幽门螺杆菌长期感染蒙古沙鼠模型的建立

幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)在胃炎、消化性溃疡、胃癌及胃淋巴瘤的发生中发挥着重要的作用 ,但是 ,Ｈｐ的动物感染模型一直未获成功。国内外虽有报道建立了小鼠及大鼠感染模型〔1,2〕,但或者是稳定性较差 ,或者是都采用特定的Ｈｐ菌株 Ｓｙｄ ｎｅｙｓｔｒａｉｎ 1(ＳＳ1) ,对于进一步研究Ｈｐ的致病机理和疫苗存在着一定局限性。 1996年起 ,国外陆续有学者〔3 ,4〕报道用沙土鼠建立Ｈｐ感染模型并取得较好效果的实验研究。为此 ,我们采用临床分离的Ｈｐ菌株对蒙古沙鼠 (Ｍｏｎｇｏｌｉａｎｇｅｒｂｉｌ)进行…     

肠出血性大肠杆菌0157:H7 LexA蛋白的表达、纯化及鉴定

目的 对EHEC 0157:H7 lexA达、纯化,并检测其免疫活性.方法 lexA基因片段插入表达载体pET22b( ),在E..coli BL21(DE3)中表达.包涵体经洗涤并用8 mol/L尿素溶解,Heparin Agrose亲合柱层析为第-步纯化,Superdex75凝胶过滤层析作为第二步精细纯化,HPLC测定LexA蛋白的浓度,将纯化的kxA蛋白经注射途径免疫家兔,制备兔抗lexA血清,采用免疫双扩、ELISA及Western blot分析LexA的免疫活性.结果 lexA以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经Heparin Agrose亲合柱层析和凝胶过滤层析两步组合纯化目的 蛋白,经HPLC测定目的 蛋白的最终纯度为98%,表达及纯化的lexA具有良好的免疫活性.结论 在E.coli BL21(DE3)中表达的LexA蛋白具有良好的免疫活性.     

富血小板血浆对人骨髓间充质干细胞成骨分化的抑制效应

目的:一些理论质疑富血小板血浆对骨前体细胞成骨分化的作用,本实验拟验证富血小板血浆对体外培养的人骨髓间充质干细胞成骨分化的抑制效应。方法:实验于2005-05/11在南方医科大学组织工程试验室(省级)完成。①实验方法:抽取6名健康志愿者髂前上棘骨髓5mL进行体外细胞培养扩增,静脉血10mL以二次离心法制得富血小板血浆。诱导骨髓间充质干细胞时富血小板血浆与骨髓间充质干细胞均来自同一个体。②碱性磷酸酶染色:取第4代骨髓间充质干细胞,分为两组:富血小板血浆组加入富血小板血浆使终浓度为100g/L,单纯血清培养组仅加入等量胎牛血清。培养后第7天进行碱性磷酸酶染色,阳性细胞为胞质中呈现黑色颗粒或块状沉淀。③矿化结节染色:取第4代骨髓间充质干细胞,分组同上。培养后第19天以0.1%茜素红-TrisHcl(pH8.3)37℃下放置30min,矿盐沉积染色阳性为红色。④Cbfa1基因表达:取第4代骨髓间充质干细胞,分组同上。培养后第3,7,12,16天RT-PCR法检测骨髓间充质干细胞Cbfa1基因的表达。⑤形态学观察:实验过程中使用相差显微镜观察各组细胞生长情况及形态学变化。结果:①骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶染色结果:培养后第7天,富血小板血浆组碱性磷酸酶阳性细胞数量较单纯血清培养组明显减少,且阳性细胞内灰黑色颗粒也明显减少,为弱阳性。②骨髓间充质干细胞矿化结节染色结果:培养后第19天,单纯血清培养组可见细胞表面有较多的矿盐沉积,但未形成明显的矿化结节。富血小板血浆组细胞表面只有稀少的矿盐沉积。③骨髓间充质干细胞cbfa1mRNA的表达:培养后第3,7,12,16天,随着培养时间的延长单纯血清培养组与富血小板血浆组cbfa1基因表达量均逐渐增高,同一时间点两组间cbfa1基因的表达基本相似。④骨髓间充质干细胞形态学变化:富血小板血浆组骨髓间充质干细胞增殖旺盛,细胞达到单层汇合的时间较单纯血清培养组明显缩短。单纯血清培养组细胞在完全汇合后开始出现聚合现象(14～16d),但趋向性不明显,未完全形成团簇;富血小板血浆组细胞在完全汇合后未出现聚合现象,细胞密集生长。培养初期两组细胞以梭形为主,多角形细胞较少,培养至14～16d单纯血清培养组多角形细胞较富血小板血浆组增多。结论:富血小板血浆可抑制人骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶的分泌与矿盐沉积,对人骨髓间充质干细胞成骨分化的直接效应是抑制其分化。     

