神经生长因子对兔视神经挫伤修复的影响

目的:研究神经生长因子(NGF)对成年兔视神经(ON)挫伤后修复的影响。方法:通过逐级暴露钝性分离钳夹视神经法建立兔视神经挫伤模型,并向玻璃体腔内注入NGF-β1μg(右眼,治疗组),或磷酸盐缓冲液(PBS)0.1m l(左眼,对照组)。挫伤后2周、4周时分别用光镜、电镜和TUNEL技术观察视网膜神经节细胞(RGC s)、视网膜神经纤维层和视神经的改变并作视神经纤维计数。结果:兔视神经挫伤可使RGC s数量减少,表现出细胞坏死、凋亡的特征。视神经病理改变主要是轴突较正常稀疏,部分轴突明显肿胀、空泡变性,轴突与髓鞘间有腔隙形成,髓鞘结构紊乱,出现板层分离。NGF治疗组与对照组相比,前者RGC s、视神经纤维的退变较轻,数量较多,神经纤维有再生现象。同时发现治疗组4周比2周的神经纤维计数明显减少。结论:NGF能够在一定程度上防止轴突的变性坏死,从而阻断因轴突变性而激发RGC s死亡,并促进视神经纤维的再生。     

NIDDM大鼠骨骼肌组织GLUT4mRNA表达及其与胰岛素分泌关系的实验研究

目的 观察非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM）大鼠骨骼肌葡萄糖转运体4（glucose transporter4,GLUT4)mRNA表达及其与胰岛素分泌的关系。方法 制备NIDDM大鼠模型,用Northern blot方法测定骨骼肌组织中GLUT4mRNA表达量;放射免疫法测定血清胰岛素含量;免疫组化法观察胰岛素阳性β细胞。结果 NIDDM大鼠骨骼肌GLUT4mRNA表达显低下,仅为对照组的45％（P＜0.01);其空腹基础胰岛素水平正常,但葡萄糖耐量试验胰岛素水平较对照组明显降低,2h胰岛素分泌有延迟现象;免疫组化实验NIDDM大鼠胰岛体积减少一半以上,胰岛素阳性β细胞数量明显减少。结论 NIDDM大鼠骨骼肌GLUT4mRNA表达量低下,该反应与体内胰岛素分泌水平呈现一定的正相关性。     

Ki-67、NET-1与CD34免疫组化三重染色技术

目前,免疫组化一般采用在一张切片上显示一种抗原成分的单免疫组化方法,这对于某种肿瘤内多种抗原成分表达及相互关系研究来讲,一是操作繁琐、耗时,二是相互间比较时存在取材和操作的不同,使获得的结果不够客观准确,我们经多次实验,成功地在同一切片上完成了膀胱癌组织细胞Ki-6     

星形细胞肿瘤中端粒酶与PTEN的表达及相关性

目的：研究星形细胞肿瘤中的端粒酶活性和PTEN表达,探讨其在星形细胞肿瘤发生发展过程中的相关性,方法：收集手术切除经病理证实的星形细胞肿瘤110例,8例正常脑组织作对照。用端粒酶原位杂交检测盒检测组织标本端粒酶活性,用LSAB法检测PTEN表达。结果：星形细胞肿瘤端粒酶活性和PTEN的阳性检出率分别为50％（55／110）和39．1％（43／110）,且随着肿瘤恶性程度的增加,端粒酶活性程度升高（P＜0．01）,端粒酶活性与PTEN表达有相关性（P＜0．01）,结论：端粒酶活性与星形细胞肿瘤的分化程度有关,提示端粒酶活性可能是星形细胞肿瘤恶性程度的重要标记物,PTEN蛋白可能对端粒酶的活性有调节作用。     

神经生长因子β对兔实验性青光眼视网膜神经节细胞的保护作用

目的 探讨神经生长因子β（NGF-β）对青光眼性视网膜神经节细胞（RGCs）损害的保护作用。方法 建立家兔青光眼模型,并动态观察眼压。于术后14d、21d随机选择一眼玻璃体腔注射NGF-β 1μg和细胞色素C 0．1mg（实验组）,对侧眼仅注射细胞色素C 0．1mg作对照（对照组）,共10只兔。术后28d处死实验兔摘取眼球及视神经作组织学观察,并用核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测RGCs凋亡状况。结果 组织学检查显示术后28d时视神经神经纤维丢失程度实验组有8例轻于对照组,1例相似,1例较对照组为重。对照组视神经节细胞层凋亡阳性率13．46％,明显高于实验组的10．60％（P〈0．01）。结论 NGF-β对青光眼性视网膜神经节细胞损害具有一定的保护作用。     

