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巢式聚合酶链反应扩增幽门螺杆菌尿素酶基因 总被引:1,自引:0,他引:1
选用位于幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B基因上3个引物组成的巢式聚合酶链反应(PCR),成功地对Hp标准菌株及214例临床标本进行了扩增,并对样品的准备、PCR反应物的组成及PCR循环条件方面作了深入的研究,简化了操作程序,缩短了操作时间,降低了消耗。与既往所用的尿素酶试验及Warthin-Starry银染色进行比较,显示其具有特异性强、灵敏度高、方法简便、快速且准确等特点,可作为常规检查在临床应用。 相似文献
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目的 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性在亚洲有不同报道 ,本研究应用重组幽门螺杆菌毒素相关抗原 A (Cag A)建立检测血清中抗 Cag A抗体的方法 ,以探讨本地区 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性 .方法 构建表达幽门螺杆菌 Cag A抗原的表达载体 ,工程菌经 IPTG诱导 ,表达的 Cag A包含体经 Ni柱纯化 ,变性、复性、透析并经活性鉴定后 ,抗原被点在硝酸纤维素膜上或用以包被 EL ISA板 ,建立检测正常人及胃癌患者血清抗 Cag A抗体的 DIGFA(斑点金免疫渗滤试验 ,简称滴金法 )和 EL ISA法 .结果 重组克隆 p RSETcag A的工程菌可表达 Mr36 0 0 0的目的蛋白 ,表达形式为包含体 ;Cag A包含体经纯化后 SDS- PAGE显示纯度达 98%以上 ,活性经 EL ISA证实 ;正常人 6 4例及胃癌患者血清 5 0例中 ,cag A+ Hp的感染率分别为 2 9.7%和6 2 .0 % ,胃癌患者 cag A+ Hp的感染率明显高于正常人 (P<0 .0 1) .结论 我们建立的检测血清抗 Cag A抗体的 DIGFA和EL ISA均具有良好的可重复性 ;胃癌患者 cag A+ Hp的感染比例明显高于正常人 ,Cag A阳性幽门螺杆菌的感染与胃癌有关 ,Cag A可作为制备防治 cag A+ Hp感染的疫苗的后备抗原 . Cag A可作为幽门螺杆菌疫苗制备的候选抗原 ,检测患者血清幽门螺杆菌 Cag A抗体 ,有可能为胃癌的发 相似文献
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0引言PCR技术已广泛应用于血清HBVDNA的检测方面,但目前所普遍采用的以琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物的方法敏感度低,要求PCR循环的次数应足够多,且操作繁琐,不适宜于大量标本的检测.我们在降低常规PCR循环次数的基础上,通过对PCR产物的酶标探针杂交及酶促显色分析,建立了特异、敏感及快速检测血清HBVDNA的PCR方法.回材料和方法1.1主要仪器及试剂ThermolyneAmplitron11PCR循环仪(美国);DG3022型酶联检测仪(华东电子管厂);dNTPS(Pr。mega);TaqDNA聚合酶(Promega);亲和素(MW:66000,原平生物工程公司… 相似文献
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斑点金免疫渗滤试验快速检测抗甲型肝炎病毒IgM抗体 总被引:3,自引:1,他引:2
建立胶体金免疫渗滤试验用于快速检测抗甲型肝炎IgM抗体。 相似文献
19.
采用改进的表示PCR技术分离胃癌差异表达基因及其临床意义 总被引:4,自引:2,他引:2
建立优化的差示PCR条件:运用建立的条件分离胃癌GC7901与胃粘膜GES-1细胞株之间的差异表达基因;根据获取的序列,设计引物并运用于检测胃癌组织、血活检胃粘膜标本,拟筛选出检出率与符合率高的数对引物,建立胃癌基因诊断方法。方法:以GC7901与GES-1细胞株为研究对象,探索mRNA差示PCR 最佳反应条件,运用优化的条件分离细胞株之间的差异表达基因;以回收的片段作条件分离细胞打点杂交证实为真 相似文献
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胃癌高表达基因erk的PCR扩增,克隆和鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
对在胃癌高表达的EPH家族基因erk胞外的配体结合区基因扩增及克隆.方法:从胃癌患者手术切除标本中提取RNA,反转录为cDNA,以计算机辅助分析设计并合成引物进行RT-PCR,并将扩增片段克隆入pUC19质粒,用酶切及PCR方法筛选鉴定阳性克隆.结果:RT-PCR扩增片段与设计相符,且特异性好,无非特异产物出现,表明所设计引物符合要求.酶切及巢式PCR、PCR-RFLP方法证明克隆片段正确插入pUC19的HindIII和BamHI位点,并将重组克隆命名为pGE42.结论;克隆的完成为进一步研究该基因在胃癌的发生中的作用,寻找其胞外配体及进行表达产物的细胞定位等工作打下基础. 相似文献