肺良性肿瘤73例微创手术诊治中的体会

目的探讨微创手术在诊断和治疗肺良性肿瘤中的应用价值.方法 2007年7月至2010年12月共收治肺良性肿瘤患者73例,69次（同期双侧3次）微创手术,其中包括VATS（video-assisted thoracoscopicsurgery）电视胸腔镜手术和VAMT（video-assisted mini-thoracotomy）电视胸腔镜辅助小切口手术,切除瘤体72个.手术方式：肺楔形切除术22例（其中3例双侧VATS）,肺叶切除术11例,肺肿瘤摘除术36例,中转开胸4例.VATS为2-3个小切口;VAMT为辅助5～8cm左右小切口.结果全组无围手术期死亡病例,术中出血量（VATS：50～130 mL）/（VAMT：110～200 mL）;手术时间（VATS：110 min/VAMT：125 min）;住院时间（VATS：4～5 d）/（VAMT：5～7 d）;术口平均长度为5～10 cm.术后病理：结核球10例,炎性假瘤18例,慢性肉芽肿11例,肺囊肿6例,错构瘤21例,硬化性血管瘤3例.结论微创手术在肺良性肿瘤是一种值得推广的诊断和治疗方法,有广泛的开展价值.     

重叠延伸PCR法在合成人骨保护素N端编码序列中的应用

目的：获得人骨保护素(OPG)N端D1-D4结构域编码序列。方法：OPGN端D1-D4域仅由2个外显子编码。采用改良方法自人血标本提取基因组DNA，以此DNA作为模板，PCR分别扩增OPG基因外显子2和外显子3，并使外显子2的3’引物和外显子3的5’引物具有相互重叠的一段序列。以2种PCR产物的混合物作为模板，采用重叠延伸法再次进行PCR，扩增产物克隆于载体pGEM—Teasy进行序列分析。结果：PCR扩增得到N端编码序列，序列分析证实该序列完全正确。结论：重叠延伸PCR法合成人OPGN端编码序列的完成为基因工程研制有生物活性蛋白提供了可行的技术手段。     

《临床免疫学及免疫检验》实验课教学改革初探

积极探索实验课的教学改革,是推进《临床免疫学及免疫检验》教学改革的重要环节.笔者针对《临床免疫学及免疫检验》实验课存在的问题,采取了一系列的改革措施,取得了良好的教学效果.     

虎杖与山楂提取物配伍干预颈动脉粥样硬化患者的随机对照临床试验

目的：观察具有解毒作用的中药虎杖提取物配伍活血化瘀中药山楂提取物对颈动脉粥样硬化患者颈动脉内膜-中膜厚度（IMT）、斑块积分及其斑块稳定性相关血清学指标的干预作用,并观察其安全性,为具有解毒活血作用的中药提取物配伍应用于颈动脉粥样硬化及其相关疾病的防治提供依据。方法：按纳入病例标准,选择济南机床二厂社区颈动脉粥样硬化患者64例,随机分为解毒活血治疗组（简称治疗组）32例和对照组32例。治疗组给予虎杖提取物和山楂提取物胶囊（每粒含虎杖提取物160 mg,山楂提取物150 mg）,每次1粒,每日2次（给药剂量为虎杖提取物5.33 mg·kg^-1·d^-1,山楂提取物5.0 mg·kg^-1·d^-1）;对照组给予洛伐他汀片口服,每次1片（20 mg/片）,每日1次（给药剂量为0.33 mg·kg^-1·d^-1）。2组患者均连续治疗6个月,治疗期间避免服用影响血脂代谢和抗AS的其他药物。观察2组患者治疗前后颈动脉IMT、斑块积分及炎症因子超敏C反应蛋白（Hs-CRP）、血清基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和基质金属蛋白酶抑制物-1（TIMP-1）水平的变化。结果：治疗过程中,对照组1例患者出现肝功能异常退出试验、1例因为未遵循治疗方案予以剔除,治疗组未发生明显不良反应,最终纳入分析病例为治疗组32例,对照组30例。结果显示连续治疗6个月后,治疗组IMT、斑块积分均较治疗前显著减少（P<0.05,P<0.01）,与对照组比较无统计学差异。治疗后2组血清Hs-CRP,MMP-9水平和MMP-1/TIMP-1显著降低（P<0.05,P<0.01）,TIMP-1水平与治疗前比较无统计学差异,组间比较治疗后治疗组血清Hs-CRP低于对照组（P<0.05）。结论：具有解毒活血作用的虎杖提取物和山楂提取物配伍具有较好的抗动脉粥样硬化、稳定动脉粥样硬化斑块的作用,其机制可能与抗炎和抑制细胞外基质降解有关,值得进一步研究。     