MMP-13及p38MAPK在肝细胞癌侵袭和转移中的作用

目的 探讨肝细胞癌中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)和丝裂原激活蛋白激酶p38(p38MAPK)的表达及其在肝细胞癌侵袭和转移中的作用.方法 使用原位杂交检测32例肝癌组织及对应的癌旁组织中MMP-13 mRNA的表达,使用免疫组化检测MMP-13蛋白和p38MAPK蛋白,分析它们和临床病理的关系.结果 MMP-13 mRNA及MMP-13、p38MAPK蛋白在癌组织中阳性表达率分别为90.63%(29/32)、93.75%(30/32)和96.88%(31/32),在癌旁组织阳性表达分别为59.38%(19/32)、71.88%(23/32)和59.38%(19/32),癌组织显著高于癌旁组织,差异均有高度统计学意义(均P<0.01).MMP-13蛋白和p38MAPK蛋白在癌组织中的表达成显著正相关(P<0.01).MMP-13蛋白及p38MAPK蛋白表达在肿瘤组织甲胎蛋白不同分化程度、有无门静脉癌栓和(或)肝包膜受累之间的差异均有统计学意义(均P<0.05),但与肿瘤直径和血清AFP水平无明显相关性(P>0.05).结论 MMP-13和p38MAPK在肝癌的生长过程中发挥了重要作用,其可能参与了癌细胞的侵袭和转移机制.p38MAPK信号通路可能参与了MMP-13的调节.     

RAP单克隆抗体的制备及其在胰腺癌中的表达

目的：制备受体相关蛋白(receptor-associated protein,RAP)单克隆抗体,研究人胰腺癌组织中RAP的表达与定位,探讨胰腺癌发生发展的病理机制。方法：运用基因重组技术及单克隆抗体技术制备抗RAP抗体。利用制备的抗RAP抗体,分别采用Western Blot和免疫组织化学检测并比较4例胰腺癌患者癌及癌旁组织中RAP的表达及分布。结果：抗RAP单克隆抗体能特异识别分子质量为44 ku的RAP蛋白。 Western Blot与免疫组织化学检测结果均显示RAP在胰腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织。免疫组织化学分析还显示RAP表达主要分布在细胞的胞质,呈强阳性;RAP在组织间质中也有少量分布,呈弱阳性。RAP在胰腺癌组织中的高表达主要分布在癌巢。结论：RAP表达与胰腺癌的发生发展密切相关。     

原发性肝癌中转化生长因子β1及其Ⅱ型受体表达与病理学意义

目的：研究原发性肝癌中TGF－β1及其Ⅱ型受体（TGF－β1RⅡ，TβRⅡ）表达及其与病理学特征的关系。方法：运用免疫组化方法（SABC法）检测67例肝癌和癌旁组织中TGF－β1及TβRⅡ的表达。结果：TGF－β1癌旁组织中表达高于癌组织，实质细胞，间质细胞均有不同程度的表达；在肝外转移组，包膜浸润组其表达显著增高。TβRⅡ在肝癌细胞中多为阴性，但部分癌细胞胞浆中有表达；癌旁肝细胞中其表达较正常对照减少；在门脉癌栓组，包膜浸润组，Edmondson分级Ⅲ-Ⅳ级的肝癌组织中TβRⅡ的表达显著降低。结论：肝癌中TGF－β信号途径发生障碍。TGF－β1表达增高，通过自分泌和旁分泌方式发挥作用。肝癌组织中TβRⅡ表达降低，并可能存在转运障碍。TGF－β1的上调及TβRⅡ的缺失，转运障碍是肝癌发生，演进中的重要步骤。     

涎腺肿瘤组织中HSP90α和C—mye表达及意义

目的探讨涎腺肿瘤中热休克蛋白90的α亚基（HSP90α）和癌基因C—myc在涎腺肿瘤发生发展中的作用及机制。方法采用免疫组化SP法检测17份恶性（恶性组）和41例良性涎腺肿瘤组织（良性组）中HSP90α、C-myc的表达。结果恶性组HSP90ct阳性率显著高于良性组（P均〈0．05）,且从腮腺、颌下腺到小涎腺的阳性强度有增加趋势（Fishergexact=0．008）。恶性组C—myc表达均较强,其阳性率显著高于良性组（P=0．028）。C-myc表达与HSP90et呈正相关（r=0．278,P均〈0．05）;恶性组HSP90α阳性者C—myc的阳性率显著高于良性组（P〈0．05）。结论HSP90α和C—myc可促进涎腺恶性肿瘤的发生、发展。HSP90α可能通过C—myc共同促进涎腺肿瘤的发生发展和恶性转化。     

星形细胞瘤中端粒酶和P53蛋白的表达与意义

目的：研究星形细胞瘤中端粒酶基因与P53蛋白的表达，探讨其在星形细胞瘤诊断和预后中的临床意义。方法：收集经手术切除及病理证实的星形细胞瘤86例标本，8例正常脑组织作对照。用端粒酶原位杂交检测试剂盒检测组织标本端粒酶基因。用SABC法检测P53蛋白的表达。结果：星形细胞瘤中端粒酶基因和P53蛋白的阳性检出率分别为44．2％（38／86）和62．8％（54／86），且随着肿瘤恶性程度的增加，端粒酶基因表达强度升高（P＜0．01），端粒酶表达与P53蛋白表达强度无明显相关性（P＞0．05）。正常组织中未检测出端粒酶基因。结论：端粒酶基因与星形细胞瘤的分化程度有关，可作为星形细胞瘤恶性程度的重要标记物，而P53蛋白可能对端粒酶基因的表达无直接影响。