双亲桥接多肽的合成与成骨活性研究

目的合成一条具有双亲功能的多肽，观察其生物活性。方法采用固相多肽合成技术制备具有双亲桥接功能多肽P19，一端含有多谷氨酸序列，与羟基磷灰石(HA)具有特殊的亲和力，另一端又具有精氨酸一甘氨酸一天门冬氨酸(RGD)三肽序列，通过整合素受体促进成骨细胞的黏附和增殖。观察P19对HA的亲和力和表面培养UMRl06细胞的成骨活性。结果合成P19相对分子质量2215．26，纯度53．62％，与HA具有较高的亲和力，生理条件下不能被洗脱，同时P19能够促进UMR106细胞在HA表面的吸附、增殖，并提高碱性磷酸酶的活性。结论P19具有成骨活性，可复合HA修复骨缺损和用于HA表面喷涂假体的生物活性修饰成分。     

应用RNAⅢ抑制肽防治金葡菌感染的研究进展

金葡菌是一种主要致病菌,而多种耐药菌株的出现增加了临床治疗的难度。RNAⅢ抑制肽(RNAⅢ-inhibitingpeptide,RIP)由凝固酶阴性葡萄球菌产生。研究证实,RIP可通过阻断细菌之间的群体感应而减少金葡菌毒素的产生和生物被膜的形成,有效防治金葡菌感染。     

聚乳酸乙醇酸/RNAⅢ抑制肽缓释微球的血液相容性*☆

目的：研究表明RNA Ⅲ抑制肽(RNA Ⅲ inhibiting peptide,RIP)是葡萄球菌一种有效的全面抑制剂，作用机制与传统抗菌素明显不同，有着良好的应用前景。通过实验评价聚乳酸乙醇酸(polyaiticglycolic acid,PLGA)/RIP缓释微球的血液相容性。 方法: 实验于2005-10/2007-10在解放军总医院临床药理研究所及医学动物实验中心完成。选择成年健康新西兰大白兔30只，按随机数字表法分组，每组6只。药品及试剂: PLGA，二甲基亚砜、MTT，DMEM，二硝基氟苯。实验方法：①PLGA/RIP微球制备：采用Fmoc法由C端至N端先合成粗品肽；采用反相液相色谱法对RIP粗品进行纯化分析,按紫外吸收峰收集组分,冷冻干燥,得到RIP纯品。再采用液相复乳法制备直径50～70 mm的PLGA/RIP微球。②洗提液制备：PLGA/RIP微球粉末按1 g/L在37 ℃无菌条件下用生理盐水洗提72 h，制得洗提液原液；加入同体积的无菌生理盐水制得0.5 g/L的稀释液。③溶血实验：以蒸馏水和生理盐水分别为阳性、阴性对照，观察PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液的溶血率。④凝血实验及PLGA/RIP对凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响实验：以生理盐水为阴性对照，观察PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液对兔凝血时间的影响和凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响。⑤PLGA/RIP对兔白细胞、红细胞和血小板及血小板聚集的影响实验：观察PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液对兔白细胞、红细胞和血小板及血小板聚集的影响。 结果：纳入动物30只, 均进入结果分析。①溶血实验结果显示PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液的溶血率分别为3.24%和2.67%，两者的溶血率均 < 5%，符合医用生物材料的溶血实验要求。②凝血实验结果表明PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液对兔凝血时间无明显影响。③PLGA/RIP对各时间点兔凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间均无明显作用。④PLGA/RIP对兔白细胞、红细胞和血小板无明显影响。⑤PLGA/RIP对兔血小板聚集无明显影响。 结论: PLGA/RIP缓释微球具有良好的血液相容性。     

应用抗生素骨水泥占位器与灌注冲洗型占位器治疗全髋关节置换术后感染的疗效比较

目的 比较两种不同抗生素给药方式的关节型占位器在全髋关节置换术后感染治疗中的效果,为全髋关节置换术后感染二期翻修手术中占位器的选择提供依据.方法 自2002年3月～2007年5月,按门诊就诊顺序共收治明确诊断的全髋关节置换术后感染病人36例(40髋),分别应用抗生素骨水泥占位器与灌注冲洗型占位器行二期翻修治疗,其中抗生素骨水泥占位器26例(29髋),灌注冲洗型占位器10例(11髋).记录两种占位器植入手术时间、术中出血量、术后卧床时间、住院时间、下地第1天及二期翻修术前1天髋关节功能、占位器植入次数、重建手术后最近一次随访的感染控制情况等指标.其中髋关节功能采用Harris评分及ROM(range of motion)测量,术前、术后常规摄x片对比.结果 所有患者均获得随访,其中1例因死亡而随访至翻修术后34个月.通过对比发现,抗生素骨水泥占位器较灌注冲洗型占位器平均植入操作时间短(2.52±0.79 h/(3.29±0.33)h,P<0.01),术中出血量少(1208.57±275.64 ml/2131.82±596.84 ml,P<0.01),术后卧床时间短(6.14±1.98 d/45.18±6.11 d,P=0.00),住院时间短(26.00±3.27 d/53.63±3.35 d,P=0.00),占位器植入后感染控制率高(100%/81.82%,P<0.01);而下地第1天两组平均Harris评分相似(56.85±9.61/56.41±6.31),屈伸ROM结果类似(75.31°±6.34°/76.09°±5.49°),翻修术前抗生素骨水泥占位器组平均Harris评分更高(86.78±7.49/80.35±6.37,P<0.05),屈伸ROM差别也不显著(95.16°±4.47°/97.35°±6.22°).结论 在治疗髋关节置换术后感染中,抗生素骨水泥型占位器较灌注冲洗型占位器具有植入操作时间短,术中出血量少,术后卧床时间短,住院时间短,下地后功能更好及无需长期灌注冲洗等优点.     

