清预测Hp的感染提供了实验依据。     

多重PCR扩增HBVDNA，HCVRNA和HDVRNA方法的建立

多重ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ，ＨＣＶＲＮＡ和ＨＤＶＲＮＡ方法的建立阎小君，肖乐义，李陕区，苏成芝，郭晏海（全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３）关键词聚合酶链反应；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；丁型肝炎病毒中图号Ｑ５２３乙型肝炎病毒（ＮＢＶ）和丙型...     

多重PCR快速检测血清中HAVRNA和HBVDNA

多重ＰＣＲ快速检测血清中ＨＡＶＲＮＡ和ＨＢＶＤＮＡ肖乐义，阎小君，李陕区，郭宴海，苏成芝，侯瑜，刘君，陈远鑫（全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３）关键词多重聚合酶链反应；甲型肝炎病毒；乙型肝炎病毒中图号Ｒ５１２．６约７０％病毒性肝炎为甲肝病毒...     

多重斑点金免疫测定法快速检测HAVHBV和HCVIgM的初步研究

多重斑点金免疫测定法快速检测ＨＡＶＨＢＶ和ＨＣＶＩｇＭ的初步研究肖乐义，阎小君，陈远鑫，李陕区，郭宴海，苏成芝，侯瑜，刘君（全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３）关键词斑点金免疫结合试验；甲型肝炎病毒；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；免疫球蛋白Ｍ中...     

采用竞争性定量PCR检测幽门螺杆菌cagA基因

目的建立竞争性定量 PCR 检测幽门螺杆菌 cagA 基因的方法。方法以重组 PCR 将乳糖操纵子中 Lac 阻抑蛋白特异性结合序列(21bp)重组入 cagA 基因397bp 的片段中构建内参标模援(rfcagA)。体外克隆并表达具有双功能的 GST-LacI 融合蛋白,其一端只有 GST 酶活性,另一端可特异性地与重组内参标模板结合。在定量 PCR 中,以 rfcagA 为内参标模板,pMC3 或 Hp 基因组 cagA 作为竞争性模板,PCR 产物的5′-端标记了生物素,可与包被了亲和素的微孔板结合,只有 rfcagA 的 PCR 产物可与融合蛋白结合而显色。结果 GST 底物的显色程度与样本的 ca-gA 含量呈负相关,当反应体系中的起始模板量为10-10~5拷贝,循环次数小于等于20次。原始模板数以指数方式增长,并建立了原始模板的考贝数与 A_(340)值同的标准曲线。用该方法检测12份已知菌株中的 cagA 含量,8份 cagA 阳性,cagA 基因的拷贝数为6.3×10~(10)-2.14×10~(11)/L,特异性为100%,敏感度达可检出 cagA 基因2倍的差别。结论这是一个特异、敏感及很实用的定量检测 cagA 基因的方法。