β-磷酸三钙多孔陶瓷与骨髓间充质干细胞生物相容性的体外实验研究

目的　探讨 β 磷酸三钙 (β tricalciumphosphate ,β TCP)多孔陶瓷与骨髓间充质干细胞 (bonemarrowmes enchymalstemcells ,BMSCs)的生物相容性 ,为组织工程方法修复骨和软骨缺损提供依据。 方法　将骨髓间充质干细胞与β 磷酸三钙多孔陶瓷复合并体外培养 ,然后进行形态学、细胞增殖、DNA含量、蛋白质含量测定。 结果　骨髓间充质干细胞能够贴附在 β 磷酸三钙多孔陶瓷孔隙内生长 ,其DNA复制和蛋白合成功能不受 β 磷酸三钙的影响。 结论　β 磷酸三钙多孔陶瓷生物相容性良好 ,可作为组织工程的支架材料应用于骨和软骨缺损的修复。     

兔骨髓间充质干细胞膜片特性及优势研究

目的:探讨兔骨髓间充质干细胞(rBMMSCs)膜片的基本生物学特性及其在组织工程应用中的优势. 方法:从日本大耳白兔提取原代骨髓培养rBMMSCs,采用简单制备方法构建rBMMSCs细胞膜片,大体、HE染色观察, MTT、成骨成脂诱导检测膜片增殖分化能力,RT-PCR检测膜片相关优势基因的表达情况. 结果:成功分离rBMMSCs,诱导10-14d后获得白色膜状细胞膜片,并可用无菌眼科镊提拉. 镜下观察细胞呈梭形重叠生长,HE染色显示细胞间紧密连接并有大量细胞外基质(ECM)分泌;MTT显示膜片细胞密度随时间增加;成骨成脂诱导结果显示其分化能力明显优于普通培养的rBMMSCs;RT-PCR结果显示,与rBMMSCs相比,细胞膜片高表达ColⅠ和Fn.结论:rBMMSCs细胞膜片相比普通培养的rBMMSCs,在组织工程应用中更具优势.     

非综合征型先天性多数恒牙缺失伴乳牙滞留1例

患者,女,32岁,发育中等、智力正常。毛发正常,能正常出汗,无指(趾)发育不良。未见颌骨发育异常。口内为混合牙列,11、12、14、16、17、21、22、24、25、26、31、32、33、34、36、41、42、43、46萌出在位。75、85滞留。13、15、18、23、27、28、35、37、38、44、45、47、48未见,曲面断层片未见其牙胚存在（图1）。14向远中90°扭转。75 III °松动,远中邻牙合面龋洞,无遗传病、传染病和严重感染等病史,无拔牙史。     

成人骨髓基质干细胞的分离与纯化

目的利用免疫磁珠分离成人骨髓神经生长因子受体(nerve growth factor receptor,NGFR)阳性细胞,获得同质性骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs).方法采用Percoll密度梯度离心法分离成人骨髓中单个核细胞(mononuclear cells,MNCs).对MNCs进行常规贴壁培养或应用磁分离技术分离NGFR+细胞.分别检测NGFR+细胞和常规贴壁培养所获BMSCs体外扩增和集落形成能力,分析其细胞表型和细胞周期,并进行成骨、成脂肪诱导.结果免疫磁珠分离获得NGFR+细胞的纯度为(90.4±4.7)%,NGFR+细胞较贴壁培养获得BMSCs具备更强增殖能力和成骨及成脂肪分化潜能.结论利用免疫磁珠分离骨髓NGFR+细胞可以获得同质性原始BMSCs.     

