平滑肌细胞在旋转生物反应器内的微载体培养与快速扩增

为获取足量数量活性良好的膀胱平滑肌种子细胞，本实验探索在旋转生物反应器内应用微载体技术快速扩增膀胱平滑肌细胞的方法。将培养的第二代新西兰兔膀胱不滑肌细胞应用Cytodex-3微载体在旋转生物反应器（RCCS）内进行动态培养，观测平滑肌细胞的生长情况和细胞代谢率，进行a-肌动蛋白免疫组化染色，并与常规方法培养平滑肌细胞进行比较。结果显示膀胱平滑肌细胞在Cytodex-3微载体上生长迅速、细胞代谢率高、生长倍增时间缩短。在培养第九天，细胞数量可达最初接种的23倍。免疫组化显示平滑肌细胞活性良好。结果表明利用微载体细胞培养技术可简便快速地在体外扩增平滑肌细胞，可为构建组织工程化人造膀胱提供大量活性良好的平滑肌细胞。     

人牙周膜成纤维细胞与牙龈成纤维细胞差异表达基因的批量克隆及其特征分析

目的：克隆人牙周膜成纤维细胞（ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＰＤＬＦ）与牙龈成纤维细胞（ｇｉｎｇｉｖａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＧＦ）差异表达基因并初步分析其中已知基因的功能特征。方法：采用基于ＰＣＲ和消减杂交的基因克隆技术构建人ＰＤＬＦ与ＧＦ差异表达基因的扣除文库，克隆人ＰＤＬＦ与ＧＦ差异表达基因，对已知基因的功能特征进行分析。结果：成功克隆到１４个人ＰＤＬＦ与     

BPA微囊与APA微囊机械强度和生物相容性的比较研究

目的 比较海藻酸钡-多聚赖氨酸-海藻酸(BPA)微囊与海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸(APA)微囊的生物相容性和机械强度的生物物理特性.方法 用静电微囊发生仪制备BPA和APA微囊,通过机械振荡法和肌肉下移植来检测微囊的机械强度.通过微囊大鼠腹腔移植来观察BPA和APA微囊的生物相容性.结果 机械振荡48h后APA微囊的破损率为4.3%,BPA微囊仅为1.5%;肌肉下移植1个月后,组织切片H&E染色显示,APA和BPA微囊均保持完整,仅有轻度纤维化包裹;腹腔移植4、8和10周后,从大鼠腹腔内取出的微囊中95%～98%为结构完整,呈圆形,表面光滑,光镜下无明显的结缔组织包绕.结论 所制备的BPA微囊的生物相容性河机械强度优于APA微囊.     

抗凝血纳米壳聚糖微球的合成、表征及生物安全性评价

 背景：有研究显示,壳聚糖等天然多糖经磺化改性后具有类似肝素的抗凝功能,因磺酸化后的壳聚糖其形成的磺酸根基团与肝素的活性基团相似,具有良好的抗凝血性。 目的：制备具有抗凝血功能的纳米壳聚糖微球,检测其形态结构、理化性能及生物安全性。 方法：利用乳相法合成纳米壳聚糖微球,通过磺化反应合成磺酸化壳聚糖微球,通过透射电镜描述其形态特征,红外光谱观察其特异基团峰值变化。①凝血实验：分别将肝素、纳米壳聚糖微球及10,30,50 mg磺酸化壳聚糖微球加入SD大鼠血中,检测凝血指标。②溶血实验：分别将去离子水、生理盐水及10,30,50 g/L磺酸化壳聚糖微球浸提液加入兔2%红细胞悬液中,检测溶血率。③细胞毒性实验：分别采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基及10,30,50 g/L磺酸化壳聚糖微球的浸提液培养人脐静脉血管内皮细胞,72 h后检测细胞相对增殖率及毒性分级。 结果与结论：扫描电镜显示磺酸化壳聚糖微球具有良好的形态结构,粒径大小50 nm,红外图谱提示存在磺化取代。体外凝血实验表明磺酸化壳聚糖微球具有显著抗凝血作用,抗凝血效果呈剂量效应关系。磺酸化壳聚糖微球符合国标关于溶血率小于5%的安全标准,无致溶血性。细胞毒性实验表明磺酸化壳聚糖微球浸提液无明显细胞毒性,其生物安全性符合国家标准。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

Dextran不连续密度梯度离心法纯化大鼠胰岛

目的评价Dextran不连续密度梯度离心法纯化大鼠胰岛的效果。方法采用V型胶原酶分离出大鼠胰岛,并应用Dextran不连续密度梯度离心法纯化胰岛。在体视镜下计数双硫腙染色的胰岛并测量染色胰岛的直径。放免法测定胰岛素含量。AO-PI双染色确定胰岛的活力。结果平均每只成年Wistar大鼠的胰腺可分离950±24个胰岛,经Dextran纯化后平均每只成年Wistar大鼠的胰腺可获得784±10个胰岛,纯度可达到90%以上。结论采用Dextran不连续密度梯度纯化得到的Wistar大鼠胰岛结构完整、功能良好。     

