宫颈癌组织高危HPV18 L1基因的克隆及序列分析

 目的克隆和分析人乳头瘤病毒18型晚期表达基因L1序列,为HPV感染的检测和基因工程疫苗研制提供基础。方法采用PCR技术扩增了1例HPV18阳性宫颈腺癌患者癌组织中HPV18L1基因,并对其进行了克隆及全序列分析。结果本例宫颈癌临床标本HPV18L1基因与GenBank收录的原型比较有12个碱基变异,推导其编码的氨基酸也发生了变化。结论本例中国人宫颈癌HPV18L1基因有一定的变异。     

巢式聚合酶链反应扩增幽门螺杆菌尿素酶基因

选用位于幽门螺杆菌（Ｈｐ）尿素酶Ｂ基因上３个引物组成的巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ），成功地对Ｈｐ标准菌株及２１４例临床标本进行了扩增，并对样品的准备、ＰＣＲ反应物的组成及ＰＣＲ循环条件方面作了深入的研究，简化了操作程序，缩短了操作时间，降低了消耗。与既往所用的尿素酶试验及Ｗａｒｔｈｉｎ－Ｓｔａｒｒｙ银染色进行比较，显示其具有特异性强、灵敏度高、方法简便、快速且准确等特点，可作为常规检查在临床应用。     

幽门螺杆菌细胞毒素相关抗原A的表达纯化及其临床研究

目的　 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性在亚洲有不同报道 ,本研究应用重组幽门螺杆菌毒素相关抗原 A (Cag A)建立检测血清中抗 Cag A抗体的方法 ,以探讨本地区 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性 .方法　构建表达幽门螺杆菌 Cag A抗原的表达载体 ,工程菌经 IPTG诱导 ,表达的 Cag A包含体经 Ni柱纯化 ,变性、复性、透析并经活性鉴定后 ,抗原被点在硝酸纤维素膜上或用以包被 EL ISA板 ,建立检测正常人及胃癌患者血清抗 Cag A抗体的 DIGFA(斑点金免疫渗滤试验 ,简称滴金法 )和 EL ISA法 .结果　重组克隆 p RSETcag A的工程菌可表达 Mr36 0 0 0的目的蛋白 ,表达形式为包含体 ;Cag A包含体经纯化后 SDS- PAGE显示纯度达 98%以上 ,活性经 EL ISA证实 ;正常人 6 4例及胃癌患者血清 5 0例中 ,cag A+ Hp的感染率分别为 2 9.7%和6 2 .0 % ,胃癌患者 cag A+ Hp的感染率明显高于正常人 (P<0 .0 1) .结论　我们建立的检测血清抗 Cag A抗体的 DIGFA和EL ISA均具有良好的可重复性 ;胃癌患者 cag A+ Hp的感染比例明显高于正常人 ,Cag A阳性幽门螺杆菌的感染与胃癌有关 ,Cag A可作为制备防治 cag A+ Hp感染的疫苗的后备抗原 . Cag A可作为幽门螺杆菌疫苗制备的候选抗原 ,检测患者血清幽门螺杆菌 Cag A抗体 ,有可能为胃癌的发     

用PCR产物的探针杂交显色法快速检测血清中HBV DNA

0引言PCR技术已广泛应用于血清HBVDNA的检测方面，但目前所普遍采用的以琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物的方法敏感度低，要求PCR循环的次数应足够多，且操作繁琐，不适宜于大量标本的检测．我们在降低常规PCR循环次数的基础上，通过对PCR产物的酶标探针杂交及酶促显色分析，建立了特异、敏感及快速检测血清HBVDNA的PCR方法．回材料和方法1．1主要仪器及试剂ThermolyneAmplitron11PCR循环仪（美国）；DG3022型酶联检测仪（华东电子管厂）；dNTPS（Pr。mega）；TaqDNA聚合酶（Promega）；亲和素（MW：66000，原平生物工程公司…     

斑点金免疫渗滤试验快速检测抗甲型肝炎病毒IgM抗体

建立胶体金免疫渗滤试验用于快速检测抗甲型肝炎ＩｇＭ抗体。     

采用改进的表示PCR技术分离胃癌差异表达基因及其临床意义

建立优化的差示ＰＣＲ条件：运用建立的条件分离胃癌ＧＣ７９０１与胃粘膜ＧＥＳ－１细胞株之间的差异表达基因；根据获取的序列，设计引物并运用于检测胃癌组织、血活检胃粘膜标本，拟筛选出检出率与符合率高的数对引物，建立胃癌基因诊断方法。方法：以ＧＣ７９０１与ＧＥＳ－１细胞株为研究对象，探索ｍＲＮＡ差示ＰＣＲ 最佳反应条件，运用优化的条件分离细胞株之间的差异表达基因；以回收的片段作条件分离细胞打点杂交证实为真     

胃癌高表达基因erk的PCR扩增,克隆和鉴定

对在胃癌高表达的EPH家族基因erk胞外的配体结合区基因扩增及克隆．方法：从胃癌患者手术切除标本中提取RNA，反转录为cDNA，以计算机辅助分析设计并合成引物进行RT－PCR，并将扩增片段克隆入pUC19质粒，用酶切及PCR方法筛选鉴定阳性克隆．结果：RT－PCR扩增片段与设计相符，且特异性好，无非特异产物出现，表明所设计引物符合要求．酶切及巢式PCR、PCR－RFLP方法证明克隆片段正确插入pUC19的HindIII和BamHI位点，并将重组克隆命名为pGE42．结论；克隆的完成为进一步研究该基因在胃癌的发生中的作用，寻找其胞外配体及进行表达产物的细胞定位等工作打下基础．