聚乳酸乙醇酸/RNAⅢ抑制肽缓释微球的血液相容性

目的:研究表明RNA Ⅲ抑制肽(RNA Ⅲ inhibiting peptide,RIP)是葡萄球菌一种有效的全面抑制剂,作用机制与传统抗菌素明显不同,有着良好的应用前景.通过实验评价聚乳酸乙醇酸(polyaiticglycolic acid,PLGA)/RIP缓释微球的血液相容性.方法: 实验于2005-10/2007-10在解放军总医院临床药理研究所及医学动物实验中心完成.选择成年健康新西兰大白兔30只,按随机数字表法分组,每组6只.药品及试剂: PLGA,二甲基亚砜、MTT,DMEM,二硝基氟苯.实验方法:①PLGA/RIP微球制备:采用Fmoc法由C端至N端先合成粗品肽;采用反相液相色谱法对RIP粗品进行纯化分析,按紫外吸收峰收集组分,冷冻干燥,得到RIP纯品.再采用液相复乳法制备直径50～70 mm的PLGA/RIP微球.②洗提液制备:PLGA/RIP微球粉末按1 g/L在37 ℃无菌条件下用生理盐水洗提72 h,制得洗提液原液;加入同体积的无菌生理盐水制得0.5 g/L的稀释液.③溶血实验:以蒸馏水和生理盐水分别为阳性、阴性对照,观察PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液的溶血率.④凝血实验及PLGA/RIP对凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响实验:以生理盐水为阴性对照,观察PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液对兔凝血时间的影响和凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响.⑤PLGA/RIP对兔白细胞、红细胞和血小板及血小板聚集的影响实验:观察PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液对兔白细胞、红细胞和血小板及血小板聚集的影响.结果:纳入动物30只, 均进入结果分析.①溶血实验结果显示PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液的溶血率分别为3.24%和2.67%,两者的溶血率均 < 5%,符合医用生物材料的溶血实验要求.②凝血实验结果表明PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液对兔凝血时间无明显影响.③PLGA/RIP对各时间点兔凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间均无明显作用.④PLGA/RIP对兔白细胞、红细胞和血小板无明显影响.⑤PLGA/RIP对兔血小板聚集无明显影响.结论: PLGA/RIP缓释微球具有良好的血液相容性.     

聚乳酸乙醇酸／RNAⅢ抑制肽缓释微球的血液相容性

目的：研究表明RNA Ⅲ抑制肽（RNA Ⅲ inhibiting peptide，RIP）是葡萄球菌一种有效的全面抑制剂，作用机制与传统抗菌素明显不同，有着良好的应用前景。通过实验评价聚乳酸乙醇酸（polyaitlcglycolic acid，PLGA）／RIP缓释微球的血液相容性。方法：实验于2005-10／2007-10在解放军总医院临床药理研究所及医学动物实验中心完成。选择成年健康新西兰大白兔30只，按随机数字表法分组，每组6只。药品及试剂：PLGA，二甲基亚砜、MTT，DMEM，二硝基氟苯。实验方法：①）PLGA／RIF微球制备：采用Fmoc法由C端至N端先合成粗品肽：采用反相液相色谱法对RIP粗品进行纯化分析，按紫外吸收峰收集组分，冷冻干燥，得到RIP纯品。再采用液相复乳法制备直径50-70mm的PLGA／RIP微球。②洗提液制备：PLGA／RIP微球粉末按1g／L在37℃无菌条件下用生理盐水洗提72h，制得洗提液原液；加入同体积的无菌生理盐水制得0．5g／L的稀释液。③溶血实验：以蒸馏水和生理盐水分别为阳性、阴性对照，观察PLGA／RIP洗提液原液和0．5g／L洗提液的溶血率。④凝血实验及PLGA／RIP对凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响实验：以生理盐水为阴性对照，观察PLGA／RIP洗提液原液和0．5g／L洗提液对兔凝血时间的影响和凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响。⑤PLGA／RIP对兔白细胞、红细胞和血小板及血小板聚集的影响实验：观察PLGA／RIP洗提液原液和0．5g／L洗提液对兔白细胞、红细胞和血小板及血小板聚集的影响。结果：纳入动物30只。均进入结果分析。①溶血实验结果显示PLGA／RIP洗提液原液和0．5g／L洗提液的溶血率分别为3．24％和2．67％，两者的溶血率均〈5％，符合医用生物材料的溶血实验要求。②凝血实验结果表明PLGA／RIP洗提液原液和0．5g／L洗提液对兔凝血时间无明显影响?     