大鼠牙胚发育早期核心结合因子1表达的时空特异性

目的：探讨采用成骨细胞特异性转录因子核心结合因子1 cDNA探针对大鼠不同时期牙胚进行原位杂交实验，以及其在牙胚发育过程中的表达。方法：实验于2003-05／08在北京军事医学科学院组织工程研究中心实验室完成。取SD孕期大鼠12只，利用核心结合因子1 cDNA克隆产物，自行制备核心结合因子1 cDNA探针，并对同笼后11d（蕾状期）、14d（帽状期）、17d（钟状早期）及出生后1d和9d（钟状晚期）4个时期的大鼠牙胚进行原位杂交实验，观察核心结合因子1在大鼠牙胚不同时期中的表达。结果：①大鼠牙胚蕾状期原位杂交可见明显阳性表达结果，其表达部位主要集中于牙胚及牙蕾顶部邻近的外胚间充质。②帽状期及钟状早期牙乳头、成牙本质细胞及成釉细胞均呈阳性表达。③钟状晚期表现于成牙本质细胞的表达明显下调，而成釉细胞呈阳性表达。结论：核心结合因子1在牙胚不同时期的表达有时空特异性，在大鼠牙胚发育早期即蕾状期的强阳性表达，表明核心结合因子1参与了牙胚的早期发育。     

人牙周膜成纤维细胞与牙龈成纤维细胞差异表达基因扣除文库的构建

目的建立人牙周膜成纤维细胞(periodontalligamentfibroblast,PDLF) 与牙龈成纤维细胞(gin-givalfibroblast,GF)差异表达基因的扣除文库。方法体外培养人PDLC和GF,分别提取mRNA,采用基于PCR和消减杂交的基因克隆技术构建人PDLC与GF差异表达基因的扣除文库。结果成功构建了人PDLF与GF细胞差异表达基因的扣除文库,文库容量为4×l02。结论基于PCR和消减杂交的基因克隆技术是构建细胞间差异表达基因扣除文库的较为简洁而有效的方法。     

炎症人牙髓组织渗出液中IL-8含量的检测

目的：检测人正常和炎症牙髓组织渗出液中ＩＬ－８的含量,揭示ＩＬ－８与牙髓炎的关系。方法：用滤纸条浸润法采集正常和临床诊断为急性或慢性牙髓炎患牙牙髓组织渗出液。用ＥＬＩＳＡ方法检测其ＩＬ－８含量。结果：正常牙髓组织渗出液中检测不到ＩＬ－８,而炎症牙髓组织渗出液中均有较高水平的ＩＬ－８（０．３３～１．０μｇ／Ｌ）,且在急性牙髓炎中的水平高于慢性牙髓炎（Ｐ〈０．０１）。结论：ＩＬ－８参与了牙髓炎的发生和     

骨髓间质干细胞复合生物陶瓷构建组织工程化人工软骨

目的 探索以多孔β-磷酸三钙(β-TCP)生物陶瓷材料为支架，经体外诱导的骨髓间质干细胞(MSCs)为种子细胞，构建组织工程化软骨修复羊关节软骨缺损的可行性。方法将28只中国美利奴绵羊分为三组。实验组(n＝12)：分离培养羊自体第7代MSCs，经转化生长因子-β诱导后接种到顶制的β-TCP多孔生物陶瓷材料上，细胞—材料复合体经体外孵育后，无菌条件下植入预制的羊单例肋骨近端关节面缺损处；单纯材料组(n＝12)：采用单纯β-TCP材料修复羊关节软骨缺损；空白对照组(n＝4)：制备的羊关节软骨缺损区未做任何修复。术后12周和24周分别取材，进行组织学、组织化学和免疫组织化学分折。结果 实验组术后12周羊关节软骨缺损处肉眼可见透明软骨祥组织形成，组织学检查发现，材料降解明显，未降解吸收的材料孔洞内广泛分布着新生软骨组织，软骨细胞外基质丰富，Ⅱ型胶原染色阳性；术后24周，支架材料几乎完全降解，缺损区被新生软骨组织所取代。单纯材料组术后12周，缺损区边缘有新生软骨组织向支架材料内长入，支架材料吸收明显；术后24周，见从缺损区边缘长入到支架材料内的新生软骨组织逐渐增多，但材料的中心部位未发现新生软骨形成。空白对照组至术后24周，仅见少量软骨组织从缺损区边缘向缺损区内长入，缺损中央大部分区域仍未得到修复。结论 以β-TCP多孔生物陶瓷作为支架材料，以自体MSCs作为种子细胞构建组织工程化软骨修复关节软骨缺损是可行的。