组织工程骨对羊节段性骨缺损的修复

目的探讨自体骨髓间充质干细胞(MSCs)复合生物活性陶瓷材料β磷酸三钙(TCP)修复羊跖骨节段性缺损的能力。方法将24只成年中国美利奴绵羊随机分成3组，制备单侧跖骨21mm长节段性缺损，缺损分别采用相应方法修复：材料 细胞组，缺损区植入β-TCP MSCs复合体(n=10)；单纯材料组，缺损区植入单纯β—TCP(n=10)；空白组，缺损区不作处理(n=4)。术后1、3和6月处死动物并取材，做大体形态学、组织学、X线检查。结果术后6月检查结果显示，在材料 细胞组，骨生成能力明显强于单纯材料组；而空白组仅在骨折断面处生成少量松质骨，骨缺损不能修复。结论生物活性陶瓷β—TCP与MSCs结合能明显提高骨生成速度，在修复长骨干节段性缺损方面具有潜在的临床应用价值。     

应用组织工程化人工软骨修复羊关节软骨缺损的实验研究

目的 :探索以多孔磷酸三钙生物陶瓷材料为支架构建组织工程化软骨修复羊关节软骨缺损的可行性。方法 :实验分 3组。实验组 (n =12 ) :分离培养羊自体关节软骨细胞 ,采用微载体技术在旋转生物反应器内进行扩增 ,扩增后的软骨细胞接种到预制的 β_磷酸三钙 (β_TCP)多孔生物陶瓷材料上 ,细胞_材料复合体经体外孵育后 ,无菌条件下植入预制的羊前肢肱骨头关节面缺损处 ;单纯材料组 (n =12 ) :采用单纯 β_TCP材料修复羊关节软骨缺损 ;空白对照组 (n =4 ) :制备的羊关节软骨缺损区未做任何修复。术后 3和 6个月分别取材 ,进行缺损区组织学、组织化学和免疫组织化学分析。结果 :在实验组羊关节软骨缺损处表面肉眼可见透明软骨样组织形成。组织学检查发现 ,术后 3个月时材料降解明显 ,未降解吸收的材料孔洞内广泛分布着新生软骨组织 ,软骨细胞外基质丰富 ,Ⅱ型胶原染色阳性。至术后 6个月 ,支架材料几乎完全降解 ,缺损区被新生软骨组织所取代。在单纯材料组羊关节软骨缺损处术后 3个月时 ,可见从缺损区边缘有新生软骨组织向支架材料内长入 ,支架材料吸收明显。至术后 6个月 ,可见从缺损区边缘长入到支架材料内的新生软骨组织逐渐增多 ,但材料的中心部位未发现新生软骨形成。空白对照组羊关节软骨缺损区至术后 6     

DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达

目的检测DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达,为大鼠牙髓干细胞的生物学功能研究提供基础。方法采用免疫组织化学染色的方法,对DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达进行检测,然后采用矿化液对大鼠牙髓干细胞进行诱导,并对诱导后细胞进行DSP、DMP1表达的检测。结果大鼠牙髓干细胞DMP1仅个别细胞阳性表达,DSP少量细胞阳性表达,CBFA1、BMP2为阳性染色。经矿化液诱导后,大鼠牙髓干细胞DSP染色出现部分细胞强阳性,DMP1出现阳性结果。结论CBFA1、BMP2阳性表达表明大鼠牙髓干细胞具有一定的未成熟性,而经过诱导后出现牙本质特异性DSP的表达,表明大鼠牙髓干细胞可以被诱导向成牙本质细胞方向分化。     

体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的初步研究

目的：5-氮胞苷作为分化诱导剂，初步探讨其单独或联合全反式维甲酸应用时对小鼠胚胎干细胞（mESC）分化为心肌细胞的影响，旨在建立一种体外诱导mESC分化为心肌细胞的实验方法。方法： 采用 MTT法确定5-氮胞苷的非细胞毒性参考剂量。设计不同条件培养基（5-氮胞苷单独或配伍全反式维甲酸应用）对mESC 进行诱导分化，并通过免疫组化技术及RT-PCR方法等对分化细胞进行鉴定。结果： 5-氮胞苷的非细胞毒性参考剂量为8 μmol/L，能够诱导mESC分化为心肌合胞体（与阴性对照组比较，P<0.01），诱导分化率可达50%。配伍全反式维甲酸持续诱导的结果等同于单独应用全反式维甲酸的作用效果（P>0.05）：即对ESC向心肌细胞的诱导分化没有促进作用。结论：5-氮胞苷能够诱导mESC分化为心肌合胞体，从而得以建立一种体外诱导mESC分化为心肌细胞的方法。