麝香保心丸对原发性高血压病患者内皮功能的影响

目的：探讨麝香保心丸对原发性高血压患者内皮功能的影响。方法：选取高血压病患者72例,随机分为常规降压治疗组（n=26）及麝香保心丸组（n=36）,两组用药疗程均为8周。实验前后分别测定血清NO（一氧化氮）、ET（内皮素）,并采用超声测量肱动脉血流介导的舒张反应（EDD）。结果：两组治疗后血清NO、EDD较治疗前明显升高,血清ET浓度下降（P〈0．05）。与常规降压组相比,麝香保心丸组NO、EDD治疗后升高更显著（P〈0．05）。结论：常规降压治疗基础上应用麝香保心丸可进一步改善高血压患者的内皮舒张功能。     

参麦开肺散对NIH/3 T3成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：探讨参麦开肺散对NIH/3T3成纤维细胞(FB)增殖及体外纤维化细胞模型胶原合成的影响。方法 NIH/3T3 FB常规培养后分为正常对照组、模型组和处理组,正常对照组加入含1%胎牛血清(FBS)的细胞培养液500μl,模型组加入使用含1% FBS细胞培养液配制的5 ng/mlβ型转化生长因子( TGF-β)溶液500μl,处理组加入含5 ng/ml的TGF-β+1 mg/ml的参麦开肺散混合溶液500μl,培养24 h。分别采用实时定量聚合酶链反应( PCR)、蛋白免疫印迹( Western blot)和Sircol assay检测细胞内胶原及细胞外基质( ECM)相关基因表达水平、Ⅰ型胶原表达情况以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量。结果参麦开肺散显著降低胶原及其相关基因、Ⅰ型胶原蛋白的表达以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量(P<0．05,P<0．01)。结论参麦开肺散可明显抑制TGF-β诱导的NIH/3T3 FB胶原的合成,其发挥抗纤维化作用可能与其抑制FB增殖及胶原合成相关。     

甲状腺素对甲状腺功能减低大鼠子代海马突触素表达的影响

目的:探讨不同剂量甲状腺素对甲状腺功能减低孕鼠子代海马突触素表达的影响.方法:选取断乳1个月的Wistar大鼠160只,雌雄各半.将雌性大鼠随机分为正常组,甲低对照组,甲低孕鼠妊娠1～17 d(妊早期甲低)补充甲状腺素高、中、低剂量组,甲低孕鼠妊娠18～20d(妊晚期甲低)补充甲状腺素高、中、低剂量组共8组,每组10只.各组均饲以低碘饲料,对照组饮用碘酸钾溶液,总碘摄入量相当于大鼠生理碘需要量,其余7组饮用去离子水.3个月后与正常雄性大鼠交配.高、中、低剂量组每100 g体质量每天分别补充甲状腺素3.5、2.0、0.5 μg.分别于新生当天、生后7、14、21及28 d,取8组子代大鼠的右侧大脑半球,应用免疫组织化学SABC法及图像分析技术检测海马突触素的表达.结果:正常组的突触素表达水平均高于同时期甲低对照组(P＜ 0.01).在新生当天,妊晚期甲低中剂量组与甲低对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),妊早、晚期甲低低剂量组突触素表达水平均低于甲低对照组(P＜0.01);妊早期甲低中、高剂量组,妊晚期甲低高剂量组突触素表达水平均高于甲低对照组(P＜0.01).生后7、14、21及28 d,妊早、晚期甲低低剂量组与甲低对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),其他各组的突触素表达水平均高于甲低对照组(P＜0.01).结论:孕鼠甲低导致子代大鼠海马突触素表达下降,甲低孕鼠子代大鼠海马突触素的表达受补充甲状腺素剂量及孕期的影响.