兔膝关节置换假体感染模型的建立

Objective An in vivo animal model was developed to test the efficacy of innovative therapies for the prevention of biomaterial centered infections caused by E. Staphylococcus. Methods Thir-ty-two New Zealand white rabbits were used in this study. After proper anesthesia, a knee prosthesis made by UHMWPE was cemented in the surface of tibia of knee. After 1 week of operation, the operated knee was inoculated with 0, 1×104, 1×106, and 1×108 colony forming units (CFU) of E. Staphylococcus. Animals were sacrificed after 1 week at which time tissues and biomaterial samples were examined for evidence of infec-tion. Joint tissue, implant and joint fluid were tested for the number of bacteria. The joint and implant sam-ple was examined by X-ray, MR, CLSM and pathological examination. Results A total of 32 knees were used for analysis. When saline was injected into the knee, 0 of the knees demonstrated evidence of biomate-rial centered infection. When 1×106 CFU of E. Staphylococcus was injected into the knee, all knees devel-oped a biomateriai centered infection. Evidence of septicemia (positive blood cultures) was found in a rabbit inoculated with 108 CFU of E. Staphylococcus. The infection rate was positively correlated with the amount of the E. Staphylococcus inoculated (R2=0.9939). Gross observation showed a great amount of abscess covered the surface of implant. The joint synovial membrane was erythrogenic. CLSM showed a lot of bacteria were adhesive to the surface of implant and there were films of ESS substance on the surface. Histological exami-nation showed an acute infection. The quantities analysis showed the number of bacteria in joint fluid is sig-nificantly high than that of on the surface of implant and in the joint tissue. Conclusion This rahbit knee infection model mimic clinical situation. It is a successful model and provides an effective method for the e-valuation of new treatment for biomaterial centered infection.     

RNAⅢ抑制肽抑制葡萄球菌在人工关节材料表面粘附的实验研究

[目的]通过体外实验验证RNAⅢ抑制肽(RIP)能否抑制葡萄球菌在人工关节材料表面黏附,探讨其用于人工关节感染治疗的可行性。[方法]制作超高分子聚乙烯、钛合金和钴铬钼合金试样,葡萄球菌经FITC标记,人工关节材料试样消毒后接种FITC标记的葡萄球菌,每种试样4组,分别为空白组、RIP组、左氧沙星组和联合组,将含有细菌、试样和药物的24孔板在37℃下孵育30min后,用荧光显微镜观察。[结果]三种材料的用药组细菌光点计数(P<0.001)和覆盖面积(P<0.05)均显著低于空白组;左氧组细菌光点计数少于RIP组,但两组的细菌覆盖面积无差别;联合组光点计数和细菌覆盖面积均少于左氧组和RIP组,差别显著(P<0.01)。[结论]RIP可以抑制表皮葡萄球菌对关节假体材料表面的粘附,如果与抗生素联合应用可以起协同作用。     

3个以上大关节同期置换围手术期安全性分析

[目的]对2001年9月～2006年5月期间在本科手术的12例3个以上大关节同期置换的患者在围手术期的安全性进行回顾性研究。[方法]总结患者的手术时间、失血量、输血量、围手术期的生命体征变化、并发症发生率等指标，以对手术的安全性进行评价。[结果]12例患者（39个关节）手术，平均手术时间9h8min／例（6h25min～12h）；失血量平均3140ml（1000～5600m1）。1例患者术后当天出现一过性低血压，加快补液速度后逐渐恢复正常；其余患者生命体征平稳。[结论]多关节同期置换只需一次麻醉，一次住院，完成多个手术，花费少，康复快。尽管手术难度大，创伤较大，但只要严格选择病例，术前、术中、术后处理得当，并发症发生率并未过度升高。     

血肿在硬膜外瘢痕粘连形成中作用的探讨

为减少术后硬膜外神经根瘢痕粘连，研究血肿在瘢痕形成中的作用。方法兔２５只行Ｌ３、Ｌ５、Ｌ７间隔三处的椎板切除，术后硬膜外置管生理盐水冲洗７２小时，另二处分别为单纯引流和空白对照。术后３天、２、４、８、１２周取材，观察硬膜外瘢痕形成过程。